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文档简介

1、欧阳语创编单克隆抗体制备过程中筛选杂交瘤细胞的原理和方法时间：2021.03.01创作：欧阳语单克隆抗体制备过程中，有两次筛选过程,第一次是选 出杂交瘤细胞（用选择培养基）,第二次是进一步选出能产生 我们需要的抗体的杂交瘤细胞。第一次筛选的原理和方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的 关键。普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培 养液中家次黄瞟哙、氨基蝶0和胸腺II密D定核昔酸。其一居室 细胞中的DNA合成油两条途径:一条途径是生物合成途径（”D途径”），即由氨基酸及 其其他小分子化合物合成氨基酸”为DNA分子的合成提供 原料。再此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这

2、一过程, 而HAT培养液中氨基蝶哙是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的D途径。另一条途径是应急途径（S途径），她是利用次堇瞟 哙鸟嚓吟磷酸核昔转移酶和胸腺嚅卩定核昔激酶催化次 堇瞟哙和胸腺吨卩定生成相应的核昔酸,两种酶缺一不可。因此，在HAT培养液中,未融合的效应B细胞核两个欧阳语创编效应B细胞融合的D途径被氨基蝶哙阻断，随S途径正常, 但因缺乏在体外培养液中增殖的能力,一般10天左右会死 亡。对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用 的骨髄瘤细胞是次堇瞟哙鸟嚓吟磷酸核昔转移酶缺陷型细 胞，因此自身没有S途径，且D途径又被氨基蝶哙阻断，所 有在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。只

3、有骨髄瘤细胞 与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细 胞的S途径，又具有骨髄瘤细胞在体外培养液中长期增殖的 特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来,并不断增殖。第二次筛选的原理和方法：在单克隆抗体的生产过程中,由于效应B细胞的特异性 是不同的，经HAT培养液第一次筛选出的杂交瘤细胞产生的 抗体存在差异,必须对杂交瘤细胞进行第二次筛选,选出能 产生特定抗体的杂交瘤细胞。二次筛选通常采用有限稀释克 隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞 培养板上,是每孔细胞不超过一个,通过培养让其增殖,然 后检测各孔上清液中的细胞分泌的抗体”上清液可与特定抗 原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来 自单个细胞，继续进行有限稀释，一般重复3-4次,直至确

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