泰国茉莉香米品种鉴定及纯度检验方法（一）

1、泰国茉莉香米品种鉴定及纯度检验方法（一） 1 范围 本标准规定了泰国茉莉香米品种鉴定和纯度检验的dna检验法、感官检验法和水煮检验法。 本标准适用于泰国茉莉香米中香米法定品种kdml105和rd15的鉴别和纯度检验。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不行少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括全部的修改单)适用于本文件。 gb/t 6682分析试验室用水规格和实验办法 sn/t 0798进出口粮油、饲料检验名词术语 sn/t 0800.1进出口粮油、饲料检验抽样和制样办法 sn/t 1193基因检验试验室技术要求 3 术语

2、和定义 sn/t 0798界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 泰国茉莉香米thai jasmine rice; thai hom mali rice; thai frangrant rice 经泰国农业局、农业部和合作社注册的非糯性芬芳水稻品种kao dok mali 105或rd15的稻谷经碾磨获得的糙米或精米。 3.2 品种纯度vatietal purity 本品种的质量占试样的百分率。 3.3 聚合酶链式反应polymerase chain reaction; pcr 用于扩增位于两段已知序列之间dna (deoxyribonucleosidea acid，)的办法。模板dn

3、a经过高温变性成单链，在dna聚合酶和相宜的温度下，两条互不互补的寡核苷酸片段即引物分离与模板dna两条链上的一段互补序列发生退火，接着在dna聚合酶的催化下以4种dntp为底物，使退火引物得以延长，如此反复变性、退火和dna合成这一循环，使位于两段已知序列之间的dna片段呈几何倍数扩增，经25个30个扩增循环，扩增倍数达到约106。 3.4 随机扩增多态性分析random amplification polymorphic dna; rapd 利用一系列随机罗列的(通常为十聚体)为引物，对所讨论的基因组dna举行pcr扩增。扩增产物通过或琼脂糖凝胶电泳分别后，经eb染色或发射自显影来检测扩增

4、产物dna片段的多态性，这些扩增dna片段的多态性反映了基因组相应区域的dna多态性。 4 dna检验法 4.1 原理 通过rapd中ri2-449目标条带和一般pcr中ri5s目标条带是否阴性来鉴定样品是否为泰国茉莉客采法定品种；通过对样品中随机扫。选的44个米粒分离检验来计算样品中泰国茉莉香米的品种纯度。 4.2 抽样与制样 根据sn/t 0800.1的规定执行。 4.3 试剂和材料 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。试验用水符合gb/t 6682的要求。 4.3.1 检测引物序列 ri2：5'tgctgcaggt3' ri5-f：5'atacgctcgcata

5、tatctac3' ri5-r：5'gaacggactccaagatgcaa3' 4.3.2 tagdna聚合酶(taq , thermus aquatzcu，水生栖热菌)。 4.3.3 dntps (deoxyribonucleoside tripn osphate,脱氧核苷酸三磷酸)：datp(deoxyadenosine triphosphate，脱氧腺苷三磷酸)，dttp(deoxythymidine triphosphate，脱氧胸苷三磷酸)、dctp(deoxy-cytidine triphosphate，脱氧胞苷三磷酸),dgtp(deoxyguanosi

6、ne triphosphate，脱氧鸟苷三磷酸)。 4.3.4 琼脂糖：电泳纯。 4.3.5 。 4.3.6 。 4.3.7 。 4.3.8 70。 4.3.9 dna分子量标准品(100 bp2000bp)。 4.3.10 裂解液：1 ctab(cetyltrithylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化溴)，0.05 mol/l tris-hcl(ph8.0)tris-: tris(hydroxymethyl) aminomethane，0.7 mol/l nacl, 0.01 mol/l edta(ph8.0,ethylene diaminetetraacetic aci

7、d，)。 4.3.11 te缓冲液(tris-cl、edta缓冲液):10 mmol/l tris-hcl(ph8.0)，1 mmol/l edta (ph8.0)。 4.3.12 10×pcr缓冲液：100 mmol/l kcl，160 mmol/l (nh4)2 so4，20 mmol/l mgso4，200 mmol/l tris-hcl(ph8.8), 1 triton x-100(t-octylphenoxypolyethoxyethanol，辛基苯氧基聚乙氧乙醇)，1mg/ml bsa(bovine serum albumin，牛血清蛋白)。 4.3.13 电泳缓冲液；t

8、ris 54 g，27.5g，0.5 mol/l edta·tris-hci (ph8.0) 20ml，加蒸馏水至1000 ml；用法时10倍稀释。 4.3.14 溴化乙锭储藏液：用水配制成10 mg/ml。 4.3.15 加样缓冲液：0.25溴酚蓝，40%(质量浓度)蔗糖水溶液。 4.3.16 酶切缓冲液：10 mmol/l tris-hcl(ph7.5),10 mmol/l mgcl2，50 mmol/l nacl, 0.1mg/ml bsa。 4.4 仪器设备 4.4.1dna热循环仪。 4.4.2 核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计。 4.4.3 恒温水浴锅。 4.4.4 离心机：离心力12