超氧化物歧化酶SOD标准曲线测定试剂盒产品说明书中

1、超氧化物歧化酶(SOD)标准曲线测定试剂盒产品说明书(中文版)主要用途超氧化物歧化酶(Superoxide ismutase, SOD)标准曲线测定试剂是一种旨在通过比色测定高度可溶性 的四座盐在超氧化物阴离子的还原作用下产生的水溶性甲膻染料所获得的吸光值，来对应构建已知超氧化 物岐化酶活性单位标准曲线的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于 各种细胞和组织样品中超氧化物歧化酶实际活性单位计算的参照依据。产品严格无菌，即到即用，操作简 捷，性能稳定。技术背景超氧化物岐化酶(SOD),是体内的重要金属酶抗氧化剂，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化氢(H2O2)

2、和分子氧(02)。超氧化物歧化酶活性检测试剂使用高度水溶性的四座盐：WST-1 ( 2-(4-Iodophenyl)-3- (4-nitrophenyl ) -5- ( 2,4-disulfophenyl ) -2H-tetrazolium , monosodium salt) ; 2-(4 碘苯基)-3- (4-硝基 苯基)-5- (2,4-苯二磺酸)-2H-四座单钠盐。WST-1灵敏度高,氧化态的吸光度低，呈浅黄色，水溶性好， 可以100%被SOD抑制，检测不受 pH影响，背景噪音低。WST-1被O2还原(呈现深黄色)的还原率和黄嗯吟氧化酶的活性成线性关系，该反应能被超氧化物岐化酶(SOD

3、)抑制(完全抑制，WST-1呈现无色)。利用SOD能抑制 WST-1和O2一的氧化还原能力来测定 SOD的活性(波长为450nm的比色分析)。产品内容反应液(Reagent A) 染色液(Reagent B) 催化液(Reagent C) 稀释液(Reagent )10毫升补充液(Reagent E) 标准液(Reagent F)50微升25微升2毫升1毫升200微升产品说明书保存方式保存在20c冰箱里；染色液(Reagent B),避免光照，有效保证 6月用户自备1.5毫升离心管：用于反应液配制的容器2.2毫升离心管：用于反应液配制的容器 酶标板或比色皿：用于比色分析的容器 酶标仪或分光光度

4、仪：用于比色分析实验步骤实验开始前，将20c冰箱里的试剂盒中的试剂置入冰槽里融化，然后移出 2毫升 反应液(Reagent A) 到新的2.2毫升离心管，加入10微升 染色液(Reagent B),轻柔混匀后，置于暗室里，标记为 染色工 作液。然后移出200微升 稀释液(Reagent )到新的1.5毫升离心管，加入5微升 催化液(Reagent C), 轻柔混匀后，置于冰槽里，标记为 催化工作液。然后进行下列操作。一、二倍法系列稀释1 .设定好酶标仪并预热：波长 450nm2 .取出待测的 标准液(Reagent F),置于冰槽里3 .准备1个96孔板，做好1至5号标记，置于冰槽里4 .按下

5、列顺序依次加入下列反应液到96孔板的标记样品孔里：1)分别移取20微升 稀释液(Reagent )到96孔板的2至5号孔里2)移取40微升 标准?R ( Reagent F)到96孔板的1号孔里3)用200微升枪头抽去20微升1号孔里的 标准?( Reagent F )到96孔板的2号孔里4)用200微开枪头上下抽吸混匀 2号孔5)用200微升枪头抽去20微升2号孔里含有标准液(Reagent F )的稀释液到96孔板的3号孔里6)用200微开枪头上下抽吸混匀 3号孔7)用200微升枪头抽去20微升3号孔里含有标准液(Reagent F )的稀释液到96孔板的4号孔里8)用200微升枪头抽去2

6、0微升4号孔里含有标准液(Reagent F)的稀释液，扔掉9) SOD实际浓度见下表管号稀释液(Reagent )标准液(ReagentF)SOD浓度(单位/毫升)10微升40微升12220微升20微升1号管6320微升20微升2号管3420微升20微升3号管1.5520微升00建立反应体系1.分别加入200微升含有 反应液(Reagent A)和 染色液(Reagent B)的 染色工作液 到96孔板的 1至5号孔里2.分别加入20微升含有 催化液(Reagent C)和 稀释液(Reagent )的 催化工作液到96孔板的 1至10号孔里三、标准样品测定1 .轻轻摇动96孔板，混匀反应液

7、2 .放进37c培养箱孵育20分钟，避免光照3 .即刻放进酶标仪检测，波长为 450nm四、构建SOD标准曲线1 .横座标(x轴)为每毫升SOD单位浓度2 .纵坐标(y轴)为标准样品读数(吸光单位 OD值)3 .根据测得数据构建曲线注意事项1 .本产品为5次操作2 .操作时，须戴手套3 .操作时，须在4c下进行4 .染色液(Reagent B)为浅黄色，如果有结晶析出，放进37c温育数分钟即可。染色液(ReagentB) 一旦被还原，呈现可见黄色或深黄色；如果含有 SOD,则会呈现为无色5 .孵育时，避免光照6 .孵育后即刻比色测定7 .样品SOD实际活性单位定义：每毫克样品蛋白或每毫升样品含有X单位SOD量8 . 标准液(Reagent F)的活性单