实验1大肠杆菌的培养与分离

1、 “选修模块是为了满足学生多样化发选修模块是为了满足学生多样化发展的需要而设计的，有助于拓展学生的生展的需要而设计的，有助于拓展学生的生物科技视野、增进学生对生物科技与社会物科技视野、增进学生对生物科技与社会关系的理解、提高学生的实践和探究能关系的理解、提高学生的实践和探究能力。力。” “选修选修 1 生物技术实践生物技术实践”模块模块重在培养学生设计实验、动手操作、重在培养学生设计实验、动手操作、收集证据等科学探究的能力，增进学收集证据等科学探究的能力，增进学生对生物技术应用的了解。生对生物技术应用的了解。 本模块适于继续学习理工类专业本模块适于继续学习理工类专业或对实验操作感兴趣的学生学习

2、。或对实验操作感兴趣的学生学习。 生物技术概述生物技术概述1-1 1-1 什么是生物技术什么是生物技术1-2 1-2 传统生物技术传统生物技术1-3 1-3 现代生物技术现代生物技术1-1什么是生物技术什么是生物技术n生物技术生物技术= =生物工程生物工程 应用自然科学及工程学原理，以微生物体、动应用自然科学及工程学原理，以微生物体、动物体、植物体或其组成部分作为生物反应器将物料物体、植物体或其组成部分作为生物反应器将物料进行加工，以提供产品来为社会服务的技术。进行加工，以提供产品来为社会服务的技术。1-2 传统生物技术n传统传统生物生物技术指技术指主要主要通过通过微生物的微生物的发发酵酵来来

3、生生产产商品商品. .如如: :酱、醋、酒、酱、醋、酒、面包、奶酪、酸奶等面包、奶酪、酸奶等1-3 现代生物技术现代生物技术n一般而言，現代生物一般而言，現代生物技术技术可以分成以下可以分成以下五五种种：n一、一、细胞工程细胞工程n二、二、发酵工程发酵工程n三、三、蛋白质工程蛋白质工程n四、四、酶酶工程工程n五、五、基因工程基因工程 一一、细胞细胞工程工程 按照人们的需要和科学设计改变细胞的按照人们的需要和科学设计改变细胞的遗传基础，并通过细胞遗传基础，并通过细胞(组织组织)培养，细胞培养，细胞杂交杂交(融合融合)，核移植和胚胎移植等技术，核移植和胚胎移植等技术，重组细胞的结构和内含物，以改变

4、生物的重组细胞的结构和内含物，以改变生物的结构和功能，快速繁殖和培养出人们所需结构和功能，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。要的新物种的生物工程技术。 细胞工程包括动物细胞工程和细胞工程包括动物细胞工程和植物细胞工程植物细胞工程植物细胞工程植物细胞工程: :植物组织培养和植物细植物组织培养和植物细胞杂交胞杂交动物细胞工程动物细胞工程: :细胞培养、细胞融合、细胞培养、细胞融合、胚胎移植、核移植、胚胎分割、干细胚胎移植、核移植、胚胎分割、干细胞等胞等二、发酵工程二、发酵工程n微生物的无氧呼吸叫发酵微生物的无氧呼吸叫发酵n1.1.定义定义：利用利用DNADNA重组技术对重组技术对不

5、同生物的不同生物的遗传基因遗传基因，根据根据人們的人們的意愿意愿，进进行基因的行基因的切割、拼接及重新切割、拼接及重新组组合，再合，再转转入生物入生物体体內內，产生产生出人出人们们所期望的所期望的产产物或物或创创造出具有造出具有新的新的遗传特征遗传特征的的生物类型生物类型。n蛋白质工程主要包括蛋白质工程主要包括了解合成蛋白质了解合成蛋白质的的DNADNA编码编码序列、序列、蛋白质蛋白质的的分离分离纯化纯化、蛋白质的序列分析和蛋白质的序列分析和结构功能分析结构功能分析、蛋白质蛋白质结晶和结构力学分析等结晶和结构力学分析等。三三、蛋白质蛋白质工程工程n酶酶工程即利用工程即利用基因工程等手段基因工程

6、等手段，改变改变酶或蛋白质的折叠方式、空间结构、酶或蛋白质的折叠方式、空间结构、催化活性和稳定性等催化活性和稳定性等四、四、酶酶工程工程五五、基因工程基因工程n1.1.定义定义：又叫又叫DNADNA重组技术，重组技术，即即针对针对不同不同生物的生物的遗传基因遗传基因，根据人们根据人们的的意愿意愿，进行进行基因的切割、拼接及重新基因的切割、拼接及重新组合组合，再，再转转入生入生物物体体內，內，产产生出生出人们人们所期望的所期望的产产物或物或创造创造出具有新的出具有新的遗传特征遗传特征的生物的生物类型类型。n基因工程的条件基因工程的条件（1 1）工具酶）工具酶（2 2）基因的分离）基因的分离（3

7、3）基因的载体）基因的载体（4 4）受体）受体选修选修1需学习的实验需学习的实验n实验实验1 大肠杆菌的培养和分离大肠杆菌的培养和分离n实验实验4 果汁中的果胶和果胶酶果汁中的果胶和果胶酶n实验实验5 加酶洗衣粉的使用条件很效果加酶洗衣粉的使用条件很效果n实验实验6 -淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测n实验实验8 果酒及果醋的制作果酒及果醋的制作n实验实验10 泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定n实验实验11 植物的组织培养植物的组织培养第一部分第一部分 : :微生物的利用微生物的利用一、基础知识一、基础知识1微生物微生物2培养基培养基3无

8、菌技术无菌技术二、实验操作二、实验操作1操作步骤操作步骤微生物包括哪五类：微生物包括哪五类：真菌真菌原生动植物原生动植物特点：特点：结构都相当简单结构都相当简单, ,个体多数十分微小。个体多数十分微小。通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构。有的甚至没有细胞结构。 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界一基础知识一基础知识（一）微生物（一）微生物 1 1、结构：、结构：单细胞原核单细胞原核分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）链霉素、土霉素、四环素、链霉素、土霉素、四环素、氯

9、霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其中微生物中发现了几千种抗生素，其中2/32/3是是由放线菌产生的由放线菌产生的 应用应用: :2病毒的结构病毒的结构2病毒病毒 SARS病毒、病毒、 禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白质病毒）朊病毒（蛋白质病毒）病毒的增殖：病毒的增殖：3真菌真菌如图是酵母菌电子显微如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构镜下的形态结构酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉4细菌的外形与大小细菌的外形与大小细菌：细菌：单细胞不分枝的原核微生物单细胞不分枝的原核微生物。细菌细胞细菌细胞，通常用适当染料，通常用适当染料后显微镜观察后显微镜观察图图1-1

10、 常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态A.球菌球菌 B.杆菌杆菌 C.弧菌弧菌细菌细胞由外向里依次有、菌菌（、，。细菌的构造细菌的构造细胞膜细胞膜 拟核拟核* *细胞壁细胞壁n细胞壁有哪些功能？细胞壁有哪些功能？n 伤伤寒寒杆杆菌菌细细胞胞壁壁中中含含毒毒素素 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做体，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后才小时以后才

11、死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌. .菌落：菌落：n单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落形态结构的子细胞群体，叫做菌落。n菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落细菌的菌落特征细菌的菌落特征因种而异因种而异 5细菌的营养物质细菌的营养物质 n碳源碳源 n氮源氮源 n水水n无机盐

12、无机盐n生长因子生长因子 即细菌生长必需，而自身即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物不能合成的化合物,如维生素、某些氨如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶基酸、嘌呤、嘧啶6细菌的营养类型细菌的营养类型 n根据细菌所利用的能源和碳源的不同根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。，将细菌分为两大营养类型。n自养菌（自养菌（autotrophautotroph）n异养菌（异养菌（heterotrophheterotroph）n腐生菌腐生菌n寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌 了解有关培养基的基础知识，进行无了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。菌技术的操

13、作，进行微生物的培养。 一、课题目标：一、课题目标： 掌握掌握培养基的制备培养基的制备、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌和和平板划线法平板划线法等基本操作技术，熟练、规范等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：二、课题重点和难点：三、技能目标：三、技能目标：（二）培养基（二）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1 1）按）按物理状态物理状态来分：培养基可分为来分：培养基可分

14、为固体培固体培养基、半固体培养基养基、半固体培养基和和液体培养基液体培养基。其中固。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等，而液体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等，而液体培养基一般用于工业生产。体培养基一般用于工业生产。（2 2）按）按功能功能来分，可分为来分，可分为选择培养基选择培养基和和鉴别鉴别培养基培养基。（3 3）按）按化学成分化学成分来分，可分为来分，可分为天然培养基天然培养基和和合成培养基合成培养基。1.1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长按按物理状态物理状态来分来分固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：

15、菌落，菌苔按按物理状态物理状态来分来分半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力( (弥散弥散) )观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定 按按物理状态物理状态来分来分选择培养基选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基: : 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基: : 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基: : 分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基: : 分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基

16、加入青霉素等抗生素的培养基: : 分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞按按功能功能来分来分鉴别培养基鉴别培养基n伊红美蓝乳糖培养基伊红美蓝乳糖培养基按按功能功能来分来分 天然培养基有血清、血浆、和组天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：优点：营养成分丰富，培养效果好营养成分丰富，培养效果好缺点：缺点：来源受限来源受限; ;成分复杂，影响对某成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析些实验产物的提取和实验结果的分析; ;易发生支原体污染易发生支原体污染; ;天然培养基：天然培养基：按按化学成分化学成分来分来分 根

17、据细胞生存所需物质的种类和根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。数量，用人工方法模拟合成的。 合成培养基主要成分是氨基酸、合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。一些辅助物质。 优点：优点：标准化生产，组分和含量相标准化生产，组分和含量相对固定对固定; ;成本低成本低 缺点：缺点： 缺少某些成分，不能完全满缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。足体外细胞生长需要。 合成培养基合成培养基: :按按化学成分化学成分来分来分血清中含有：血清中含有：多种蛋白质（白蛋白、球蛋多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）白

18、、铁蛋白等）多种金属离子；多种金属离子； 激素；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。冷析球蛋白、胶原等。各种生长因子各种生长因子转移蛋白转移蛋白不明成分不明成分 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。血清）。按按化学成分化学成分来分来分3.培养基内所含的基本物质培养基内所含的基本物质n一般营养物质一般营养物质(1)水水 (2)碳源碳源 (3)氮源氮源 (4)无机无机盐盐n其他物质其他物质 pH、特殊营养物质、特殊营养物质

19、,例如例如:生长因子生长因子(即细即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗渗透压透压等的要求。等的要求。 2. 2.不同的微生物往往需要采用不同不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方的培养基配方 .(2)碳源n可作为碳源的物质有可作为碳源的物质有:n含碳无机物含碳无机物: 、 、n含碳有机物：含碳有机物：蛋白蛋白质质 脂肪酸脂肪酸碳酸盐碳酸盐碳酸氢盐碳酸氢盐糖类（主要）葡萄糖糖类（主要）葡萄糖 乳糖乳糖二氧化碳二氧化碳 不同微生物所利用的碳源不同不同微生物

20、所利用的碳源不同 异养型微生物的碳源为异养型微生物的碳源为 自养型微生物的碳源为自养型微生物的碳源为含碳有机物（有机碳）含碳有机物（有机碳）含碳无机物（无机碳）含碳无机物（无机碳）(3)氮源n可作为氮源的物质有可作为氮源的物质有:n含氮无机物：含氮无机物： 、 、 、n含氮有机物：含氮有机物：蛋白蛋白胨胨牛肉膏牛肉膏尿素尿素 固氮微生物所利用的氮源是固氮微生物所利用的氮源是氮气氮气氨气氨气硝酸盐硝酸盐氨盐氨盐氮气氮气3培养基配制原则：培养基配制原则：n营养要协调营养要协调n目的要明确目的要明确nPH要适宜要适宜1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作在培

21、养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。中，所有防止杂菌污染的方法。n（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒行清洁和消毒 ；n（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌进行灭菌 ；n（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；酒精灯火焰附近进行；n（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。相接触。 从制备培养基到接种与培养等全部实从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作验过程要无菌操作（）（）消毒定义

22、：消毒定义：利用化学或物理方法，杀死大部份利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。区分为致病微生物的过程。区分为高程度消毒高程度消毒（High-level DisinfectionHigh-level Disinfection）、）、中程度中程度消毒消毒（Intermediate-level Intermediate-level DisinfectionDisinfection）、）、低程度消毒低程度消毒（Low-Low-level Disinfectionlevel Disinfection）三种方式。）三种方式。2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 消毒

23、消毒1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min 15min 如牛奶的消毒如牛奶的消毒3 3、化学药剂消毒法化学药剂消毒法: :用用75%75%酒精、新洁酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒尔灭等进行皮肤消毒; ;氯气消毒水源氯气消毒水源4 4、紫外线消毒紫外线消毒(2)消毒的方法：消毒的方法：灭菌灭菌概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。微生物，包括芽孢和孢子。方法：方法：a 灼烧灭菌

24、灼烧灭菌 b 干热灭菌干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌灼烧灭菌微生物的接种工具微生物的接种工具 (接接种环、接种针种环、接种针)或其或其他金属用具直接在火他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧焰的充分燃烧层灼烧注意适用范围注意适用范围 干热灭菌干热灭菌 160170 ；12h能耐高温的需要保持干能耐高温的需要保持干燥的物品燥的物品( 玻璃器皿玻璃器皿) 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 100kPa 121 15-30min通常用于培养基的灭菌通常用于培养基的灭菌 最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它可以，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休杀灭所

25、有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。破坏。 有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌高温干热灭菌。为了。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。 而培养皿是由正反两平面板互扣而成，这种而培养皿是由

26、正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 大肠杆菌的培养和分离菌种保存菌种保存培养基的培养基的配制配制灭菌灭菌超净工件台超净工件台倒平板倒平板接种液体接种液体培养培养划线分离划线分离培养培养1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？被其他外来微

27、生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。菌。如果需要，请选择合适的方法。（1 1） 培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3） 实验操作者的双手实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒）需要消毒。二、实验操作n1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基n2纯化大肠杆菌

28、纯化大肠杆菌n3将接种后的培养基和一个未接种的培将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入养基放入37恒温箱中培养恒温箱中培养12h和和24h后，观察并记录后，观察并记录二、实验操作二、实验操作 1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）1 1计算、称量计算、称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 64 4过滤过滤：这一步可以省去。：这一步可以省去。5 5分装分装：分装过程中注意不要使培养：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过引起污染。分装三角烧瓶的量以不

29、超过三角烧瓶容积的一半为宜。三角烧瓶容积的一半为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步骤操作步骤 8 8灭菌灭菌: : 将将5050mlml培养基培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为锅，在压力为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌15153030minmin。将将培养皿培养皿用旧报纸包裹，放入干用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在热灭菌箱内，在160160170 170 下灭菌下灭菌2 2h h。 9 9倒平板倒平板: : 待培养基冷却到待培养基冷却到50

30、50 左右时，在酒精灯附左右时，在酒精灯附近倒平板。近倒平板。2 2d d后观察平板，无杂菌污染才可用后观察平板，无杂菌污染才可用来接种来接种. . 10 10无菌检查无菌检查： 将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培的温室中培养养24482448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。 1. 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？基的温度？ 答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫

31、手瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。时，就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。生物污染培养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固答：平板冷凝后，皿盖上会

32、凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。培养微生物。2 2、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：划线分离法和涂布分离法划线分离法和涂布分离法划线分离法划线分离法: :通过接种环在琼脂固体培通过接种环在琼

33、脂固体培养基表面连续画线的操作养基表面连续画线的操作, ,将聚集的菌将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面钟逐步稀释分散到培养基的表面. . 在数次画线后在数次画线后, ,可以分离到由一个细可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体, ,这就是菌落这就是菌落. . 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可

34、能存在的微生物污染培养物；每次划线种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。感染

35、操作者。 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来逐步减少，

36、最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。的菌落。涂布分离法涂布分离法 纯种的菌种稀释一般采取最简单常规的稀纯种的菌种稀释一般采取最简单常规的稀释涂布平板法。释涂布平板法。 将菌种用接种环蘸取，放入培养液内进行将菌种用接种环蘸取，放入培养液内进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养即可。培养即可。 涂布分离法涂布分离法n(1)系列稀释操作:四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温

37、箱中保温1 12 d2 d后无后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。再次练习。

38、（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。良好的科学态度与习惯。【典例解析典例解析】 例例1 1关微生物营养物质的叙述中，正确的是关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要不同的微生物，所需营养物质有