蔓荆子中黄酮类成分的含量测定及应用前景ppt课件

1、 蔓荆子中黄酮类成分的含量 测定及运用前景 蔓荆子的化学成分蔓荆子黄素的含量测定总论：总论：蔓荆子的运用前景蔓荆子概述本品为马鞭草科植物单叶蔓荆VitextrifoliaL.var.simplicifoliaCham.或蔓荆VitextrifoliaL.的枯燥成熟果实。秋季果实成熟时采收，除去杂质，晒干。蔓荆子概述蔓荆子概述药性：辛、苦，微寒。归膀胱、肝、胃经。效果：疏散风热，清利头目。用于风热感冒头痛，齿龈肿痛，目赤多泪，目暗不明，头晕目眩。用法用量：59g生长环境： 顺应性较强，对环境条件要求不严。但喜暖和潮湿，土壤以疏松、肥沃的砂质壤土较好。耐盐碱，在酸性上土壤生长不良。分布情况： 主产

2、山东、江西、浙江、福建、广东、广西等。蔓荆子的化学成分蔓荆子的化学成分蔓荆子中主要化学成分为黄酮类和萜类，同时含有挥发油和有机酸等其他化学成分。现代药理研讨阐明，蔓荆子中的黄酮类化合物如蔓荆子黄素具有镇痛、 抗炎、 抗肿瘤的作用中文别名:5-羟基-2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-3,6,7-三甲氧基苯并吡喃-4-酮;紫花牡荆素蔓荆子黄素的含量测定蔓荆子黄素的含量测定1.对照品溶液的制备:精细称定蔓荆子黄素对照品 3 . 2mg ,置 10mL容量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀。精细汲取 1mL,置 10ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度。每 1mL含约30ug对照品,备用。用时, 用 0

3、. 45um的微孔滤膜过滤。2.供试样品溶液的制备:枯燥至恒重的蔓荆子药材过 40目筛, 准确称取 2g ,置具塞锥形瓶中, 准确参与甲醇 50mL, 称定质量, 加热回流 1h, 冷却, 再称重并用甲醇补足损失溶剂, 摇匀, 滤过待用。3.色谱条件:色谱柱 HypersilODS( 4 . 6mm x150mm ), 柱温30 ,检测波长为 258nm; 流速为 1mL /m in ; 流动相为甲醇 -0. 4 %磷酸溶液 ( 60：40), 上样量20ul , 流动相经 0. 45um滤膜滤过。4.线性关系调查:分别用微量移液器精细汲取对照品溶液40、 80 、 120、 160 、 20

4、0uL,置于 1. 5mL EP管中,再分别精细参与甲醇补齐至总体积 200uL , 按色谱条件进样。以峰面积为纵坐标, 蔓荆子黄素的浓度 ( Lg/mL)为横坐标绘制规范曲线,回归方程: y= 98. 228x- 18 . 079 , r= 0 . 9995。结果阐明, 蔓荆子黄素浓度在 6- 30ug/mL与峰面积呈良好的线性关系。5.回收率实验: 精细称取已测知含量的样品 5份, 每份 0. 5g , 分别精细参与紫花牡荆素对照品溶液 1mL (质量浓度为0 . 032mg /mL) 测 定, 结 果 紫 花 牡 荆 素 的 平 均 回 收 率 为99. 27%, RSD为 1 . 82

5、 %。回收率%= C A BX100%A为供试品所含被测成分量，B为参与对照品量，C为实测值。6.样品测定：每份 1g , 精细汲取 20LL进样测定。2019版中国药典规定蔓荆子以枯燥品计算, 含蔓荆子黄素不得少于 0 . 030 %蔓荆子运用前景蔓荆子运用前景蔓荆子为临床常用中药，具有疏风散热、清利头目的效果。 现代研讨阐明其主要含有挥发油、黄酮类、环烯醚萜类、二萜类、生物碱、甾体等化学成分。 近年来国内外学者对蔓荆子的药理作用进展了深化系统的研讨，比如抗肿瘤、解热、镇痛、抗菌、抗炎、降压、抗氧化等药理作用，但目前蔓荆子的临床运用仍集中于治疗各种痛证和抗炎两个方面。 有学者从蔓荆子中发现了

6、新的抗癌药先导化合物-Vitexicarpin 和劳丹烷型二萜；还有学者对蔓荆子的消炎和镇痛活性进展研讨，结果阐明紫花牡荆素、木犀草素、3-甲氧基-4-羟基肉桂醛为主要活性成分，这为蔓荆子临床上用于预防癌症、镇痛和炎症的治疗提供了实际根据。黄酮类化合物黄酮类化合物(Flavonoids)概述构造与分类黄酮类化合物的理化性质提取和分别概概 述述H1.1.根本构造根本构造: 2-: 2-苯基色原酮苯基色原酮H现泛指两个苯环现泛指两个苯环(A(A与与B B环环) )经过中央三碳链经过中央三碳链相互结合而成的一系列化合物，具相互结合而成的一系列化合物，具C6-C3-C6-C3-C6C6构造。构造。OO

7、ABC1234567812 34562.2.分布分布 黄酮类化合物广泛分布于被子植物中。比如唇形科、菊科等等。3.3.生物活性生物活性 黄酮类化合物是中药中重要的有效成分，具有多方面的生理活性。银杏叶总黄酮、葛根素等具有扩张冠状血管作用；芦丁、橙皮苷等能降低毛细血管脆性。黄酮类化合物的构造与分类黄酮类化合物的构造与分类黄酮类是以2-苯基色原酮为根本母核OOABC1234567812 3456三碳链部分结构OO名 称 名 称 三碳链部分结构 黄酮类二氢黄酮类异黄酮类黄酮醇类二氢黄酮醇类二氢异黄酮类(flavones)(flavanoes)(isoflavones)(flavonol)(flava

8、nonols)(isoflavanones)OOOOOOOHOOO HOO黄酮类化合物的主要结构类型OOHomoisoflavonesHomoisoflavones高异黄酮类高异黄酮类OOXanthonesXanthones山酮类山酮类双苯吡酮类双苯吡酮类OOH6321654321OHO74321OOCH+OOH(dihydrochalcones)(chalcones)(aurones)(anthocyanidins)二氢查耳酮类查耳酮类橙酮类(噢 弄类)花色素类黄烷-3,4-二醇类黄烷-3,4-二醇类Flavan-3,4-diolsFlavan-3,4-diolsOOHOH黄烷-3-醇类黄烷

9、-3-醇类Flavan-3-olsFlavan-3-olsOHO黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质2.2.溶解性溶解性黄酮类化合物大多呈黄色，多为结晶性固体，具有一定的结晶外形，少数如黄酮苷为无定性粉末。1.1.性状性状游离苷元：脂溶性在水中溶解度主要取决于分子中极性基团的多少，且与分子平面构型有关：黄酮、黄酮醇类、查耳酮 难溶于水；二氢黄酮、二氢黄酮醇 水中溶解度稍大。OOOHOHH半椅式3. 3. 酸碱性：酸碱性：酸性：黄酮类化合物分子中多具有酚羟酸性：黄酮类化合物分子中多具有酚羟基，故显酸性。酸性强弱与酚羟基的数基，故显酸性。酸性强弱与酚羟基的数目和位置有关。目和位置有关。7,

10、47,4- -二二OH 7-OHOH 7-OH或或4 4-OH-OH普通酚普通酚OH3-OH, 5-OHOH3-OH, 5-OH深黄色或红色OO+H+HClH2OCl -H+OOHOO碱性：碱性：4. 4. 呈色反响呈色反响: :(一一) 复原反响复原反响:1. 盐酸镁粉反响：黄酮类之特征反响盐酸镁粉反响：黄酮类之特征反响(橙红橙红紫红紫红)留意：留意： (1) 醇液中比水液中反响较灵敏醇液中比水液中反响较灵敏 (2) 坚持高浓度的酸坚持高浓度的酸 (3) 做对照实验，去样假阳性做对照实验，去样假阳性 查耳酮，花样素查耳酮，花样素 红色红色H+无需无需Mg粉粉OOOHOHOH+H2. 2. 四

11、氢硼钠四氢硼钠( (钾钾) )反响反响: : 二氢黄酮二氢黄酮( (醇醇) )专属反响专属反响红紫色H2OHNaBH4CHOHHO+OHCH CHOOHOHHHHHOOOHOOHOHHOOH+H+(二二) 金属盐类络合反响金属盐类络合反响: 具有具有3-OH, 5-OH或邻二酚或邻二酚OH的黄酮反响的黄酮反响(+)。OHOOOOHOHOH1.铝盐：铝盐：1% AlCl3或或Al(NO3)3络合物多为络合物多为黄色，并有荧光。黄色，并有荧光。2. 镁盐：镁盐：Mg(OAc)2甲醇溶液甲醇溶液 Mg(OAc)2二氢黄酮二氢黄酮(醇类醇类) 天兰色荧光天兰色荧光 黄酮黄酮(醇醇)、异黄酮、异黄酮 黄

12、黄橙黄橙黄褐色褐色H3. FeCl33. FeCl3反响：酚类显色剂反响：酚类显色剂H 含有含有3-OH, 5-OH, 3-OH, 5-OH, 邻二邻二OHOH时，可显红、绿等时，可显红、绿等较明显的颜色。较明显的颜色。(三三) 硼酸显色反响硼酸显色反响: 5-OH黄酮黄酮, 2-OH查耳酮反响查耳酮反响(+)无机酸或有机酸存在与硼酸当含 结构时亮黄色 +草酸 枸丙 橼 酸酮显黄色并带 显黄色绿色荧光 无荧光C C COOHOHO(四四) 碱性试剂显色反响：碱性试剂显色反响：1.NH3蒸气显色蒸气显色深黄色，渐渐褪色；深黄色，渐渐褪色；2.Na2CO3显色：显色：二氢黄酮 查耳酮，显橙黄色OH

13、-H+OH -OCH3OHOHHOOOHOCH3OHOHHOOO二氢黄酮二氢黄酮OH-查耳酮，显橙查耳酮，显橙 黄色黄色绿棕色深红色极易氧化O2OH-黄色 邻二酚OH或3, 4-OHOOH-通入空气黄酮醇类 黄色 棕色邻二酚邻二酚OH或或3，4-OHOH-黄色黄色极易氧化极易氧化深红色深红色绿棕色绿棕色O2黄酮类化合物的提取与分别黄酮类化合物的提取与分别黄酮类化合物的提取，主要根据被提取物和共存杂质的性质选择适宜的提取溶剂。游离黄酮苷元 黄酮苷类及极性大的苷元氯仿、乙醚 丙酮、乙醇方法：方法：1.乙醇或甲醇提取乙醇或甲醇提取2.热水提取法热水提取法3.系统溶剂提取法系统溶剂提取法原理：利用黄酮

14、类化合物与混入的杂质极性原理：利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进展萃取而到达精制纯不同，选用不同溶剂进展萃取而到达精制纯化目的。化目的。溶剂萃取溶剂萃取Et2O水层水层CHCl3CHCl3Et2O总黄酮苷总黄酮苷回收溶剂回收溶剂EtOAc层层EtOAc(或或n-BuOH)萃取萃取总黄酮总黄酮回收溶剂回收溶剂层层萃取萃取水层水层石油醚液石油醚液(叶绿素叶绿素,蜡蜡, 胡萝卜素等胡萝卜素等)参与少量水、参与少量水、石油醚萃取石油醚萃取黄酮苷黄酮苷(黄酮苷可用黄酮苷可用7%酚酚/水洗下水洗下)(酚酚)除去酚类除去酚类浓缩浓缩液液水液水液萃取萃取浓缩液浓缩液减压浓缩减压浓缩DCBAA

15、沸水洗沸水洗B沸沸MeOH洗洗C 7%酚酚/水水D 15%酚酚/醇洗醇洗活性碳活性碳适用于苷类适用于苷类活性碳吸附活性碳吸附至上清检不至上清检不出黄酮化合物出黄酮化合物直直接接柱柱色色谱谱浓缩液浓缩液回收溶剂回收溶剂醇提取液醇提取液MeOH或或EtOH提取提取原料原料1.1.利用酸性强弱不同进展分别利用酸性强弱不同进展分别pHpH梯度萃梯度萃取取梯度梯度pHpH萃取法适宜于酸性强弱不同的黄酮苷萃取法适宜于酸性强弱不同的黄酮苷元的分别。根据黄酮类苷元酚羟基数目及元的分别。根据黄酮类苷元酚羟基数目及位置不同其酸性强弱也不同的性质，可以位置不同其酸性强弱也不同的性质，可以将混合物溶于有机溶剂如乙醚后

16、，依将混合物溶于有机溶剂如乙醚后，依次用次用5%NaHCO35%NaHCO3、5%Na2CO35%Na2CO3、0.2%NaOH0.2%NaOH及及4%NaOH4%NaOH水溶液萃取，来到达分别的目的。水溶液萃取，来到达分别的目的。分别：分别：a. 聚酰胺色谱：分别羟基黄酮类化合物聚酰胺色谱：分别羟基黄酮类化合物原理：原理： 氢键吸附实际氢键吸附实际 2.2.色谱法色谱法吸附力的大小由酚羟基的数目和位置来决议吸附力的大小由酚羟基的数目和位置来决议:酚羟基数目酚羟基数目，吸附，吸附，Rf值值 ；反之；反之, 亦然；亦然；酚羟基的酸性酚羟基的酸性，吸附，吸附，Rf值值 。CH2NCCH2CH2CH2CH2CH2NCCH2HOHOHOHOCH2NCCH2CH2CH2CH2CH2NCCH2OHOO醌类，硝基化合物酚类，酸类洗脱顺序规律：易洗脱顺序规律：易难难1)苷元一样：三糖苷苷元一样：三糖苷双糖苷双糖苷单糖苷单糖苷苷元苷元2)酚酚OH数目越多，越难洗脱数目越多，越难洗脱; 当酚当酚OH数目一样时，酸性越弱的越易洗脱；数目一样时，酸性越弱的越易洗脱；能构成能构成 分子内氢键者易洗脱，分子内氢键者易洗脱，3)不同类型黄酮不同类型黄酮: