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文档简介
1、引物查询方法一共有两种查询引物的方法, 包括primerbank和primer3,当我 们查到引物时,我们需要用 Pubmed来验证.详细说明见下文.I.Primerba nk用引物银行查询引物时,我们只需要输入引物的名称,种属 1. 将search by修改为 keyword2. 将species修改为您 所需要的种属,如mouse3.输入您所需查的基因您将得到所需查的基因的弓物 的结果J'*4.点击submit点击这里,您将看到引物在编码 序列中的位置点击这里绿色的局部,您可 以看到这个引物的 Qpcr的 结果2.primer 3使用这个工具之前您需要在 Pubme中查到您的目的基
2、因的序列,然后黏贴到 primer3中,软件便会自动设计引物.Pumed勺使用方法如下: 修改为 nucleotide输入您的目 的基因,如atg7最后单击search点击这里选种属筛选符合您需求的,我们 是自噬相关的atg 7,因此 选这个点击fasta选项这就是您所要的序列,B复制VPrimer3 翻开primer3的网址修改为None黏贴如在pubmed中查到 的基因序列选中 pick left 和 pick right修改为您所需产物的大小 范围点击这个选项这就是结果的页面这个是软件默认的最 好的引物,下面还有其 他引物下拉页面,您将看到软件 对您的基因锁设计的全部 引物完成引物的设计后,我们可以用 pubmedblast来验证引物Blast 输入网址会显示以下页面,根据以下步骤便可验证.输入网址后选择网页下面的这个地方,primer blast输入查得的上下游引物的序 列修改您所期望得到的扩增产物 的大小,女口 qpcr 般在200以 内最后点击页面最下的此选项修改种属大概就是这样,缺乏之处还望大家给予建议和谅解点击这个紫色的,这是引物的一 个编号,您会看到详细的介绍K 这个页面有引物的位置
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