洁净室环境控制与检测方法

1、洁净室环境控制与检测方法一、 目的对尘粒及微生物污染进行控制并监测， 使被控制的房间或区域达 到生产所需的洁净度要求。二、 相关术语1.洁净室（区） 指对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建 筑结构、 装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、 产生和 滞留的功能。其他相关参数如：温度、湿度、压力也有必要控制。2.洁净室状态（1）空态（as-built） 洁净室（区）在净化空气调节系统已安装完毕且功能完备的情况 下，但是没有生产设备、原材料或人员的状态。（2）静态（at-rest）静态a洁净室（区）在净化空气调节系统已安装完毕且功能完备的情况 下，生产工艺设备已安装、洁净室

2、（区）内没有生产人员的状态。静态b洁净室（区）在生产操作全部结束，生产操作人员撤离现场并经过20 min自净后。(3)动态(operational) 洁净室(区)已处于正常生产状态，设备在指定的方式下进行， 并且有指定的人员按照规范操作。3.气流形式(1)单向流(unidirectional airflow)沿单一方向呈平行流线并且与气流方向垂直的断面上风速均匀 的气流。与水平面垂直的叫垂直单向流(vertical unidirectional airflow )， 与 水 平 面 平 行的 叫 水 平 单 向 流 (horizontal unidirectional airflow)。(2)

3、非单向流(non-unidirectional airflow)具有多个通路循环特性或气流方向不平行的气流。4.洁净工作台 (clean bench) 一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。 其特点是自身 能够供给经过过滤的空气或气体， 按气流形式分为垂直单向流工作台、 水平单向流工作台等。5.洁净度 (cleanliness) 洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径悬浮粒子的统计数量来区分的洁净程度6.悬浮粒子(airborne particle)用于空气洁净度分级的空气悬浮粒子尺寸范围在0.1-1000 mm勺固体和液体粒子。 对于悬浮粒子计数测量仪， 一个微粒球的面积或体 积

4、产生一个响应值，不同的响应值等价于不同的微粒直径。7.菌落(colony forming units)微生物培养后，由一个或几个微生物繁殖而形成的微生物集落，简称CFU。8.浮游菌(airborne microbe)按照标准(GBT16293-2010)提及的方法收集悬浮在空气中的活 微生物粒子， 通过专门的培养基， 在适宜的生长条件下繁殖到可见的 菌落数。9.浮游菌浓度(airborne microbe concentration) 单位体积空气中含浮游菌菌落数的多少， 以计数浓度表示， 单位是CFU/m3或CFU/L。10.沉降菌(settling microbe)用标准(GBT 1629

5、4-2010)提及的方法收集空气中的活微生物 粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。11.沉降菌菌落数（settling microbe plate count）规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目， 以CFU/皿表示。三、 洁净室环境监测指标 温度、湿度、风速、静压差（预测试指标） 悬浮粒子、沉降菌、浮游菌。四、 预测试指标1.温度和相对湿度的测试 洁净室（区）的温度和湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18-26C，相对湿度在45-65%为宜）。2.静压差的测试洁净室与非洁净室之间的静压差应大于10 Pa;相邻不同洁净级 别的洁净室之间的

6、压差应大于5 Pa;洁净区与室外压差应大于12 Pa。3.风量、风速的测试（1）非单向流洁净室系统的各项实测风量及换气次数应大于各自的设计风量或换气次数，但不应超过20%;室内各风口的风量与各风口设计风量之差均不应超过设计风量的士15%（2）单向流净室实测室内平均风速应大于设计风速，但不应超过15%五、悬浮粒子测试方法在空态或静态测试时，悬浮粒子采样点数目及其布置应力求均匀， 并不得少于最少采样点数目；在动态测试时，悬浮粒子采样点数目及 其布置应根据产品的生产及工艺关键操作区设置。1.仪器光散射粒子计数器（用于粒径大于或等于0.5um的悬浮粒子计数）、激光粒子计数器（用于粒径大于或等于0.1u

7、m的悬浮粒子计数）2.最少采样点数目的确定方法（1）最少采样点数目公式NL=VA公式中：NL：最少采样点数A:洁净室或洁净区的面积（单位为m）注：在水平单向层流时，面积A可以看作是与气流方向呈垂直流 动的空气的截面积。（2）最少采样点数目表-最少采样点数面积 m2洁净度级别10010 000100 000300 000 10 20 40 100 200 400802066400 1000 20008002006363注：对于 100 级的单向流洁净室（区），包括 100 级洁净工作台，面积指的是送风口 表面积；对于 10 000 级以上的非单向流洁净室（区），面积指的是房间面积。3.采样点位置

8、（1）采样点一般在离地面0.8 m高度的水平面上均匀布置。（2）采样点多于5点时，也可以在离地面0.8-1.5 m高度的区域内分层布置，但每层不少于5点。采样点位置示意图4.采样次数的限定对任何小洁净室（区）或局部空气净化区域，采样点数目不得少 于2个，总采样点次数不得少于5次。每个采样点的采样次数可以多 于1次，且不同采样点的采样次数可以不同。5.采样量表-最小采样量最小采样量L/次洁净度级别10010 000100 000300 000 0.5 m5.662.832.832.83 5 m8.58.58.58.51 16.采样注意事项（1）对于单向流洁净室（区），粒子计数器的采样管口应正对气

9、 流方向；对于非单向流洁净室 （区），粒子计数器的采样管口宜向上。（2）布置采样点时，应尽量避开回风口。（3）采样时，测试人员应在采样口的下风侧，并尽量少活动。（4）采样完毕后，宜对粒子计数器进行自净。（5）应采取一切措施防止采样过程的污染。7.测试状态（1）空态、静态和动态三种状态均可进行测试。（2）空态或静态时，室内测试人员不得多于2人。8.测试时间（1）在空态或静态a测试时，对单向流洁净室（区）而言，测 试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于10 min后开始。对非 单向流洁净室，测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于30 min后开始。在静态b测试时， 对单向流洁净室 （区），

10、测试宜在生 产操作人员撤离现场并经过10 min自净后开始；对非单向流洁净室 （区），测试宜在生产操作人员撤离现场并经过20 min自净后开始。（2）在动态测试时，则须记录生产开始的时间以及测试时间。9.采样按照粒子计数器的操作规程，选择合适的粒径、采样量、采样时间及每个采样点的采样次数进行采样。10.结果计算（1）计算每个采样点的平均悬浮粒子浓度（粒/m3）（2）计算洁净室的平均粒子浓度（粒/m3）。（3）计算标准差SE（4）95%置信上限（UCL：UCL二M+t*SE表-95%置信上限的t分布系数采样 点数234567899t6.312.922.352.132.021.941.901.86

11、-注：当米样点数多于 9 点时，不需要计算 UCL11.结果评定判断悬浮粒子的洁净度级别应同时满足以下两个条件：（1）每个采样点的平均悬浮粒子浓度必须不大于规定的级别界限。（2） 全部采样点才悬浮粒子浓度平均值均值的95%置信上限必须不大于规定的级别界限表-我国洁净室（间）对悬浮粒子的技术要求（五个洁净度等级）药品生产质量管理规范（1998 年修订）无菌医疗器具生产管理规范丫丫0033-2000洁净度级别静态测试最大允许数 （个 /m3）洁净度级别静态测试最大允许数 （个 /m3） 0.5 m5m 0.5 m 5 m1003 50001003 50001000-1000-10 000350 0

12、002 00010 000350 0002 000100 0003 500 00020 000100 0003 500 00020 000300 00010 500 00060 000300 00010 500 00060 000表-ISO标准中洁净室及洁净区对悬浮粒子的技术要求ISO 等级序（N）大于或等于表中被考虑的粒径的最大浓度限值（pc/m 空气）0.1m0.2 m0.3 m0.5 m1 m5 mISO Class 1102ISO Class 210024104ISO Class 31 000237102358ISO Class 410 0002 3701 02035283ISO Cl

13、ass 5100 00023 70010 2003 52083229ISO Class 61 000000237 000102 00035 2008 320293ISO Class 7352 00083 2002 930ISO Class 83 520 000832 00029 300ISO Class 935 2000008 320 000293 00012.示例AIA2A3A5A6A7A8A9房间面积为80 m2(8 m*10 m)最少采样点数目：9采样点布置：代表采样点位置，旁边的数字代表采样编号 选择0.5mm粒径的粒子采样量为2.83 L采样时间设为1 min每个采样点采样次数为2次

14、在粒子计数器上设置参数，开始采样六、浮游菌测试方法1.仪器和试剂浮游菌采样仪、培养皿、大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）、沙氏培 养基（SDA、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器。2.最少采样点数目参照悬浮粒子测试方法。3.采样点的位置参照悬浮粒子测试方法。4.采样次数每个采样点一般采样一次。5.采样量不同洁净度级别的最小米样量见表。表-最小采样量洁净度级别米样量 L/次100100010 000500100 000100300 0001006.采样注意事项（1）对于单向流洁净室（区）或送风口，采样器采样口朝向应 正对气流方向；对于非单向流洁净室（区） ，采样口向上。（2）布置采样点时，应尽量避开尘粒较集

15、中的回风口。（3）采样时，测试人员应在采样口的下风侧，并尽量少活动。（4）应采取一切措施防止采样过程的污染和其他可能对样本的 污染。（5）培养皿在用于检测时，为避免培养皿运输或搬运过程造成 的影响，宜同时进行阴性对照试验，每次或每个区域取1个对照皿， 与采样皿同法操作但不需暴露采样， 然后与采样后的培养皿一起放入 培养箱内培养，结果应无菌落生长。7.测试状态（ 参照悬浮粒子测试方法 ）8.测试时间（ 参照悬浮粒子测试方法 ）9.采样及培养按照浮游菌采样器的操作规程进行采样。 全部采样结束后， 将培 养皿倒置于恒温培养箱中培养。采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配置的培养基经采样后，在30-35

16、C培养箱中培养，时间不少于2 d; 采用沙氏培养基（SDA配置的培养基经采样后，在20-25C培养箱 中培养，时间不少于5 d。10.结果观察及计算用计数方法得出各个培养皿的菌落数，并计算出每个测点的浮游菌平均浓度（CFU/m或CFU/L）。表-洁净室（区）浮游菌技术要求洁净度级别药品生产质量管理规范（1998 修订）3CFU/m1005-10 000100100 000500七、沉降菌测试方法1.仪器和试剂培养皿、大豆酪蛋白琼脂培养基温培养箱、高压蒸汽灭菌器。2.最少采样点数目（参照悬浮粒子测试方法、3.采样点的位置（参照悬浮粒子测试方法、4.采样次数（参照悬浮粒子测试方法、5.最少培养皿数TSA）、沙氏培养基（SDA、恒在满足最少采样点数目的同时，还宜满足最少培养皿数。表-最少培养皿数洁净度级别最少培养皿数1001410 0002100 0002300 00026.采样注意事项（参照悬浮粒子测试方法）7.测试状态（参照悬浮粒子测试方法）8.测试时间（参照悬浮粒子测试方法）9.