维生素C的定量测定—二氯酚靛酚滴定法

1、o维生素C的定量测定一2, 6-二氯酚靛酚滴定法 实验目的1,学习定量维生素C的原理和方法2,掌握微量滴定技术实验原理维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺乏时会产生坏血病，因此, 又称为抗坏血酸。它对物质代谢的调节具有重要的作用，近年来发现它还能增强 机体对月中瘤的抵抗力，并具有对化学致癌物的阻断作用。维生素C是具有L-系糖构型的不饱和多羟基化合物，属于水溶性维生素。 它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（桔类、草莓、山楂、辣椒等）的含量 都很丰富。维生素C具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时， 维生 素C易被氧化而破坏。在中性和微酸性环境中，维生素 C能将染料2, 6二氯

2、 酚靛酚还原成无色的还原型的2, 6二氯酚靛酚，同时将维生素 C氧化成脱氢 维生素Co氧化型的2, 6二氯酚靛酚在酸性溶液中呈现红色，在中性或碱性 溶液中呈兰色。当用2, 6二氯酚靛酚滴定含有维生素 C的酸性溶液时，在维 生素C尚未全被氧化时，滴下的2, 6二氯酚靛酚立即被还原成无色。但当溶 液中的维生素C刚好全部被氧化时，滴下的2, 6二氯酚靛酚立即时溶液呈红 色。所以，当溶液由无色变为微红色时即表示溶液中的维生素C刚好全部被氧化，此时即为滴定终点，从滴定时 2, 6二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以计算 出被检物质中还原型维生素 C的含量。其化学反应式如下:-可编辑修改-抗坏血酸;二 o o H

3、10 H H H脱氢抗坏血酸仪器、试剂（一）仪器：研钵、天平、容量瓶（100ml ）、量筒、移液管、锥形瓶（50ml ）、 微量滴定管、漏斗（二）材料、试剂1、新鲜蔬菜或新鲜水果2、1%草酸溶液1g草酸溶于100ml蒸储水中3、2%草酸溶液2g草酸?§于100ml蒸储水中4、标准维生素C溶液准确称取20mg纯维生素C粉状结晶于1%草酸溶液中，稀释至100ml , 再取其中10ml稀释至100ml ,即得0.02mg/ml的维生素C溶液。在使用前临时配制-可编辑修改-o5、0.02%2 , 6二氯酚靛酚溶液溶解50mg2 , 6二氯酚靛酚于约200ml含有52mg的NaHCO 3的热

4、水中，冷后稀释至250ml ,过滤，装于棕色瓶中，放入冰箱中保存。使用时用 维生素C标准液标定其浓度。实验步骤（一）2, 6二氯酚靛酚溶液的标定：取5ml维生素C标准液及5ml1%草酸溶液于50ml的锥形瓶中，用配制好 的2, 6二氯酚靛酚溶液于微量滴定管中滴定至粉红色出现，并保持 15s不褪 色，即滴定终点，此时所用染料的体积相当于 0.1mg维生素C,由此可求出每 ml2 , 6二氯酚靛酚溶液相当于维生素 C的mg数。（二）称取新鲜蔬菜或水果（要有大、中、小各部分的代表，洗净，除去不 可食部分，切碎，混匀）约10克，于研钵中，加入等体积的 2%草酸溶液研磨 成浆状，得匀浆液。将匀浆液移入

5、100ml容量瓶中，可用1%草酸溶液帮助转 移，加入30%Zn （AC） 2和15%K4Fe （CN） 6溶液各5ml ,脱色，然后用1% 的草酸稀释至刻度，充分摇匀，静止几分钟后过滤。（弃去最初流出的几毫升溶 液）（三）用移液管吸取滤液5或10ml于50ml的锥形瓶中，立即用标定过的2, 6二氯酚靛酚溶液滴定，直至溶液呈浅粉红色15s不褪色为止。记录所用 染料的ml数。为了避免其它物质的干扰，滴定过程不得超过 2min。（此步骤 平行作23次）（一）计算维生素C含量（mg/100g 样品）=（VT/W） X100-可编辑修改-式中：V为滴定样品所耗用的染料的平均 ml数T为1ml染料相当于维

6、生素C的mg数W为滴定时所用样品稀释液中含样品的 g数注意事项1 .整个滴定过程要迅速，防止还原型的维生素 C被氧化。滴定过程一般不超 过2min。滴定所用的染料不应少于1ml或多于4ml ,若滴定结果不在此范围， 则必须增减样品量或将提取液稀释；2 .本实验必须在酸性条件下进行，在此条件下，干扰物反应进行很慢；3 .提取液中尚含有其它还原性的物质，均可与 2, 6二氯酚靛酚反应，但反 应速度均较维生素C慢，因而，滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能 一滴一滴地加入，并要不断地摇动锥形瓶直至呈粉红色15s不褪色为终点；4 .若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，需脱色，可用白陶土、30%Zn (AC)2 和 15%K4Fe(CN)6 溶液等，本实验用 30%Zn (AC)2 和 15%K4Fe (CN) 6溶液脱色，若色素不多，可不脱色，直接滴定。5 .在生物组织和组织提取液中，维生素C还能以脱氢维生素C及结合维生素C 的形式存在，它们同样具有维生素 C的生理作用，但不能将2, 6二氯酚靛酚 还原脱色.6 . 2%草酸有抑制抗坏血酸酶的作用，而 1%的草酸无此作用 思考题1 .指出34种维生素C含量丰富的物质。2 .