大肠菌群试验报告

1、文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持大肠菌群实验报告篇一：大肠杆菌检测实验报告国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数实验目的实验原理：国标法操作的原理实验器材：培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管， 试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布， 脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套， 超净台实验药品：磷酸盐缓冲液，蒸储水，LB培养基，琼脂，5%NaOH5%HCl 实验步骤：10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平 皿，500ml大烧杯1个，100ml量筒进行洗涤，然后一起放 入高压蒸汽灭菌锅中在 121摄氏度条

2、件下灭菌 20min。灭完 菌后烘干，完成后放入超净台中。用酒精擦拭超净台,紫外消毒30min1:用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。2 :用量筒量取125ml的蒸播水1文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持.加入该锥形瓶中，制成培养基。3:用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口， 用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。4:火完菌后放入超净台中备用。三：1:取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入 49ml PBS2:将1ml样品加入

3、到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。3:取4只试管，编号144:用无菌移液管分别向 4只试管中加入9ml的PBS5:用1ml无菌移液管从样品中移取 1ml菌液加入到1 中,震荡试管使菌液均匀。 6 :用1ml无菌移液管从1号试 管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀7:用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取1ml 细菌溶液，加入 3中，摇匀以此类推直至 4只试管中均加入了细菌溶液。9:取4只平皿，编号 1410:分别用4只无菌移液管从这 4只试管中移取1 m 1 的菌液置于4只平皿中，加入4 5 5。摄氏度温度下的培 养基，约15 mm厚度。缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合 均匀；

4、待培养基冷凝后倒置。2文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持11 :将培养基在3 6摄氏度条件下培养12小时。12:取由培养皿，选择细菌个数在30至300个之间的平皿数细菌的个数。四：实验结果（记得在操作过程和得到结果时拍照）1号，2号菌落个数多不可计，舍弃4号平皿中菌落数目小于 10 cfu ,舍弃3号平皿中菌落分布较均匀，数 3号中的菌落数，一共 有 210 个 cfu 。计算样品中细菌浓度为：1.05 X 105 Cfu/ml点评超净台中的实验步骤讲述详细，明确，不错。前面的步 骤叙述有点乱，建议按照如下标题重新调整顺

5、序。实验步骤：1、仪器清洗将烧杯，培养皿、试管等仪器用洗衣粉清洗，超声5min.然后用清水清洗，超声 5min,最后用三蒸水清洗，放入烘箱 中烘干。2、培养基配制精确称量。放入锥形瓶中，加入。mL蒸播 水，摇匀3,灭菌包扎、灭菌，烘干备用3文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持3、超净台中的操作（如上）除了实验步骤和结果，还要有讨论和注意事项例如：实验讨论：1、评价该方法（操作简易程度，灵敏度如何，适用性）2、为何选择细菌个数在 30至300个之间的平皿数细 菌的个数？注意事项比如各种仪器的使用注意事项，以及保持洁净，防止染

6、 菌等。篇二：大肠杆菌实验报告大肠杆菌紫外线诱变及抗药性菌株筛选0740063阿鹰兰1 .前言抗生素能破坏细菌细胞壁的结构，使细菌的繁殖和生长 受到抑制。但莫些细菌对抗生素表现由抗性，原因是其基因 发生了改变，产生能抵抗抗生素的性状。在自然情况下，细 菌的基因突变率很低，而且突变是不定向的，因此在自然条 件下，想要获得有抗性的细菌是很困难的。当给与适当的物 理条件时，其突变率会大大增加。如当用a射线、B射线、 Y射线、X射线、中子和其他粒子、紫外线、微波等物理因 素辐射时，能够促进遗传物质突变。DNA对紫外线（uy有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的喀呢，它比喋吟更为敏感。4文档来源为：从网络收集

7、整理,word版本可编辑.文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持紫外线引起DNA结构变化的形式有 DNA链断裂、碱基破坏、 胸腺喀陡二聚体等。因此，紫外线通常作为诱变剂，用于微 生物菌种选育。一般细胞分裂越旺盛，诱变剂量越大，突变 率高，诱变最有效的波长 253265 nni选择合适的诱变剂量 对于获得较高突变率十分关键，过高或过低的辐射剂量会导 致菌株死亡或诱变不充分而降低诱变效果。在紫外线诱变下，菌株发生不定向的突变，想要得到需 要的特向变异必须对诱变后的菌株做筛选。本实验想要得到 的是能够抵抗抗生素的菌株，因此可以用抗生素培养基作为 筛选培养基对菌种进行筛选。若菌株

8、没有发生定向突变，则 该菌株不能在抗性培养基上正常生长，只有发生了定向突变 才可能在筛选培养基上正常生长。紫外线对于菌株有诱变作用外，对菌株还有较强的致死 作用，因为紫外线改变了菌株的基因结构导致菌株无法正常 生长繁殖。因此，通过本实验的操作，在合适的照射剂量的设置下， 比较不同不同照射剂量下的致死效果和突变率，并初步分析 两者的相关性。在分析死亡曲线和诱变率曲线的基础上，能 了解诱变育种的机理和方法，为做进一步的诱变实验做准备。 2.材料和方法1.1 实验材料、仪器和试剂菌种：大肠杆菌仪器：超净台、离心机、高压灭菌锅、培养箱、磁力搅5文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.文档来源为

9、：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持拌器、培养皿、涂布器、移液管、移液器试剂：牛肉膏蛋白腺培养基相关试剂、硫酸卡那霉素水 溶液（50mg/ml）、生理盐水2.2实验方法普通培养基一一牛肉膏蛋白腺培养基（400ml）:牛肉膏5g蛋白腺10gNacl 5g琼脂20g蒸储水1000ml Ph7.0按配方配制好培养基后置于灭菌锅中115C 15min，倒平板，4 皿*15ml*5 组+2 皿*15ml=22 皿*15ml=330ml筛选培养基（200ml）:含抗生素50mg/Lo （卡那霉素属于 氨基糖昔类抗生素，能结合细菌核糖体的30S亚基上的16SrRNA阻断细菌蛋白质的合成。）牛肉

10、膏5g 蛋白腺10g Nacl 5g 琼脂20g 蒸播水 1000ml Ph7.0 硫酸卡那霉素水溶液（ 50mg/ml） 0.2ml , 按配方先不要加硫酸卡那霉素配制然后 115 c 15min灭菌， 取由培养基后冷却至 60 c时将硫酸卡那霉素 0.2ml加入培养 基中，充分震荡混匀，倒平板，2皿*15ml*5组+2皿*15ml=12 皿 *15ml=180ml 108 个/mL）固体培养：大肠杆菌划线或涂布接种于固体培养基，37 c 培养 24-48h。菌悬液：用适量生理盐水刮洗菌落，倒入一个无菌小 三角瓶（或试管）中，充分振荡使菌体散开，得到菌悬液。6文档来源为：从网络收集整理,wo

11、rd版本可编辑.文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持.菌悬液浓度用血球计数板计数使用细菌计数板或血球计数板在显微镜下直接计数。将 菌液滴在血球计数板0. 1ml的计数格中，细菌被固定染色后，在显微镜下选择数由若干个小格中的细菌数目，（一般数125个小格），根据比例关系折算由单位体积菌液中细菌 的数量。血球计数板规格：计数格=4*4=16大格1大格=5*5=25小格小格体积 =0.05*0.05*0,1=0.00025mm3=2.5*10-7ml（ 长 *宽*高）计算方法例如：125格中90个细菌，则（90+125） + （2.5*10-7 ）个/ml=2.88*106

12、所以，125格中的细菌大约在 31（4格1个菌）一3125 （每个小格 25个菌）个。将紫外灯打开，预热 30min;取无菌培养皿（90mm含无菌大针），加入稀释好 的菌悬液8ml以覆盖培养皿底面为宜。 将待处理的培养皿置于诱变箱内的磁力搅拌仪上， 开启磁力搅拌仪旋纽进行搅拌1分钟，然后打开皿盖，分别处理10s、20s、40s、80s、160s （可以累积照射），照射完毕后先盖上皿盖，再关 闭搅拌和紫外灯；7文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持 每个照射剂量分别取 0.5ml分别稀释1000倍和100 倍，然后取稀释液 0

13、.1ml做普通培养基的涂布培养，每个处理两个重复；同时每 个照射剂量取0.1ml照射液直接做两个筛选培养基的涂布培 养。 对照涂布培养：将照射的菌液稀释1000倍，在稀释液中取0.1ml做2个普通培养基涂布培养，2个筛选培养基的涂布培养。涂布要均 匀，培养基表面无液流。37 C培养24h后，计数，统计分析。对于筛选的抗性菌种进行验证、纯化。以辐射时间为横坐标，以存活菌落数的lg值为纵坐标，作紫外线对大肠杆菌致死效应曲线。列公式计算不同辐射剂量下的致死率。死亡率？照射前活菌数/ml?照射后活菌数/ml?100%照射前活菌数/ml计算并比较不同辐射剂量下大肠管杆菌的抗药突变率，并分析不同辐射剂量的

14、诱变效果差异原因突变率=筛选平板菌数/普通平板菌数*100%抗药性 菌株的筛选与纯化将一抗性克隆划线到一新的抗性平板上，与对照菌相比8文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持较，观察生长状况3.结果与分析3.1 实验结果记录及初步整理表1.大肠杆菌诱变初始数据照射时间0 10 20 40 80 160筛选培养基活菌数个/皿1 号 2 号平均 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 00 0 0 0 0 0 0 0 0 0 00 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0普通培养下稀释度100 10-2 10-3 10-2 10-3

15、 10-2 10-3 10-2 10-3 10-210-3普通培养基中菌数个/皿1 号 2 号 平均 5000 XX 366 25 2 2 0 5 40 0 05600 1820 251 64 0 5 0 0 0 0 05300 1820 251 44.5 1 3 0 2.5 20 0 0溶液浓度个 /ml 5.3*107 1.8*106 2.5*106 4.5*1041*104 3.5*103 0 2.5*103 2*105 0 03.2最佳照射时间的设置9文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持结合数据处理结果的图和表分析

16、，在10s的照射下，细菌死亡率达到了 95% 20s时达到了 99.9%,说明在20s内大 部分菌株已经死亡，而整个实验过程中未发生任何正突变， 可能与此有较大关系。已经有实验证实，当菌种死亡率达到 70%80%，突变率最大。所以在做进一步的实验中应该减 少照射剂量，或通过增多10s内的照射设置，或增大照射距离，因为时间太短可能导致控制实验的难度加大。使死亡率 变化曲线能突显由变化趋势。3.3筛选培养基选择筛选培养基是将发生突变的菌株从普通菌株中显现由 来并对其浓缩。该实验中的筛选培养基中的添加剂是硫酸卡 那霉素，若发生突变的菌株能对其显现由抗性，但这抗性也 是有一定范围的，若超过其抗性范围即

17、使发生突变也不能正 常生长。本实验选用的50mg/L,实验证明该浓度对于该菌种抗性选育来说已经过高，应该选择较低的浓度。可以在试验 前对该菌种的最低致死浓度做检测。将制备好的生发菌株溶 液涂布在含不同浓度硫酸卡那霉素的平板上，37 c培养24h,观察不同平板上的菌落数，并记录不同抗生素作用浓度。凡是在前一个低浓度平板上已长生菌落而在后一个较高浓度 平板上未长生菌落的，后一浓度即为莫种抗生素对生发菌株 的最低致死浓度【1】。表2.不同照射剂量下的存活率lg值和死亡率 照射时间 /s 0 10 20 40 80 16010文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.文档来源为：从网络收集整理,

18、word版本可编辑.欢迎下载支持存活菌浓度 5.3*1072.5*106 4.5*104 3.5*1032.5*103 0存活菌的 lg 值 7.72 6.40 4.65 3.54 3.39死亡菌浓度05.05*107 5.29*107 5.299*107 5.299*107 5.3*107致死率0 0.953 0.999 0.99(本文来自：小草 范文 网:大肠菌群实验报告)99 0.9999 14.小结与讨论(1)本实验通过对大肠杆菌进行紫外线照射，欲得到 抗性菌株，但由于照射剂量过大和抗生素浓度过高等原因未 得到任何一株抗性菌株。(2)通过本实验，得到了在28cm,下大肠杆菌的照射致死致

19、死曲线，可以依此曲线反回归在该照射条件下选择合 适的照射时间得到较高的突变率。(3)欲得到较高的抗性突变率，还可尝试改变培养温 度，有实验证实不同的温度培养会对细菌的突变率造成影响(4)欲得到较好的突变率还需要较优质的菌株。因为 菌株的突变主要是发生在遗传物质复制转录的过程中，所以 菌株的生理活性对突变效率会有很大影响，最好选择在对数 期的菌株。状况比较同步、易变异、重复性较好；同时为了 保证处理时具有一定的细胞浓度，以增加可变异细胞总数 ，11文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持故选用对数期的细胞进行处理。1涂国全，刘 姝

20、，黎循航,通过获得链霉菌抗性基因 突变株筛选梅岭霉素高产菌株J ,中国抗生素,XX, 27(6) : 321 - 325.2汪志芸 抗生素产生菌 AP19-1的鉴定及UV诱变育 种的研究D,浙江：浙江大学生命科学学院，XX, 29篇三：微生物实验报告：水中细菌总数和大肠菌群的检测实验六水中细菌总数和大肠菌群的检测摘要：本实验以测定公园河流水的细菌总数和大肠 菌群的数量，来测定特定地点的水质情况。初步介绍了一种 通用的方法来检测水源的健康指标，判定水体的质量。对该 实验点的水源作曲了定性的评价，以及关于试验中如何提高 梯度重复的精度的分析。关键字：河流水；细菌总数测定；大肠菌群；EMBW养前言各

21、种天然水中常含有一定数量的微生物。水中细菌总数 往往同水体受有机污染程度呈正相关，因而是评价水质污染 程度的重要指标之一。细菌总数是指1mL水样中所含细菌菌落的总数cfu/g(mL),可用稀释平板计数法检测。水中大 肠菌群的数量可用来判断水源是否被粪便污染，并可间接推 测水源受肠道病原菌污染的可能。特征：G-无芽胞杆菌，兼性厌氧、在 37 c 24h内能发醉 乳糖产酸、产气。多管发醉法12文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持.初发醉：适当稀释样品，乳糖发醉培养，产酸产气；分离培养：伊红美蓝（EMB平板上划线分离，由现紫色、粉

22、红色特征性菌落；复发醉验证：挑取特征性菌落进行乳酸复发醉验证。材料和方法牛肉膏蛋白腺琼脂培养基：用于水中细菌总数测定牛肉膏5g,蛋白腺10g, NaCl 5.0 g,琼脂8g,蒸播水1000ml; pH 7.0 乳糖胆盐蛋白月东培养基：用于初发醉1X：蛋白腺20g、牛胆盐5g、乳糖10g、0.04%澳甲 酚紫水溶液25mL （调pH值后加）、水1000mL、pH 7.2 7.4三倍浓缩液（3X）:除水以外，其余成分取三倍用量分装：1 X的培养基分装 9ml/管，3 x的培养基分装 5ml/ 管或50ml/瓶，均装上德汉氏小管。 灭菌条件：115c ,15minEMBt养基：用于大肠菌群菌落鉴定

23、脱水培养基，按说明书操作，水用量为90% 水源：紫竹院河水仪器： 高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种 环、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。试剂：牛肉膏，蛋白月东，NaCl,琼脂粉，伊红美兰琼 脂培养基、水、乳糖、0.04%澳甲酚紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂具体实验步骤：1 ）,相关器械的灭菌操作，以及前往13文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持紫竹院取少量的样品水。2),按照上述的配料，无菌操作配置培养基。-1-2-33),细菌总数的测定：取上述样品水，一次稀释 10,10,10,3 个浓度。对于每个浓度

24、，取1ml稀释液加入冷却 好的牛肉膏蛋白腺培养基中，立即混匀，每个浓度重复一次。将平皿倒置培养在 37 c的温箱24h,计算平皿的细菌总数。4),大肠菌群的测定：将样品水稀释成10,10,10,3 个梯度。实验结果与数据分析1,细菌菌落总数稀释浓度及菌落数组别1 2 平均10 12 4 80-1-210 0 0 010 0 0 0平板菌落状况报告方式选取最低稀释度下菌落数x稀释倍数菌落总数(cfug , cfu/ml均小于308.0 X 102,大肠菌群总数14文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持实验结果产酸产气紫黑色EM

25、B粉红色革兰-G氏染色结论阳性管数初发醉+ + +原溶液+ + + + + + + + + + + + + + +5+-01010ckMPN=MP播数3, EMB数据值计算 查表可得,10ml15文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持接种量最大的一管的水样 ml接种量最大的管：1ml每100ml水样中菌数最大可能值：23095%T信限值 上限：700下限：70水样的分析得由这样的结果：细菌总数：80个/mL大肠菌群数：2300个/L大肠菌群数占细菌总数：2.88%。根据我国生活饮用水卫生标准 GB5749-85规定细菌 总数不

26、超过100个，已达标。大肠菌群不得超过1000个，超标。经过严格的消毒处理，大肠杆菌不超过10000个，水样达标。结论：从上述的水样分析，我们可以得由此处的河流 水污染不是很严重，作为景观水，已经达到了标准，但是此 类水是不能作为饮用水的，可能存在一些粪便的污染，导致 大肠菌群的数量过高，倘若经过严格的消毒灭菌， 才能饮用。实验讨论：1,大肠菌群的定义是什么？、为什么要选择大肠菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌？大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用 语，它不代表莫一个或莫一属细菌，而指的是具有莫些特性 的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方16文档来源为：从网络收集

27、整理,word版本可编辑文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在 37c能分 解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群 细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和 阴沟肠杆菌等。而由于大肠菌群分布较广，在温血动物粪便 和自然界广泛存在。大量的调查研究表明，大肠菌群细菌多 存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染 的地方，而且人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自 然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外 界环境中则以大肠菌群其他型别较多。大肠菌群数的高低， 表明了粪便污染的程度，也反

28、映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者 或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会 有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌 污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作 对人体健康具有潜在的危险性。所以大肠菌群是评价食品卫 生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫 生工作中。2, EMBW养基含有哪几种主要成分？在检查大肠菌群时， 各起什么作用？EMB培养基主要包含以下几种物质：蛋白月东，乳糖，蔗糖，磷酸二氢钾，伊红 Y,美蓝，蒸储水。EMB培养基的机17文

29、档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑文档来源为：从网络收集整理,word版本可编辑.欢迎下载支持制就是靠微生物在发醉过程中，使培养基发生分解，产生大 量的氢离子，从而改变培养基的PH,由于提前添加的指示剂， 在PH值的改变下，就会发生颜色的变化，从而鉴定生长的 菌种。在检测大肠菌群的时候，蛋白腺提供了氮源，磷酸二 氢钾提供了磷元素和钾元素，实验应注意的问题以及改进：1 ,样品的问题由于本实验是一个检测的实验，存在一个严格灭菌的过 程。从采样，到最后的分析，整个过程不仅不能让其他杂菌 污染，而且还得保证样品中本身细菌的总数基本不损失。1 ),采样的器械必须是经过严格灭菌的，而且其本身的构造不会 对微生物的生存造成威胁。2),由于样品会处于密闭的过程，水中的含氧量会慢慢降低，所以对样品的处理应该尽快 处理。3),对于样品的稀释不应该用蒸储水，而应该用灭 菌的生理盐水，防止细菌吸水裂解死亡。4),整个接种的操作必须正确，不能杀死细菌，或者引入其他杂菌。2 ,关于梯度重复的问题本实验设计到一个很关键的问题，那就是梯度重复。对 于一个梯度的实验量的统计和处理，我们常常采用重复，来 解决其实验误差所造成的影响，但有些时候重复增加了大量 的工作量，却没有根本提高实验的准确性， 仅以本实验为例。 在对