胶体金免疫层析法在尿检中的应用体会

1、胶体金免疫层析法在尿检中的应用体会林一民(重庆市肿瘤研究所临床检验中心400030)摘 要：目的 探讨胶体金免疫层析法(GICA)在尿检中的应用。方法 从 GICA的原理、操作、结果判断及注意事项等方面分析胶体金早孕试纸在尿检中 的影响因素。结果胶体金早孕试纸是通过测定尿P-HCG快速诊断早孕的常用 临床检测手段，卩HCG的升高或降低还可见于早孕之外的其他情况，应引起重 视。结论 胶体金早孕试纸测定尿P-HCG只能作为辅助诊断手段，需结合临床 症状及其他检查才能作出准确判断。体金免疫层和去；早孕；P-HCG人绒毛膜促性腺激素(human chronic gonadotropin,HCG )作为

2、一种生殖内分泌激素，其检测正在临床实验室展开,其对于妊娠或急腹症的辅助诊断及 随访都有重要作用。测定HCG目前应用比较多的检测方法有单克隆抗体酶免 疫法、放射免疫法、化学发光法、免疫胶体金试纸法。又以胶体金免疫层析法(GICA )检测尿卜HCG应用最为广泛，因其方法简便、快捷，特异性好，灵敏 度高，结果明显，对患者无损伤，污染机会少，不需仪器设备，可避免与HCG 有类似结构的其他糖蛋白起交叉反应；也可作用于了解胚胎生长情况，观察病情进展和疗效；并对妊娠相关疾病的诊断、鉴别和临床观察具重要价值。本文就GICA在尿检中的临床应用做简要分析。1材料与方法1.1材料 艾康早早孕检测试纸购自艾康生物技术

3、（杭州）有限公司。1.2方法单克隆抗体胶体金法1.3原理 胶体金双抗体夹心法 金标为鼠源性抗p-hCG单克隆抗体与胶体 金的复合物，测试线包被羊抗whCG多克隆抗体，控制线包被羊抗鼠多克隆抗 体。当待测尿液或血清中含有一定量的hCG时，样本通过层析作用到达金标位 置hCG的p链和单抗卩hCG发生免疫反应,再层析到测试线位置,hCG的a链 和多抗a-hCG发生免疫反应，这样就把金标通过hCG桥连到测试（T ）线上， 达到一定量后,金标显色为肉眼可见的水平，多余的金标继续泳动到控制（C） 线位置，由于多抗鼠和鼠源性抗p-hCG单抗发生免疫反应，从而桥连胶体金显 色，这样就得到阳性结果。当尿液或血清

4、中不含hCG时，金标和测试线抗体不发生桥连，而控制线 则显色，这样就得到了阴性结果。1.4检测结果阳性、阴性、弱阳性。2讨论HCG是由滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素，由a , 0亚单位组成，a亚单 位的氨基酸排列顺序和黄体生成素（LH 1促卵泡成熟激素（FSH 1促甲状腺 成熟激素（TSH ）的c（亚单位大体相同,相互间可发生交叉反应。而p亚单位结 构特异，不存在于其他糖蛋白激素中，根据这一特点制备的p-HCG单克隆抗体， 可将上述激素之间的交叉反应降低到最直。现临床上多采用测定血和尿中 的特异性卩HCG协助诊断早孕，也可辅助诊断如异位妊娠、滋养细胞疾病等妊 娠相关疾病。胶体金免疫层析法在尿检

5、中应注意以下几个问题。2.1阳性 一般表示早期妊娠，T线（测试线）早期随HCG增高而加深。宫外 孕，生殖系统疾病如葡萄胎、恶性葡萄胎、绒癌、睾丸畸胎瘤，某些癌症如支 气管癌、胃癌也可分泌HCG ,试纸法呈阳性。另据报道，脑垂体疾病、甲状腺 机能亢进、卵巢蠱肿也可致HCG阳性结果。尽管p链为HCG所特有，但与LH 仍有部分交叉反应，在LH增高时，仍可假阳性，因此，育龄妇女检查时应避开 排卵期。2.2阴性 一般表示非妊娠。早期妊娠因时间太短、异位妊娠可能因为尿液中 PHCG低于25u/L而呈阴性。结合病史、临床表现、血尿HCG综合分析及影 像学检查等辅助诊断，对于早期发现异位妊娠非常重要。大量饮水

6、、服利尿剂 或其它药物可使HCG含量下降，引起假阴性。在葡萄胎等妊娠滋养细胞疾病 的患者中，其滋养细胞高度增生，产生大量HCG ,血、尿中HCG均明显增高, 其浓度可达正常妊娠的100倍。过量HCG分别与试纸中胶体金标记的鼠抗人p -HCG单克隆抗体和羊抗人HCG多抗血清结合，而不再形成金标记的p-HCG 抗体HCG羊抗人HCG多抗"夹心复合物"，不再出现阳性结果，此现象称"HOOK"现象，即钩状效应。为杜绝钩状效应导致的假阴性，对于临床疑 诊为葡萄胎、绒毛膜癌等滋养细胞疾病的尿标本，在检测HCG时，应将标本 连续倍比稀释后测定，以提高阳性检出率，防止错

7、检、漏检的发生。2.3弱阳性 胶体金免疫层析法测定HCG灵敏度高，最低检出限为25u/L , 试纸条可在受精后1周或停经前1周作出早孕诊断。如早期妊娠时间太短,尿 检可为弱阳性。高浓度HCG引起抗原过剩现象,应该稀释尿液后再重新检测， 不完全流产、过期流产或不完全流产时间过长，分娩恢复期，异位妊娠可呈弱 阳性。3.1标本采集与处理采用一次性洁净容器收集新鲜尿样，以晨尿为佳。浑浊 尿需离心取上清液检测。若为蛋白尿、血红蛋白尿，应加热煮沸3min后，离 心取上清液检查。不宜使用严重的血尿、菌尿标本检查HCG。饮水可能稀释标 本，取样前lh不宜大量饮水。3.2温度 尿标本若不能及时送检，在2

8、6;C 8°C冷藏可保存48ho长期保存需 冷冻于20°C ,忌反复冻融。试剂应储存于4°C 30°C密封干燥避光处，以免 抗体失效，忌冷冻储存或在有效期后使用。从冰箱刚取出的试纸条应待恢复至 室温（20°C 30°C）才打开密封，可避免反应线模糊不清。3.3操作过程 测试时将试剂条按箭头方向插入尿中至少5s后取出平放于干 净平整的台面上；亦可以不取出，一直放在尿杯中直到读结果。注意试纸条插 入尿液的深度不能超过试剂条的标记线，避免吸入过量的尿液，造成HCG抗 原过剩，引起假阴性结果。测试结果在3min内读取，lOmin后测定无效。当

9、 测试线和控制线均不显色时,表示试剂盒失效或其他原因造成，如排尿减少造 成尿液浓缩，其比重大于1.030 ,当尿中尿素、各种盐类达到或接近饱和时， 就会造成试纸条的反应失败。因此，在日常工作中发现对照线没有出现时，在 排除试纸条有质量问题后，还应考虑是否由于尿液浓缩造成,可将尿标本稀释 后再测定，避免发出错误报告。如操作不当或试剂失效，无论卩HCG含量多少 均无C（控制）线、T （测试）线。每批试验均应设定阳性对照和阴性对照。在试验最佳检测时间时发现,高浓度样品在lmin时就可呈色得出结果， 而低浓度特别是接近最低检出限时，则需稍长时间（大于或等于3min ）才能 得出检测结果。在2min时，

10、观察阳性样品，有可能还未呈色而看似阴性结果； 但在5min时，呈色深浅一致。检验者最好在5min时观察结果得出准确报告， 否则可能出现假阴性结果。从临床实践来看，GICA具快速、简便、不需特殊设备、并且可单份测定、 试剂易于保存及患者可自检等优点。同时也存在后带现象及不能定量等不足。 尿p-HCG的检测只能作为辅助诊断手段，早期诊断正常妊娠、先兆流产、异位 妊娠和某些滋养细胞层疾病，需结合临床症状及血清p-HCGs B超等其他检测 方能作出准确判断。参考文献：1 丛玉隆，王丁.当代检验技术与临床M北京:中国科学技术出版社， 2002 : 298-299.2 叶应妩，王毓三，申子瑜全国临床检验操作规程M(第3版)南京: 东南大学出版社，2006 : 300.3