常用缓冲液配置

1、实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl ,组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1 .称量121.1 g Tris 置于1 L烧杯中。2 .加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3 .按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。PH值浓HCl约 70ml约 60ml约 42ml4 .将溶液定容至1 L。5 .局温身压火菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1C,溶液的pH值大约降低个单位。2)10 XTE Buffer,组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制

2、量：1 L配制方法：1 .量取下列溶液，置于1 L烧杯中1M Tris - HCl Buffer(,)100ml500mM EDTA20ml2 .向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。3 .将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。4 .室温保存。3)1.5 M Tris-HCl组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1 .称量181.7 g Tris 置于1 L烧杯中。2 .加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3 .用浓盐酸调节pH值至。4 .将溶液定容至1 L。5 .局温身压火菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值

3、随温度的变化差异很大，温度每升高1C,溶液的pH值大约降低个单位。4)3 M醋酸钠组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方法：1 .称量40.8g NaAc-3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2 .加入冰醋酸调节pH值至3 .加去离子水将溶液定容至 100ml4局温身压火菌后，室温保存。5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：1.称量下列试剂，置于1 L烧杯中。NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.42gKH2PO40.27g2.

4、向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3 .滴加浓盐酸将pH值调节至，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4 .局温身压火菌后，室温保存。注意：上述 PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和 0.5 mM MgCl2。6)10 M醋酸俊组份浓度：10 M醋酸镂配制量：100 ml配制方法:1 .称量g醋酸镂置于100200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。2 . 加去离子水将溶液定容至100 ml 。3 .使用mm滤膜过滤除菌。4 . 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。7)苯酚/氯仿/异戊醇(

5、25 : 24 : 1)配制方法：1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/ 氯仿/ 异戊醇(25 : 24 : 1) 。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配制方法：将Tris-HCl 平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24 : 1 )混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4保存。8) 10 (W/V) SDS组份浓度：10 (W/V)SDS配制量：100ml配制方法：1 .称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68c加入溶解2 .滴加浓盐酸调节pH值至3 . 将溶液定容至100ml 后，室温保存

6、。9) 2 N NaOH组份浓度：2 N NaOH配制量：100 ml配制方法：1 .量取80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中（NaOH容解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂） 。2 . 称取 8 g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3 .待NaOHE全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。4 . 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。10） N HCl组份浓度：N HCl配制量：100 ml配制方法：1. 在 ml 的去离子水中加入ml 的浓盐酸（N） ，均匀混合。2. 室温保存。11） 5 M NaCl组份浓度：5 M NaCl配制量：1 L配制方法：

7、1. 称取 292.2 g NaCl 置于 1 L 烧杯中，加入约800 ml 的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至1 L 后，适量分成小份。3. 高温高压灭菌后，4保存。11) 20(W/V) Glucose组份浓度：20% (W/V) Glucose配制量：100 ml配制方法：1 .称取20 g Glucose 置于100200 ml烧杯中，加入约 80 ml的去离子水后,搅拌溶解。2 .加去离子水将溶液定容至 100 ml o3 .局温身压火菌后，4c保存。12) Solution I(质粒提取用)组份浓度：25 mM Tris-HCl (, 10 mM EDTA, 50

8、 mM Glucose配制量：1 L配制方法：1.量取下列溶液，置于1 L烧杯中。1M Tris-HCl ()25ml0.5M EDTA ()20ml20% Glucose (1.11M)45mldH2O910ml2.局温身压火困后，4c保存。3.使用前每 50 ml 的 Solution I 中加入 2 ml 的 RNase A (20 mg/ml)。13) Solution II(质粒提取用)组份浓度：200mM NaO H 1 % (W/V)SDS配制量：500ml 配制方法:1 .量取下列溶液，置于 500ml烧杯中10% SDS 50ml2N NaOH 50ml2 .加灭菌水定容至5

9、00ml，充分混匀3 .室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌14) Solution川(质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH配制量：500 ml配制方法：1 .称量下列试剂，置于 500 ml烧杯中。KOAc147gCH3COOH2 .加入300 ml去离子水后搅拌溶解c3 .加去离子水将溶液定容至 500 ml4 .局温身压火菌后，4c保存。15) 0.5 M EDTA组份浓度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方法： 称取g Na2EDTA 2H2Q置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。3.

10、 用 NaOHM节 pH值至（约 20 g NaOH）。注意：pH值至时，EDTAt能完全溶解。4. 加去离子水将溶液定容至1 L 。5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。6. 室温保存。16） 1 M DTT组份浓度：1 M DTT配制量：20 ml配制方法：1. 称取 g DTT ，加入到50 ml 塑料离心管内。2. 加20 ml的M NaOAc（,溶解后使用 mm滤器过滤除菌。3. 适量分成小份后，-20 保存。17） 10 mM ATP组份浓度：10 mM ATP配制量：20 ml配制方法：1. 称取121 mg Na2ATP-3H2Q加入到 50 ml塑料离心管内。2. 加 20 m

11、l 的 25 mM Tris-HCl （，搅拌溶解。3. 适量分成小份后，-20 保存。一 . 常用贮液与溶液1mol/L 亚精胺 （ Spermidine ） : 溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml分装成小份贮存于-20 。1mol/L精胺（Spermine ）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20 。10mol/L 乙酸胺（ammonium acetate ） ：将 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L 后，用孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白（BSA）:加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DN

12、AB）于水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml， 然后分装成小份贮存于-20。1mol/L 二硫苏糖醇（DTT） ：在二硫苏糖醇5g 的原装瓶中加水，分成小份贮存于-20 或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加的水配制成1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾（potassium acetate ） ：溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中，加水定容到 100ml。1mol/L 氯化钾（KCl） ：溶解 7.46g 氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L 乙酸钠（s

13、odium acetate ） ：溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约90ml 水中，用冰乙酸调溶液的pH至，再加水定容到100ml。L EDTA:配制等摩尔的Na2EDT厌口 NaOH容液（L）,混合后形成EDTA勺三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA 2H2O和20g的NaOH并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES将溶于约90ml的水中，用 NaOHH pH（）,然后用水定容至100ml。1mol/L HCl ：加的浓盐酸至的水中。25mg/ml IPGT :溶解250mg的IPGT （异丙基硫代-B -D-半乳糖背）于10ml水中，分成小份贮存于-20 。1mol/LMg

14、Cl2:溶解20.3g MgCl2 . 6H2O于足量的水中,定容到 100mL 100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20 C 020mg/ml蛋白酶K （proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20 C。10mg/mlRnase （无 DNase） （DNase-free RNase ）:溶解 10mg 的胰蛋白 RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH ）。溶解

15、后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris HCl调pH至，于-20 C贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）:溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至 100ml。10N氢氧化钠（NaOH：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10%SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol ）:溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为 100ml。100%三氯乙酸（TCA

16、 :在装有500gTCA的试齐U瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器 搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）% X gal （5-溟-4-氯-3- 口引噪一B -半乳糖昔）：溶解25mg的X gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF ,用铝箔包裹装液管，贮存于-20 C 0100X Denhardt 试齐J （ Denhardts regent ）“分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖（Ficoll , 400 型）2g2%聚乙烯口比咯烷酮（PVP-40）2g2%BSA （组分 V）2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20 C

17、贮存。10X标准DNA接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer ）（粘端、平端连接）成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L盐酸亚精胺（可选）ml BSA （组分V）（可选）水5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液10 mg/mL 贮液将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于 -20 C 0100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions

18、）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80 C可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP 混合液分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dATP 贝匕液2ul 100 mmol/L dCTP 贝匕液10mmol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP贮液10mmol/L dllP2ul 100 mmol/L dllP贮液12ul20 % PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二20g醇50ml 5 mol/L 氯化钠 或14.6g

19、固一氯化钠体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解20XSSC分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L柠檬酸三钠（二88.2g175.3g3mol/L氯化钠补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH容液调pH为,用水补足体积至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC于100ml水中，使 DEPC勺体积分数为。在 37c温浴至少12h,然后在15 psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPCfe活。DEP篌与胺起反应，不可用DEPO理Tris缓冲液。甲酰胺（deion

20、ized formamide ）直接购买或加Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80C贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphate buffer ）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和 1mol/L磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4贮液：溶解142g于足量水中使终体积为 1L。1mol/L

21、磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值877123850150815185775225735265685315625375565435510490450550390610330670280720TE （用于悬7?和贮存DNA成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L EDTA水1ml 1mol/L Tris-HCl(, 25 C)200ul mol/L EDTA ( pH )Tris 缓冲液（Tris-HCl buffer ）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH （25C下）加一定量的浓盐酸（），用水

22、调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml）PH14213846566676二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50X Tris -乙酸(TAE缓冲液分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱242g1mol/L乙酸ml的冰乙酸(mol/L )100 mmol/L EDTA200ml 的 mol/L EDTA (pH )水补足1L5x Tris -硼酸(TBE缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱54g445 mmol/L硼酸盐27.5g硼酸10 mmol/L EDTA20 ml 的 mol/L EDTA (pH )水补足1L染料1 %澳

23、酚蓝(bromophenol blue )加1g水溶性钠型漠酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1 %二甲苯青 FF (xylene cyanole FF )溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml 的澳化乙锭(ethidium bromide )小心称取1g滨化乙锭，转移到广口瓶中，加 100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4 c贮存。凝胶上样液(gel loading solutions )6X碱性凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量N氢氧化钠300ul 10N氢氧化钠6 mmol/L EDTA120u

24、l L EDTA ()18%聚蔗糖（400型）1.8g漠甲酚绿15mg%一甲” FF25mg补足到10ml6 x聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量上臭酚蓝1 %漠酚蓝%一甲” FF1 %一甲” FF5 mmol/L EDTA100ul L EDTA ()15%聚蔗糖（400型）1.5g补足到10ml6X澳酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）分及终浓度配制10ml溶液各成分用量上臭酚蓝%一甲” FF15%聚蔗糖（400型）1 %漠酚蓝1 %一甲” FF1.5g补足到10ml6X甘油凝胶上样液（4c贮存）分及终浓度配制10ml溶液各成分用量上臭酚蓝1 %漠酚

25、蓝%一甲” FF1 %一甲” FF5 mmol/L EDTA100ul L EDTA ()50%甘油3ml6X蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量%漠酚蓝1 %漠酚蓝%一甲” FF1 %一甲” FF5 mmol/L EDTA100ul L EDTA ()40%聚蔗糖4g水补足到10ml10X十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）”及终浓度配制10ml溶液各成分用量（漠酚蓝20mg%一甲” FF20mg200 mmol/L EDTA4mlL EDTA%SDS100ul 10 % SDS50%甘油5ml补足到10ml三.常用培养基1） LB培养基将下列组分溶解在0.

26、9L水中:M白月东10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1N NaOH(1ml)调整pH至，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L0SOBW养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白陈20g酵母提取物5g“化钠0.5g1 mol/L 氯化钾用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。2) SOCW养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g

27、葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml,用的滤膜过滤除菌)。3) TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：12g酵母提取物24g“油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60 C,再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/mol/LK2HPO4勺溶液(的KH2P。和溶在足量的水中，使终体积为 100ml。高压灭菌或用的滤膜过滤除菌)。4) 2XYT培养基将下列组分溶解在0.9L水中:16g酵母提取物10gX化钠4ml如果需要用1N NaOH(1ml)调整pH至，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L05) YPDW养基将下列组分溶解在0.9L水中：20g酵母提取物10g，萄糖20g用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培