ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究课件

1、ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究硕士研究生：傅军硕士研究生：傅军 导师：张伟导师：张伟 研究员研究员ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究l第一部分：第一部分：ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术概述生物荧光肿瘤体外药敏检测技术概述l第二部分：第二部分：ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术及质量生物荧光肿瘤体外药敏检测技术及质量 l 标准的建立标准的建立l第三部分：第三部分：ATP-TCA技术的临床应用研究技术的临床应用研究ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测

2、技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究l 化学治疗是肿瘤的三大治疗手段之一。近化学治疗是肿瘤的三大治疗手段之一。近3030年来，虽年来，虽然某些恶性肿瘤的化学治疗有明显改善，但多数肿瘤，然某些恶性肿瘤的化学治疗有明显改善，但多数肿瘤，特别是实体瘤疗效仍不理想。这与肿瘤存在个体差异性，特别是实体瘤疗效仍不理想。这与肿瘤存在个体差异性，以及多重耐药性等因素有关。以及多重耐药性等因素有关。l 因此如何选择有效药物，进行有的放矢的治疗早已成因此如何选择有效药物，进行有的放矢的治疗早已成为化疗界所关注的问题。为化疗界所关注的问题。ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研

3、究1. 主要的药敏检测方法及其主要的药敏检测方法及其存在的问题存在的问题药敏检测方法药敏检测方法存在问题存在问题 集落形成法集落形成法（HTCA） 标本可评价率低，仅有4070。 实验周期长，需要2周以上 测试药物种类和数量有限 操作繁琐，难以标准化 阳性预测值较低，仅有4060四唑蓝比色法四唑蓝比色法 (MTT) 敏感性较差，最低仅能检测500个细胞 量程较小，有效量程在2.0以内细胞毒性差异染细胞毒性差异染色法色法 (DiSC) 可适用标本类型不广，目前仅用于血液肿瘤 人为判断因素较大，难以推广 标本可评价率不高，仅有7080 阳性预测值较低，仅有7080胸腺嘧啶核苷胸腺嘧啶核苷掺入法掺入

4、法 (3H-TdR) 实验人员接触放射，不利于健康 标本可评价率不高，仅有7080 测试结果仅能反映少量处于增殖相的肿瘤细胞 对某些药物的测试结果存在假阴性ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究理想的药敏检测方法应该理想的药敏检测方法应该具备的条件具备的条件操作简便，可以标准化，便于推广操作简便，可以标准化，便于推广标本可评价率高标本可评价率高检测敏感、可靠、客观检测敏感、可靠、客观1. 4. 具备产业化条件具备产业化条件ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究敏感性好敏感性好可检测最少可检测最少1010个细胞。而其他技术则一般

5、需要个细胞。而其他技术则一般需要500500个细胞以上个细胞以上可评价率高可评价率高标本可评价率在标本可评价率在90%90%以上以上快速检测快速检测完成完成ATPATP检测仅需检测仅需3030分钟，而其它方法需分钟，而其它方法需1 14 4小时的孵育时间小时的孵育时间量程宽量程宽 检测线性范围为检测线性范围为1010100000100000个细胞个细胞/ /孔（孔（9696孔培养板）孔培养板）精密度好精密度好变异系数（变异系数（CVCV）小于小于10%10%，在国家标准（，在国家标准（10%10%）的范围内）的范围内结果准确结果准确整体预测值为整体预测值为86%86%检测效率高检测效率高同时动

6、态检测评估化疗药物同时动态检测评估化疗药物6 6个剂量下对肿瘤的杀伤作用个剂量下对肿瘤的杀伤作用高通量检测高通量检测适合适合9696、384384、15361536孔板检测分析孔板检测分析自动化程度高自动化程度高实验数据计算机软件自动分析，分析结果直观可靠实验数据计算机软件自动分析，分析结果直观可靠稳定性好稳定性好 具备产业化条件具备产业化条件ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究在有氧条件下在有氧条件下, , 荧光酶（荧光酶（luciferaseluciferase）可以催化荧光素可以催化荧光素（luciferinluciferin）释放出荧光（波长为释放出

7、荧光（波长为562562nmnm），同时，同时ATPATP转变成转变成AMPAMP。所释放的荧光强度与胞内所释放的荧光强度与胞内ATPATP含量呈正相关。含量呈正相关。细胞死亡后，胞内细胞死亡后，胞内ATPATP迅速水解，而活细胞的迅速水解，而活细胞的ATPATP含量基含量基本恒定。因此所测得的荧光强度反映了活细胞的数量。本恒定。因此所测得的荧光强度反映了活细胞的数量。比较药物系列浓度对培养细胞的不同抑制率，参照相应比较药物系列浓度对培养细胞的不同抑制率，参照相应判断指标，从而可以评估该化疗药物对肿瘤细胞的杀伤判断指标，从而可以评估该化疗药物对肿瘤细胞的杀伤效果。效果。 ATP + Lucif

8、erin + O2 AMP + 2Pi + Photons +OxylaluciferinLuciferaseATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究荧光强度与活细胞数量的关系荧光强度与活细胞数量的关系1001000100001000001000000100000001020408015831262512502500500010000200004000080000细胞数量( 个/ 孔）荧光强度( R L U )r0 .9986ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究4. .技术技术TumorSingle Cell suspensi

9、onMechanical andenzymatical dissociationIncubationfor 5-7 daysAddition of drugs/mediumATP-LuminescenceATP extractionand stabilizationSoftware EvaluationConstruction of dose-response plotsATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究5.适用肿瘤类型适用肿瘤类型 6.适用肿瘤标本类型适用肿瘤标本类型 神经母细胞瘤神经母细胞瘤 黑色素瘤黑色素瘤 甲状腺癌甲状腺癌 结直肠癌结直肠癌 乳腺癌

10、乳腺癌 卵巢癌卵巢癌 胰腺癌胰腺癌 肉瘤肉瘤 胃癌胃癌 肺癌肺癌实体瘤标本实体瘤标本胸腹水胸腹水活检淋巴结标本活检淋巴结标本ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究7. 国内外研究历史回顾国内外研究历史回顾ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究时间时间国家国家研究人研究人肿瘤类型肿瘤类型结论结论19881988年年美国美国Sevin BU, Sevin BU, Peng ZLPeng ZL卵巢癌卵巢癌阳性预测值：阳性预测值：92%92%，阴性预测值：，阴性预测值：90%90%整体预测精确值：整体预测精确值：86%86%19901

11、990年年日本日本Jinushi K, Jinushi K, HirabayashiHirabayashi胃癌胃癌预测精确性为预测精确性为88.9%88.9%19931993年年瑞士瑞士Koechli OR, Koechli OR, Avner BPAvner BP乳腺癌乳腺癌阳性预测值：阳性预测值：90%90%，阴性预测值：，阴性预测值：86%86%整体预测精确值：整体预测精确值：85%85%19951995年年美、英、德美、英、德三国协作三国协作Andreotti PE Andreotti PE Cree IACree IA 顺铂耐受卵顺铂耐受卵巢癌巢癌整体预测精确值：整体预测精确值：92

12、%92%19961996年年英国英国Cree IA, Cree IA, Kurbacher CMKurbacher CMIII/ IVIII/ IV期期乳腺癌乳腺癌整体预测精确值整体预测精确值：767619971997年年日本日本Kawamura H, Kawamura H, Ikeda KIkeda K胃肠道肿瘤胃肠道肿瘤阳性预测值：阳性预测值：64%64%，阴性预测值：，阴性预测值：100%100%整体预测精确值：整体预测精确值：84%84%20002000年年美国美国Konecny G, Konecny G, Crohns CCrohns CFIGO FIGO 期期卵巢癌卵巢癌阳性预测值

13、阳性预测值：66%66%，阴性预测值阴性预测值：89%89%敏感性敏感性：95%95%，特异性特异性：44%44%20002000年年德国德国Mollgard L, Mollgard L, Tidefelt UTidefelt U急性非淋巴急性非淋巴细胞白血病细胞白血病阳性预测值阳性预测值：86%86%，阴性预测值阴性预测值：100%100%20012001年年美国美国OMeara AT, OMeara AT, Sevin BUSevin BU上皮性卵巢上皮性卵巢癌癌阳性预测值阳性预测值：83%83%，阴性预测值阴性预测值：56.5%56.5%ATP-TCA技术的临床相关性研究结果技术的临床相

14、关性研究结果ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究ATP-TCA与其它药敏检测方法的相关性与其它药敏检测方法的相关性ATP-TCAATP-TCA技术与技术与DiSCDiSC法的相关性法的相关性ATP-TCAATP-TCA技术与技术与MTTMTT法的相关性法的相关性ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究8.目前先进国家对该技术的评价目前先进国家对该技术的评价 因此，ATP-TCA技术是目前最先进的体外药敏技术，该技术敏感，可靠，具有极大的临床应用价值ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究 ATP

15、生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究lATP-TCA技术的核心试剂技术的核心试剂l 1. 荧光酶试剂荧光酶试剂l 热稳定性和发光效率均好的重组酶试剂保证检测的敏感性和可热稳定性和发光效率均好的重组酶试剂保证检测的敏感性和可l 靠性，满足临床实际工作的需要靠性，满足临床实际工作的需要l 2. 培养基培养基l 肿瘤细胞选择性培养基支持肿瘤细胞生长增殖，促进正常细胞肿瘤细胞选择性培养基支持肿瘤细胞生长增殖，促进正常细胞 死亡，从而保证药敏检测的肿瘤细胞特异性死亡，从而保证药敏检测的肿瘤细胞特异性 下面我将就这两个核心试剂的研发汇报我所做的一些工作ATP生物荧光肿瘤体外药

16、敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究 荧光酶基因克隆、点突变、表达及纯化荧光酶基因克隆、点突变、表达及纯化(2001,4(2001,42001,10)2001,10) 肿瘤细胞选择性培养基配方筛选及优化肿瘤细胞选择性培养基配方筛选及优化(2001,5(2001,52001,12)2001,12) 检测技术核心试剂的质量标准的建立检测技术核心试剂的质量标准的建立(2002,1(2002,12002,3)2002,3) 工作内容及进展工作内容及进展ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究自荧火虫体内发光腺体提取荧光酶mRNA逆转录为cDNA,PCR扩增，

17、克隆构建重组质粒PET22b-luc设计点突变引物，定点突变荧光酶第245和215位氨基酸序列将含点突变PET22b-luc导入原核高效表达系统Ecoli-BL21筛选高表达株，高效稳定表达重组荧光酶通过蛋白工作站，纯化生产重组荧光酶制备冻干荧光酶制剂重组荧光酶研发路线重组荧光酶研发路线ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究荧光酶基因的克隆和鉴定荧光酶基因的克隆和鉴定PCRPCR产物电泳图产物电泳图重组质粒重组质粒PET22b-lucPET22b-luc鉴定图鉴定图ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究M215：GC AG A

18、laLeu M245：C G HisGln atggaagacgccaaaaacataaagaaaggcccggcgccattctatcctctagaggatggaaccgctggagagcaactgcataaggctatgaagagatacgccctggttcctggaacaattgcttttacagatgcacatatcgaggtgaacatcacgtacgcggaatacttcgaaatgtccgttcggttggcagaagctatgaaacgatatgggctgaatacaaatcacagaatcgtcgtatgcagtgaaaactctcttcaattctttatgccggtgtt

19、gggcgcgttatttatcggagttgcagttgcgcccgcgaacgacatttataatgaacgtgaattgctcaacagtatgaacatttcgcagcctaccgtagtgtttgtttccaaaaaggggttgcaaaaaattttgaacgtgcaaaaaaaattaccaataatccagaaaattattatcatggattctaaaacggattaccagggatttcagtcgatgtacacgttcgtcacatctcatctacctcccggttttaatgaatacgattttgtaccagagtcctttgatcgtgacaaaacaattgc

20、actgataatgaattcctctggatctactgggttacctaagggtgtggcccttccgcatagaactgc*ctgcgtcagattctcgcatgccagagatcctatttttggcaatcaaatcattccggatactgcgattttaagtgttgttccattccatcac*ggttttggaatgtttactacactcggatatttgatatgtggatttcgagtcgtcttaatgtatagatttgaagaagagctgtttttacgatcccttcaggattacaaaattcaaagtgcgttgctagtaccaaccctattt

21、tcattcttcgccaaaagcactctgattgacaaatacgatttatctaatttacacgaaattgcttctgggggcgcacctctttcgaaagaagtcggggaagcggttgcaaaacgcttccatcttccagggatacgacaaggatatgggctcactgagactacatcagctattctgattacacccgagggggatgataaaccgggcgcggtcggtaaagttgttccattttttgaagcgaaggttgtggatctggataccgggaaaacgctgggcgttaatcagagaggcgaattatgtgtc

22、agaggacctatgattatgtccggttatgtaaacaatccggaagcgaccaacgccttgattgacaaggatggatggctacattctggagacatagcttactgggacgaagacgaacacttcttcatagttgaccgcttgaagtctttaattaaatacaaaggatatcaggtggcccccgctgaattggaatcgatattgttacaacaccccaacatcttcgacgcgggcgtggcaggtcttcccgacgatgacgccggtgaacttcccgccgccgttgttgttttggagcacggaaagacg

23、atgacggaaaaagagatcgtggattacgtcgccagtcaagtaacaaccgcgaaaaagttgcgcggaggagttgtgtttgtggacgaagtaccgaaaggtcttaccggaaaactcgacgcaagaaaaatcagagagatcctcataaaggccaagaagggcggaaagtccaaattgtaa ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究G C ,导致第245位氨基酸置换(HisGln) 测序单位：上海生工GC AG,导致第215位氨基酸置换(AlaLeu)ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)

24、的建立及其临床应用研究 荧光酶表达荧光酶表达电泳图电泳图 纯化后电泳图纯化后电泳图荧光酶蛋白质荧光酶蛋白质电泳图电泳图ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究0%20%40%60%80%100%0510152025303537度孵育时间（m i n ）残留活性M245突变型荧光酶M215突变型荧光酶野生型荧光酶图图1：野生型和突变型荧光酶热稳定性比较：野生型和突变型荧光酶热稳定性比较野生型和突变型荧光酶活性比较野生型和突变型荧光酶活性比较10010001000010000010000001000000025083.33 27.78 9.26 3.091.030.

25、340.11ATP浓度（n g / ml）荧光强度（R L U ）M245突变型荧光酶野生型荧光酶图图2：野生型和突变型荧光酶发光效率及线：野生型和突变型荧光酶发光效率及线性关系比较性关系比较ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究l重组重组荧光酶制剂稳定性研究荧光酶制剂稳定性研究放置放置温度温度活性半衰期活性半衰期液体保存液体保存冻干品冻干品-20-208080天天360360天天442020小时小时180180天天25253.83.8小时小时2121天天37370.80.8小时小时3 3天天因此，我们将热稳定性和发光效率均好的M245突变荧光酶冻干制剂作为药

26、敏检测用酶制剂 *重组荧光酶为M245突变型荧光酶ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究00.511.522.51234567培养时间（天）荧光强度（1 0 E + 0 5 RLU）MCF-7A549Eca109选择性培养基生长支持度及选择性研究选择性培养基生长支持度及选择性研究0.0010.010.11101234567培养时间（天）荧光强度（1 0 E + 0 5 RLU）正常组织良性组织肿瘤组织淋巴细胞肿瘤细胞系生长曲线肿瘤细胞系生长曲线正常、良性卵巢及肿瘤组织培养生长曲线正常、良性

27、卵巢及肿瘤组织培养生长曲线ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究 新鲜瘤组织体外培养效果图新鲜瘤组织体外培养效果图ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究ContinuedATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究卵巢癌原代培养前后卵巢癌原代培养前后HE及免疫组及免疫组化染色化染色PAN-KERATIN染色ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究正常卵巢上皮细胞及成纤维细胞正常卵巢上皮细胞及成纤维细胞培养结果培养结果正常上皮细胞培养抑制效果图正常上皮细胞培养抑制效果图

28、成纤维细胞培养抑制效果图成纤维细胞培养抑制效果图ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究培养前后细胞组成变化 培养前细胞组成培养前细胞组成 6天培养后细胞组成天培养后细胞组成淋巴 上皮 成纤维 肿瘤 淋巴 上皮 成纤维 肿瘤 细胞 细胞 细胞 细胞 细胞 细胞 细胞 细胞 40-50% 10-25% 5-10% 10-20% 1% 10% 75%选择性培养基的研究结果表明该培养基具有良好的选择性，适合肿瘤体外药敏检测的需要ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究 1、培养基对肿瘤细胞生长支持程度、培养基对肿瘤细胞生长支持程度 以M

29、CF-7细胞系作为标准细胞系，按2000个细胞/孔接种浓度接种至96孔培养板中，培养七天后，要求测定的RLU值400000。2、ATP标准曲线标准曲线 将ATP标准品配成250ng/ml，倍比(3)稀释7次，做出ATP浓度与RLU（扣除本底吸收值）的标准曲线，要求：r0.995，最小ATP浓度（0.11ng/ml）的RLU400。3、精密度、精密度 选MCF-7细胞系低、中、高（500、10000、40000个）数目的细胞，分别测定十组RLU值，要求： CV440RLU，同时本底值200 RLU。ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究第三部分第三部分ATP-T

30、CAATP-TCA体外药敏检测技术的临体外药敏检测技术的临床应用研究床应用研究ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究 ATP-TCA 药物测试方式药物测试方式ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究评价标准评价标准强敏感(SS)：IC5025%及IC90100%PPC中度敏感(IS)：IC50100%PPC轻度敏感(MS)：IC5025%及IC9025%及IC90100%PPCIC90:抑制90%肿瘤细胞生长的血浆峰值浓度百分比IC50:抑制半数肿瘤细胞生长的血浆峰值浓度百分比PPC:一定临床用药剂量对应的血浆峰值浓度ATP生物

31、荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究病病例例数数 3 4 年年龄龄 肿肿瘤瘤类类型型 53 (34-74) yrs. 上上皮皮性性卵卵巢巢癌癌 生生殖殖细细胞胞肿肿瘤瘤 标标本本类类型型 实实体体瘤瘤标标本本 32 2 28 腹腹水水标标本本 手手术术病病理理分分期期（F IG O ） 6 18 16 紫紫杉杉醇醇+ 卡卡铂铂方方案案耐耐受受病病人人 8 ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究 表表1：卵巢癌体外药敏检测与临床疗效的比较：卵巢癌体外药敏检测与临床疗效的比较临床相关性研究初步结果临床相关性研究初步结果 例数 体外检测 体

32、外检测 敏感 (SS+IS) 耐药(WS+R)共计 体内敏感（CR+PR） 体内耐药（SD+PD） 18 2 20 1 11 12 共计 19 13 32*34例卵巢癌中可评价标本为32例，标本可评价率为94.1%ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究 表表2：卵巢癌体外药敏检测真实性评价：卵巢癌体外药敏检测真实性评价阳性预测值阴性预测值灵敏度特异性 90.6% 94.7% 84.6% 90% 91.7%整体预测值ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究1. 设计个体化治疗方案设计个体化治疗方案2. 研究新的联合化疗方案研究新的

33、联合化疗方案3. 化疗药物新适应症研究化疗药物新适应症研究ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究020406080100100502512.56.25Test Drug Concentration (%)Tumor Growth Inhibition (%)DDP+VP16+VCRGEM+DDPCTX+ADM+CBPVP16+CBPGEM+THPBLM+CTX+ACTDBLM+VP16+CBPIFO+VP16+ADM020406080100100502512.56.25Test Drug Concentration (%)Tumor Growth Inhibi

34、tion (%)5-FU+DDP+THPPTX+CBPNVB+EPIGEM+PTXBLM+DDP+VCRMMCHCPT+DDPBLM+DDP+5-FU1. 1. 设计个体化治疗方案设计个体化治疗方案ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究药物名称药物名称IC50（PPC%）杀伤作用评估杀伤作用评估BLM+DDP+VCR12.69%部分敏感药物部分敏感药物BLM+DDP+5-FU18.59%轻度敏感药物轻度敏感药物BLM+CBP +VP1614.79%部分敏感药物部分敏感药物VP16+CBP28.16%轻度敏感药物轻度敏感药物THP+DDP+5-FU14.79%部

35、分敏感药物部分敏感药物VP16+DDP+VCR6.32%较敏感药物较敏感药物IFO+VP16+ADM25.5%轻度敏感药物轻度敏感药物CTX+ADM +CBP32.4%耐药药物耐药药物NVB+EPI0.76%强敏感药物强敏感药物ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究治疗前治疗前 该患者经多重化疗方案复发，颈侧、右锁骨下、胸壁、纵隔淋巴结广泛转该患者经多重化疗方案复发，颈侧、右锁骨下、胸壁、纵隔淋巴结广泛转移，气管、食管压迫移位并伴有吞咽困难。胸水活检发现癌细胞，淋巴结病理移，气管、食管压迫移位并伴有吞咽困难。胸水活检发现癌细胞，淋巴结病理活检证实为绒毛膜上皮癌

36、，活检证实为绒毛膜上皮癌，HCG激素水平为激素水平为600u/ml。治疗后治疗后（NVB+EPI方案一个半周期以后）方案一个半周期以后） 胸水消失，颈侧、右锁骨下、胸壁、纵隔淋巴结病灶缓解或消失，可以进胸水消失，颈侧、右锁骨下、胸壁、纵隔淋巴结病灶缓解或消失，可以进食，食，HCG激素水平降至激素水平降至60u/ml。因此ATP-TCA技术对于开展肿瘤患者的个体化治疗极具指导意义ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究 ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究 ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究

37、 因此ATP-TCA技术的建立为肿瘤新化疗方案的研究和临床应用建立了重要技术平台 ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究 ATP-TCA检测技术是一种先进的药敏检测技术，其具有相检测技术是一种先进的药敏检测技术，其具有相关性好（关性好（r=0.9981）；）；量程宽，跨越量程宽，跨越4个数量级（个数量级（10-80000个细个细胞）；检测敏感程度高（最小检测胞）；检测敏感程度高（最小检测10个细胞）的优点。个细胞）的优点。 34例卵巢癌体外药敏检测结果表明，例卵巢癌体外药敏检测结果表明，ATP-TCA技术可反映不技术可反映不同病人对药物的敏感性的个体差别，标本

38、可评价率高，其结果同病人对药物的敏感性的个体差别，标本可评价率高，其结果与临床疗效及相关临床资料有较好的吻合性：整体预测值与临床疗效及相关临床资料有较好的吻合性：整体预测值90.6%，阳性预测值阳性预测值94.7%，阴性预测值，阴性预测值84.6%，敏感性，敏感性90%，特异性，特异性91.7%。 同时，该技术对抗肿瘤药物筛选和应用、临床药物新适应症同时，该技术对抗肿瘤药物筛选和应用、临床药物新适应症研究、化疗方案筛选和评估以及推广个体化治疗具有实际指导研究、化疗方案筛选和评估以及推广个体化治疗具有实际指导意义。意义。 本研究为该技术的初步临床应用研究，为了进一步证实其临本研究为该技术的初步临

39、床应用研究，为了进一步证实其临床应用价值，大样本的病例药敏研究是必要的。床应用价值，大样本的病例药敏研究是必要的。 ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究 ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究 已发表已发表 1.王燕，傅军等.脂肪酸合成酶在非小细胞肺癌诊断及预后的临床意义.中华外科 杂志.2001,14（5）45-47. 2.Xu M, Jin Y-L, Fu J, The abnormal expression of retinoic acid receptor-beta, p53 and Ki67 protein in

40、normal, premalignant and malignant esophageal tissues. World J Gastroenterol. 2002,8(2):200-2. 待发表待发表 3.Jun Fu, Ping Qu, Mo Li, et al.Expression of plant associated human cancer antigen in normal, premalignant, and malignant esophageal tissues. World J Gastroenterol. 4.傅军，田海梅等.植物相关人肿瘤抗原在乳腺癌中的表达及其临床意

41、义.中华肿瘤杂志。 5.田海梅，傅军等.人乳腺癌细胞异质性及其生物学行为研究.中华肿瘤杂志。 ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究 衷心感谢我的导师张伟研究员三年来对我的辛勤教诲和培养。本文是在他的悉心关怀和指导下完成的。三年来导师在科学上的远见卓识、严谨的工作作风、虚怀若谷的胸怀和正直的人品一直是我学习的楷模并使我受益终身。 本论文是在肿瘤研究所肿瘤生物学检测中心完成的，在这里得到了田海梅老师的极大支持和指导。实验室刘毅、曲平、刘朝阳老师都给予我热情的帮助、支持和指导，我的师弟黄泓，王小兵也参与了部分研究工作，在此表示最衷心的感谢。 本课题系由肿瘤医院妇瘤

42、科与肿瘤生物学检测中心合作进行，肿瘤标本由妇瘤科提供，在这里得到了吴令英主任和张凯主治医师的热情指导和帮助，在此向他们表示衷心的感谢。 教育处林赛荣老师和王珑珑老师在我的学习和生活上给予许多关怀、帮助和照顾，令我感激不尽。谨在此向所有关心和帮助过我的老师和同学致以衷心的感谢。 ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究Enjoy the flashes sparkling the nightThank you for your attention!ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究 P Pr re ed di i c ct t

43、i i v ve e V Va al l u ue e n n + + - - S Se en ns s. . S Sp pe ec c. . 2 23 30 00 0 6 69 9% % 9 91 1% % 7 79 9% % 8 86 6% % 4 49 94 4 5 51 1% % 9 92 2% % 8 86 6% % 6 66 6% % 5 51 10 0 7 77 7% % 9 92 2% % 9 94 4% % 7 71 1% % 3 32 26 6 8 83 3% % 7 73 3% % 8 87 7% % 6 67 7% % 1 12 29 9 9 93 3% % 8 86

44、6% % 9 90 0% % 8 86 6% % adapted from: DeVita VT, Hellman S, Rosenberg SA: Cancer: Principles and Practice of Oncology,1997AssayHTCA3H-TDISCMTTATPATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究n 28 28 C R 6 (21,5% ) 8 (29% ) PR 7 (25% ) 14 (50% ) SD 11 (39.5% ) 4 (14% ) PD 4 (14% ) 2 (7% ) R R 46.5% 79% PFS (M

45、 edi an) 35 W ks. 50 W ks. O A S (M edi an) 67 W ks. 97 W ks. 传统化疗 ATP-TCA指导化疗ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATPTCA)的建立及其临床应用研究050100150200250020406080100ATP-TCAATP-TCA指导的化疗指导的化疗 (n = 39)传统化疗传统化疗(n = 17)p = 0,0009Weeks% Patients050100150200250020406080100ATP-TCAATP-TCA指导的化疗指导的化疗 (n = 39)传统化疗传统化疗(n = 17)p = 0,0016Weeks% PatientsOverall SurvivalProgression free Survival引自引自Kurbacher CM, Cree I