分离土壤中分解尿酸的细菌-实验报告

1、。分离土壤中分解尿素的细菌和计数制作：邹霖1. 实验目的：从土壤中分离出能够分解尿素的细菌，计数2 .实验原理：A.培养基中加入唯一氮源-尿素，能分解尿素的细菌自身能够合成脲酶， 能够分解利用尿素中的氮元素， 从而能够生存繁殖；不能分解尿素的细菌的繁殖受到抑制， 从而达到分离出土壤中能分解尿素的细菌的作用。B.使用酚红鉴定尿素是否被分解.CO（NH2）2分解产生 NH3 使溶液显碱性.如果尿素被分解，则酚红会显红色，C.分解原理 .CO（NH2）2+H2O= 月尿酶=CO2+NH3D.稀释涂布平板法.将菌液进行一系列的梯度稀释， 然后将不同稀释浓度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养

2、，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成单个细胞， 从而能在培养基表面形成单个的菌落。E计数菌落，一个或几个细菌可以繁殖为一个肉眼可见的菌落（计数结果低于实际细菌数）3 .提出问题：尿素分解后NH3 的产生是否会影响实验？4 .做出假设：尿素分解后NH3 的产生会影响实验。5 .实验材料用具： 超净工作台、 取样铲、 试管、 锥形瓶、 恒温培养箱、培养皿、 高压蒸汽灭菌锅、 酒精灯、 酒精、 无菌水、 地面以下 3-8CM处的土壤、培养基A （磷酸二氢化钾1.4g磷酸氢化二钠2.1g 七水合硫酸镁0.2g 葡萄糖10g 尿素1g 琼脂15g）培养基B（牛肉膏蛋白胨培养基） 涂布器、

3、干热灭菌箱、烧杯、胶头滴管6 .实验步骤：1 . 对实验用具消毒灭菌；按配方称取上述物质，将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到 1000ml 。2 .配置好培养基后， 将培养基 A.B 倒置都放入恒温培养箱中培养 1d ，取出后观察是否产生了菌落，若无，则继续下一步实验。若有，重做(>_<)3 .系列稀释：将分别盛有9ml 水的 5 只试管和 90ml 水的1 个锥形瓶灭菌，并按1010 的顺序编号锥形瓶编号10。将10g符合条件的土壤放入锥形瓶中，震荡锥形瓶，用移液管吸取1ml 菌液， 注入标有 10 的试管中， 用手轻压移液管上的橡皮头， 吹吸三次，使菌液与水充分混匀。 以此类推，

4、 直到完成最后一只试管的稀释。 （注意：移液管需要经过灭菌，操作时，试管口和移液管应在离火焰12cm 处）4 .涂布平板：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中， 分别取 10.10 .10 中的少量菌液，分别各滴加到 3 个培养基 A （总计 9 个）的表面， 注明培养基种类， 培养日期以及平板上培养样品的稀释程度，取少量无菌水滴加到 1 个培养基中作为空白对照组， 取少量菌液滴加到培养基 B 中（判断选择培养基是否起到了选择作用） ， 将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃， 待酒精燃尽后，冷却 8-10S 。用涂布器 将菌液均匀的涂布在每个培养基表面 （每次涂布前都必须用酒精灯灼 烧）涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。-可编辑修改-5 .将培养基倒置并放入恒温培养箱中培养1-2d6 .相同稀释程度的3个培养基统计其菌落数（30-300 ）取 平均值。7 .实验结果：1.空白对照组无菌落2 .培养基B上的菌落