维生素B_1_B_2含量测定方法比较

1、13 Paul J. Nestel, Sylvia Pomeroy, Sally Kay, et al. Isoflavonesfrom red clover improve systemic arterial complianee but not plasma lipids in men opausal wome n J. Journal of Cli ni-calEn docri no logy &Metabolism, 1999, 84:895-898.14 Tetsu Akiyama, Junko Ishida, Sugura Nakagawa, et al.Geni ste

2、in, a s pecific i n hibitoro f t yros in e-specific p rote inkin asesJ. J ournal o f B iological C hemistry, 1987,262(12:5592-5595.15 Herman Adlercreutz. Phytoestrogens and breast cancerJ.Journal of Steroid Biochemistry & Molecular Biology, 2003, 83: 113-118.16 Jean-Christophe Le Bail, Yves Cham

3、pavier, Albert-JoseChulia, et al. Effects of phytoestrogens on aromatase, 3B and17 0 hydroxysteroid dehydrogenase activities and hu-man b reast c ancer c ellsJ. L ife S cien ces, 2000,66(14:1281-1291.17 G S Pope, P V Elcoate, Sylvia A, et al. Isolation of an oestrogenic isoflavone (biochanin A from

4、red cloverJ. Chemis-try andIn dustry, 1953,1092.18 E C Bate-Smith, T Swain, G S Pope. The isolation of 7-hydroxy-4'-methoxyisoflav one(form onon eti nf rom r ed c lo-ver(Trifoliumpratense L. and a note on the identity of pratolJ.Chemistry and Industry, 1953, 1127. 19G S Pope, H G Wright. Oestrog

5、enic isoflavones in red cloverand subterranean cloverJ. Chemistry and Industry, 1954, 1019.20 J Guggolz, A LLivi ngst on,E MBickoff. Detectio nofdaidze in, f ormonon eti n,g eni ste in, a ndbiocha ninA i nf oragesJ. J Agric Food Chem,1961, 9:330-332.21 E Wong. A newisoflav onefromredcloverJ.Chemistr

6、yand In dustry, 1961:1963-1964. 22E W ong. P rate nsein. 5,7,3'-trihydroxy-4'-methoxyisoflav oneJ. J. Orga nic Chemistry, 1963, 28: 2336-2339.23 SaburoTamura,Ching-FunChang,AkinoriSuzuki,etal.Isolati on a nd s tructure o f an ovel i soflav oned erivative i nr ed cloverJ. Agri Biol Chem, 1967

7、, 31(9:1108-1109.24 SaburoTamura,Ching-FunChang,AkinoriSuzuki,etal.Chemical studies on “ cloversickness ” P&rt Isolation and structural elucidati on of two new isoflav ono ids in red cloverJ. Agri Biol Chem, 1969, 33(3: 391-397.25AB Beck, J R Knox.Theacylatedisoflav oneglycosidesfromsubterranean

8、 clover andredcloverJ.Aust JChem, 1971, 241509-1518.26 David R. Biggs, Geoffrey A.La ne. Ide ntification ofisoflavones calycosin and pseudobaptigenin in trifolium pratenseJ. Phytochemistry, 1978, 17: 1683-1684.27 Xia n-guo H e, L on g-ze L in, L i-zhi L ian. A n alysis o f flavonoids from r ed c lov

9、er b yl iquid c hromatography-electrospray m assspectrometryJ. Journal of Chromatography A, 1996, 755:127-132.28 Long-ze Lin, Xian-guo He, Michael Lindenmaier, et al. LC-ESI-MS study of the flavonoid glycoside malonates of red clover (trifoliumpratense J. J Agric Food Chem, 2000, 48:354-365.29 Boriv

10、ojKlejdus, Dagmar Vitamvasova-Sterbova, Vlastimil Kuban.Iden tificati ono f i soflav one c onjugates i n r ed c lover (trifoliumpratense by liquid chromatography-mass spec-trometry a fter t wo- dime nsionals olid-phase e xtractio nJ. An alytica Chimica Acta, 2001,450:81-97.30 Eva de Rijke, Alberto Z

11、afra-Gomez, Freek Ariese, et al.Determ in ati on o f i soflav one g lycoside m alon ates i n t rifo-lium p rate nse L . (red c lover e xtracts: q uan tificati ona nd stability studiesJ.Journal of Chromatography A, 2001,932:55-64.收稿日期:2003-09-01基金项目：云南省教育厅资助课题(0112440维生素B 1、B 2含量测定方法比较郭亚东1,马银海2,李燕华1,

12、李 皤1(1.昆明医学院药学院,云南 昆明650031; 2昆明师范高等专科学校，云南 昆明650031摘 要:目的:比较维生素B 1、B 2含量测定方法。方法：采用紫外分光光 度法中三种不同方法测定维生素B 1、B 2含量。结果：1、按E值测标示量 维生素B 1:98.3 2.51,维生素B 2:94.8 (±308复合维生素B片中 维生素B 1:102.1 1d70, 维生素B 1平均回收率为100.4%,RSD为2.13%( n=6,维生素B 2平均回收率为 94.9%, RSD为6.5%(n=6。2、标准曲线法 维生素B 1、B 2浓度分别在318、 18卩g/m范围内，均呈

13、良好线性关系，标示量分别为:102.9 ±661,98.4 0±52。3、双 波长法测维生素B 1标示量:94.2 ±97。结论:三种方法用于维生素B 1、B 2含量测定，操作简便、快速、准确，精密度好。关键词:紫外分光光度法；维生素B 1；维生素B 2;复合维生素B片Comparis on in Determ in atio n Methods of Vitamin B 1, B 2GUO Ya-do ng 1,MA Yin-hai 2,LIYan-hua 1,LIFan 1(1.K unming Medical College, Kunming650031,

14、China ;2.K un mi ng NormalCollege, Kunming650031, Chi naAbstract Objective:To compare the determ in ati on methods ofVB 1, VB 2. Methods:the three different methods of UV fordetermining VB 1, VB 2 are adopted. Results:According to the valueof E, the contents were 98.3 ±.51 for VB 1and 94.8 

15、7;. 308 for VB2, the VB 1 content of compound vitamin B tablets was 102.1 土.70. The average recovery for VB 1 and VB 2 were 100.4 and 94.9 respectively. According calibration curve method: the concentration of VB 1 and VB 2 were 318 and 18卩 g/ ml, showed good linear relationship. The results were 10

16、2.9 0.661 for VB 1 and 98.4 0.152 forVB 2. The dual wavelength spectrophotometery: the content of VB 1 was 04.8 ±.97. Conclutions: The three methods could be used to the determ in ati on of VB 1, VB 2.They are simple, rapid, accurate, the precision are very good.K e y w o r d s :UV ; vitamin B

17、1; vitamin B 2; compound vitamin B tablets中图分类号:TS207.3文献标识码:A文章编号：1002-6630（200406-0153-04近年来对维生素B 1、B 2测定方法报道较多，如高效液相色谱法1,2、流动注 射化学发光法3、多元线性分光光度法4、荧光分光光度法5、毛细管电泳电 化学法6、氧瓶燃烧电位滴定法7等。这些方法操作麻烦、时间较 长。本文采 用紫外分光光度法中按E值测定法、标准曲线法和双波长分光光度法，测定维生素 B 1、B 2含量，并将三种方法进行比较。三种方法均操作简便、快速、准确。1仪器和材料仪器:722型分光光度计DU-7紫外一

18、可见分光光 度计材料:维生素B 1、B 2对照品（购自S i g m a公司；维生素B 1片（批号:20021202维生素B 2片（批号：20021288-02;复合维生素B片（批号:20021283-02 三种片剂均为昆明制药股份有限公司产品；冰醋酸、盐酸、氢氧化钠均为分析纯。2试验及结果2. 1维生素B 1含量测定取本品10片，精密称取、研细，精密称取适量（约相当于维生素B 125mg,加盐酸 （9 1000约70ml,振摇15min使之溶解,再加盐酸（9 1000定容至100ml,摇匀，用 干燥滤纸过滤，精密量取滤液5m l ,用盐酸（9 1000稀释至100ml,摇匀，扫描得最大 吸收

19、波长 为246nm（图1,在该波长处测定吸光度，按其吸收系 数（为421计算：E cm %11A为供试品在246nm波长处测得的吸光度；D为稀为维生素B 1片的平均片重；W样为称取的维生素B 1片粉重；S标为标示量，测定结果（dS D :98.3 龙.51（n=7。按标准曲线法测维生素B 1含量标准曲线的绘制精密称取维生素B 1对照品33.5mg,先用少量蒸馏水 溶解,再定容至25ml,取 1ml置50ml量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。分别取不同量上述溶液置25m l量瓶中，配成:3、6、9、12、15、18卩g /m的溶液，于波长246n m处测定吸光度，每 个点测三次，求A。以浓度C（卩g

20、/m为横坐标，以A值为纵坐标，绘制标准曲线, 计算回归方程和相关系数：A=0.02307C+0.0025,r=0.9992,显示维 生素B 1在318卩g/m浓度范围内线性关系良好，见图2。精密称取本品5片，研细，精密称取细粉18.8mg,置100m I量瓶中，先用少量蒸馏 水溶解，再定容至刻 度，取1ml稀释到10ml,于246nm处测吸光度。按标 准曲线求出 标示量SD:102.9 ±661(n=6。2. 1.3维生素B 1加标回收率测定在经测定含量的样品中加入不同浓度的标准品，于246nm处测定吸光度，求算回 收率见表1。表1回收率表加入量 测得量 回收率R S D (卩g/m

21、l (卩g/ml (% (% 维生素 B 2 含量测定(附图 32. 2. 1按E值测定维生素B 2样品含量取本品4片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于维生素B 2 10mg置 100ml量瓶中，加冰醋酸0.5ml与水10m I,置水浴上加热1h，并时时振摇使维生素B 2溶解，加水稀释,放冷后，加4%氢氧化钠溶液3m l ,并用水稀释至刻度，摇匀,取滤液 4m l稀释至24m l，照分光光度法，在444n m波长处测定吸光度，按吸收系数(为323计算：标示量%=A为供试品在444nm波长处测得的吸光度；D为稀为维生素B 2片的平均片 重;W样为称取的 维生素B 2片粉重;S标为标示量。&

22、#177;SD:94.8 ±.308(n=5。2.221标准曲线的绘制精密称取维生素B 2对照品4.8mg,用少量蒸馏水溶解后定容至10ml,分别取不 同量对照液用蒸馏水稀释成不同 浓度:1、2、4、6、8卩g /m l于波长444n m处测吸 光度，每个点测定三次，求C(卩g/m为横坐标，以A为纵坐标绘制标准曲线。求出回 归方程和相 关系数A=0.07814C-0.00059, r=0.9985表明维生素B 2在1 8卩g/m浓 度范围内，浓度与A呈良好线性关系，见图4。E cm %11维生素B 2样品含量测定取本品6片，精密称取、研细，精密称取细粉15mg,先用少量蒸馏水和冰醋酸

23、溶 解后再移至50ml量瓶中,用蒸馏水定容至刻度，用干燥滤纸过滤取滤液，适当稀释后, 于444n m处测定吸光度，按标准曲线求 SD:98.4 ±.152(n=4。2. 2. 3维生素B 2回收率测定在已经测定含量的样品中分别加入不同浓度的对照2004, Vol. 25, No. 6食品科学分析检验156品,于444nm处测定A值求回收率（见下表。加入量 测得量 回收率R S D （卩g/ml（卩 g/ml （% （% 94.743.84096.0表22. 2. 4复合维生素B片中维生素B 2含量测定精密称取本品6片，研细，精密称取细粉69.0mg,置50m l量瓶中，加蒸馏水至刻度

24、，摇匀。适当稀释成为323计算,B 1、 B 6、烟一定浓度,于444nm处测定吸光度，按吸收光系数（标示量 ±D:102.1 ±.70。（在此波长 处复合B片中其它组分：维生素酰胺不干扰测定。2.3双波长分光光度法测定维生素 B1含量（附图5E cm11蒸馏水为空白,在282.5,246.8nm处分别测A。求A=A246.8-A282.5。按比较法 C x =? Cs,求出维生素 B 1SD:94.2 ±97(n=5。3讨论维生素B 1易溶于水，而维生素B 2在水中溶解度较 小,在处理维生素B 2时应 加少量酸、碱或在水浴上加热使之完全溶解。紫外分光光度法中，按E值测定含量为药典中药品 含量测定广泛使用的方法，不 需要标准品，但受仪器 测定波长是否准确影响大。标准曲线法受入波动影响小,且可采用不同入测定,此法需要对照品，有些样品找不到合适的对照品就不能用此法。双 波长分光光度法，可排出干扰组分的干扰，即使干扰组分的浓度发生较大变化，也几 乎不会影响到待测组分的测定值，此法的关键是找到二个 入值对干扰组分 A=0,对 待测组分厶A尽量大。