抗生素类药物的

1、基本要求基本要求一、掌握抗生素类药物的结构特点与分析方法一、掌握抗生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。之间的关系。二、掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法。二、掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法。三、掌握抗生素类药物法定含量测定方法的原三、掌握抗生素类药物法定含量测定方法的原理、测定方法与计算。理、测定方法与计算。四、熟悉抗生素类药物杂质检查的方法。四、熟悉抗生素类药物杂质检查的方法。五、了解抗生素类药物中高分子聚合物检查。五、了解抗生素类药物中高分子聚合物检查。第一节第一节 概述概述定义：在低位浓度下即可对某些生物的生命活动有特意定义：在低位浓度下即可对某些生物的生命活动有特意抑制作用的化学

2、物质的总称。其生产过程如下：抑制作用的化学物质的总称。其生产过程如下：化学纯度较低化学纯度较低活性组分易发生变异活性组分易发生变异稳定性差稳定性差药物药物的特的特点点微生物发酵微生物发酵化学纯化化学纯化精制精制化学修饰化学修饰制剂制剂2.2.抗生素类药物的质量分析抗生素类药物的质量分析（一）鉴别试验（一）鉴别试验 官能团的显色反映官能团的显色反映 光谱法：红外和紫外吸收光谱光谱法：红外和紫外吸收光谱 色谱法：色谱法：TLC、HPLC 生物学法生物学法（二）检查（二）检查 影响产品稳定性的指标：结晶性、酸碱度、水分；影响产品稳定性的指标：结晶性、酸碱度、水分； 控制有机和无机杂志的指标：溶液的澄

3、清度与颜色、控制有机和无机杂志的指标：溶液的澄清度与颜色、 有关物质、残留溶剂、残渣、重金属等；有关物质、残留溶剂、残渣、重金属等； 与临床安全性密切相关的指标：异常毒性、热源、与临床安全性密切相关的指标：异常毒性、热源、 降压物质、无菌等；降压物质、无菌等； 其他指标其他指标（三）含量测定或效价测定（三）含量测定或效价测定1.1.微生物鉴定法：一对抗生素对微生物的杀伤力或抑制微生物鉴定法：一对抗生素对微生物的杀伤力或抑制程度为指标来衡量抗生素效价的方法程度为指标来衡量抗生素效价的方法2.2.理化方法：根据抗生素的结构特点，利用其特有的化理化方法：根据抗生素的结构特点，利用其特有的化学或物理性

4、质及反应而进行的学或物理性质及反应而进行的3.3.抗生素活性表示方法：抗生素的活性以效价单位来表抗生素活性表示方法：抗生素的活性以效价单位来表示：示：每每mlml或每或每mgmg中含有某种抗生素的有效成分的多少，用单中含有某种抗生素的有效成分的多少，用单位（位（u u）或）或g g 表示。表示。 1mg1mg青霉素青霉素G G钠盐定为钠盐定为16671667单位单位 1mg1mg青霉素青霉素G G钾盐的单位（钾盐的单位（u u） =1667=1667356.4/372.5=1595u/mg356.4/372.5=1595u/mg3. 微生物学法与理化法的比较微生物学法与理化法的比较微生物检定法

5、微生物检定法理理 化化 法法以抗生素对微生物的杀伤或抑制程以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标衡量抗生素的生物效价度为指标衡量抗生素的生物效价 根据抗生素结构特点，利用其根据抗生素结构特点，利用其特有的理化性质测定其含量特有的理化性质测定其含量已知或新发现的抗生素、精致品或已知或新发现的抗生素、精致品或粗制品均能测定粗制品均能测定 测定化学结构已知、已提纯的测定化学结构已知、已提纯的抗生素抗生素灵敏度高、样品需用量小、反映抗灵敏度高、样品需用量小、反映抗生素的医疗价值，但操作步骤多、生素的医疗价值，但操作步骤多、费时、费时、误差大误差大 迅速、准确、专属性高、样品迅速、准确、专属性高、样品需

6、用量小、操作简单、省时需用量小、操作简单、省时4.4.分类分类（按结构与性质）：（按结构与性质）： 内酰胺类、氨基糖苷类、内酰胺类、氨基糖苷类、 四环素类、大环内酯类、四环素类、大环内酯类、 氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、其他抗生素类林可霉素类、其他抗生素类第二节第二节 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 青霉素类青霉素类NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核（母核（6-6-氨基青霉烷酸）氨基青霉烷酸）AB头孢菌素类头孢菌素类7654321NONHSCH2R1COOH母核（7-氨基头孢菌烷酸）RCOABCONSOHNCOOHCH3CH3CH2青霉素

7、青霉素（青霉素钾、钠）（青霉素钾、钠）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH2氨苄西林氨苄西林（氨苄青霉素）（氨苄青霉素）阿莫西林阿莫西林（羟氨苄青霉素）（羟氨苄青霉素）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2C2H5 2NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素头孢氨苄头孢氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2头孢拉啶头孢拉啶CH2NH2CONONHSCH3COOH头孢羟氨苄头孢羟氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2HO头孢噻吩钠头孢噻吩钠SCH2CONONHSCH2OCOCH3COONaNSOHNCOOKCH

8、3CH3OCCH2结构特点与性质结构特点与性质一、一、NaNa与碱金属与碱金属(Na(Na+ +、K K+ +) )成盐成盐 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 酸性酸性与有机碱与有机碱( (普鲁卡因普鲁卡因) )成盐成盐 难溶于水难溶于水普鲁卡因普鲁卡因青霉素青霉素C2H5 2NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567（二）（二）手性手性C C 87654321NOS头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 旋光性旋光性 （三）共轭体系（三）共轭体系 NSO头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 青霉素类青

9、霉素类 母核无明显母核无明显UVUV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 NOS UVUV（四）（四）内酰胺环内酰胺环 水溶液水溶液 不稳定不稳定 干燥纯净干燥纯净 稳定稳定 不稳定不稳定性因素性因素四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 青霉素类青霉素类 某些氧化剂某些氧化剂酸、碱、青霉素酶酸、碱、青霉素酶（某些金属离子）（某些金属离子） （温度）（温度）降解降解失效失效例例青霉素的降解反应青霉素的降解反应青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羟胺酸酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青

10、霉醛青霉醛HgCl2头孢菌素类头孢菌素类酸、碱、胺类酸、碱、胺类 -内酰胺酶内酰胺酶降解降解失效失效（一）呈色反应（一）呈色反应1. 1. 羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应-内酰胺类内酰胺类呈色呈色羟肟酸衍生物羟肟酸衍生物Fe3+/3H+二、鉴别试验二、鉴别试验 NaOH2 2HClNOHH- - 内酰胺类内酰胺类NSONSCOHNHOHH2NOH HClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3 （红、棕、褐）（红、棕、褐）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH22. 茚三酮反应茚三酮反应 - -氨基氨基 -氨基氨基茚三酮茚三酮 蓝紫色蓝紫色3. 双缩脲反应双缩脲反应- - - CONH（开环

11、分解）（开环分解） - 内酰胺类内酰胺类碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜紫紫4. 与重氮苯磺酸反应与重氮苯磺酸反应橙黄色橙黄色重氮苯磺酸重氮苯磺酸- - -5 56 6OHHC（偶合）（偶合）酚羟基酚羟基头孢哌酮头孢哌酮5. 与变色酸与变色酸- -硫酸反应硫酸反应活泼活泼“-CH2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨苄西林氨苄西林HCHOCHSOH- - - 2 22 2”羰羰基基侧侧链链含含“（分解分解）变色酸变色酸显色显色1. K+、Na+的火焰反应的火焰反应（二）各种盐的反应（二）各种盐的反应 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 + 醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼钠四苯硼

12、钠 + Ac白白 K+2. 沉淀反应（青霉素盐）沉淀反应（青霉素盐）遇酸遇酸白白青霉素青霉素青霉素钠青霉素钠青霉素钾青霉素钾緘緘+ +H3. 重氮化重氮化 - - 偶合反应偶合反应 青霉素青霉素普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素+ + + +H重氮化重氮化-偶合反应偶合反应红红 芳伯氨基芳伯氨基4. 与三硝基苯酚反应与三硝基苯酚反应 三三硝硝基基苯苯酚酚二二苄苄基基乙乙二二胺胺苄苄星星青青霉霉素素NaOH二苄基乙二胺二苄基乙二胺三硝基苯酚三硝基苯酚H2OHOH-HCONSOHNCOOHCH3CH3CH2CH2NCH2CH2NHCH2OHNO2O2NNO2CH2NCH2CH2NHCH2

13、光谱法光谱法（三）（三）1、 UV法法样品、分解产物样品、分解产物nm339HA + +苯唑青霉烯酸苯唑青霉烯酸苯唑青霉素苯唑青霉素Cu2+A,Emin,max,%1cm1 光光谱谱图图头孢氨苄头孢氨苄 max = 262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm = 1.301.50NOCONHCH3NOSCH3CH3COONaNOCHCH3OCOCNHNCHHCCH3CH3SHCHCOOHpH3.8分子重排分子重排2、IR法法3180cm-1 N-H内酰胺内酰胺 C=O1780cm-13470cm-1 O-H1690cm-1仲酰胺仲酰胺 C=O1250cm-1 C-O以阿莫西林为例

14、以阿莫西林为例色谱法色谱法（四）（四）1、 TLC法法对照品对照法对照品对照法和和斑斑点点颜颜色色比比较较供供试试品品对对照照品品相相同同条条件件fR2、 HPLC法法Rt比较比较供试品供试品对照品对照品相同条件相同条件三、杂质检查三、杂质检查 药物药物 检查项目检查项目 检查方法检查方法 头孢他啶头孢他啶 聚合物聚合物 HPLCHPLC法法 头孢曲松钠头孢曲松钠 头孢哌酮钠头孢哌酮钠 头孢噻肟钠头孢噻肟钠 头孢呋辛酯头孢呋辛酯 有关物质和异构体有关物质和异构体 HPLCHPLC法法 头孢氨苄头孢氨苄 有关物质有关物质 反相反相TLCTLC法法 青霉素钾（钠）青霉素钾（钠） 吸收度吸收度 紫外

15、分光光度法紫外分光光度法 1. 1.头孢他啶聚合物的测定头孢他啶聚合物的测定 固定相：葡聚糖凝胶固定相：葡聚糖凝胶G-10G-10（ 40120m 40120m ） 流动相流动相A A：3.5%3.5%硫酸铵的硫酸铵的0.01mol/L0.01mol/L磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液 流动相流动相B B：0.01%0.01%十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠 对照品溶液：头孢他啶对照品对照品溶液：头孢他啶对照品 100g/ml100g/ml1 1）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用用1mg/ml1mg/ml蓝色葡聚糖蓝色葡聚糖20002000、流动相、流动相A A

16、测定；重测定；重复性用对照品溶液、流动相复性用对照品溶液、流动相B B测定。测定。 N N不低于不低于900900，拖尾因子，拖尾因子0.0.751.5.5，峰面积的，峰面积的RSDRSD应小于应小于5.0%5.0%。2 2）测定方法）测定方法 进样供试液，用流动相进样供试液，用流动相A A；进样对照液，；进样对照液，用流动相用流动相B B。以外标法计算，含头孢他啶聚合。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过物以头孢他啶计不得超过0.3%0.3%。2.2.头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查 固定相：固定相：ODSODS 流动相：流动相：0.2mol

17、/L0.2mol/L磷酸二氢铵磷酸二氢铵- -甲醇（甲醇（62:3862:38） 1 1）头孢呋辛酯）头孢呋辛酯2 2- -异构体的制备：头孢呋辛酯对异构体的制备：头孢呋辛酯对 照品照品+ +流动相流动相 头孢呋辛酯头孢呋辛酯2 2- -异构体。异构体。2 2）系统适用性试验：各异构体之间的）系统适用性试验：各异构体之间的R1.5R1.5，以，以 头孢呋辛酯头孢呋辛酯A A异构体计算异构体计算n1500n1500。 3 3）异构体：）异构体： ttR1R1 相对保留时间相对保留时间 r r1212=- 1-=- 1-被测物被测物 ttR2 R2 2-2-标准物标准物异构体异构体 相对保留时间相

18、对保留时间 判断判断B B异构体异构体 0.85 0.85 供试液谱图中供试液谱图中A A异构体的峰面积异构体的峰面积A A异构体异构体 1.0 1.0 与与A A、B B异构体峰面积和之比应异构体峰面积和之比应 为为0.0.480.55.55。 3.3.头孢氨苄中有关物质的检查头孢氨苄中有关物质的检查-反相反相TLCTLC法法 固定相：活化后的硅胶固定相：活化后的硅胶G G板置板置5%5%（V/VV/V）正十四）正十四 烷的正己烷溶液中，展至顶部，凉干烷的正己烷溶液中，展至顶部，凉干 展开剂：展开剂：0.1mol/L0.1mol/L枸橼酸枸橼酸-0.2mol/L-0.2mol/L磷酸氢二磷酸

19、氢二 钠钠- -丙酮（丙酮（120120：8080：3 3） 供试液：本品供试液：本品 50mg/ml 50mg/ml 对照液（对照液（1 1）：本品）：本品 0.5 mg/ml0.5 mg/ml 对照液（对照液（2 2）：）：-苯甘氨酸苯甘氨酸 0.5 mg/ml0.5 mg/ml 对照液（对照液（3 3）：）：7-7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸氨基去乙酰氧基头孢烷酸 0.5 mg/ml0.5 mg/ml结果判断结果判断：供试液如显杂质斑点，与对：供试液如显杂质斑点，与对照液（照液（2 2）（）（3 3）位置相同上所的斑点比）位置相同上所的斑点比较，其颜色不得更深；如显其他杂质斑较，其颜色不得更

20、深；如显其他杂质斑 点，与对照液（点，与对照液（1 1）所显的主斑点比较，）所显的主斑点比较，其颜色不得更深。其颜色不得更深。4.4.青霉素钠（钾）的吸收度检查：青霉素钠（钾）的吸收度检查： 供试液供试液 1.80mg/ml1.80mg/ml， 结果判断：结果判断：A A280280不得大于不得大于0.100.10- -8 8I2 2 I+ +H碘量法碘量法（一一）1. 原理原理水解产物水解产物6 6 2 2 2 22 22 22 2OSNaNaIOSNaI定量过量定量过量剩余剩余ChP四、含量测定四、含量测定（水解水解）NaOH头孢菌素族头孢菌素族青霉素族青霉素族反应分两步进行：反应分两步进

21、行：1. 1. 水解反应水解反应( (按化学计算量进行按化学计算量进行) )2. 2. 氧化氧化- -还原反应还原反应( (无固定的量关无固定的量关系，受温度、系，受温度、PHPH值和时间等因素值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定用标准品平行对照测定) )NSCH3CH3COOHOHNRCORCOHHNCOONaCH3CH3SNCOONaI24+ 5H2O+ 2HClNaOHCCH3CH3SO3HCHNH2COOHCHNHCORCOOH2+2NaCl+8HI第一步第一步第二步第二步V样空样空V样样对照液对照液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回

22、滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴 V对空对空V对对2. 方法方法供试液供试液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴 空白试验空白试验A、消除样品已降解产物的干扰消除样品已降解产物的干扰B、消除样品中其他消耗碘的杂消除样品中其他消耗碘的杂 质的干扰质的干扰C、消除碘挥发造成的误差消除碘挥发造成的误差 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定空白空白样品样品I2Na2S2O3I-I2 采用标准品平行对照测定采用标准品平行对照测定A、可消除温度、可消除温度、pHpH、操作、环、操作、环 境等条件的影响境等条件的影响B、使本法测定结

23、果与微生物检定使本法测定结果与微生物检定 法一致法一致3. 条件条件（1）弱酸性弱酸性 pH4.5碱碱 I2 IO3- + I-酸酸 普鲁卡因与碘在酸性条件普鲁卡因与碘在酸性条件 下会产生复盐沉淀下会产生复盐沉淀（2）温度温度 2426温度温度38 未水解的供试品亦消耗碘未水解的供试品亦消耗碘（3）水解时间水解时间以水解以水解2020分钟后的耗碘量最大分钟后的耗碘量最大（4）反应时间反应时间反应反应2020分钟后，耗碘量随时间的分钟后，耗碘量随时间的变化较小，可减小含量测定的误变化较小，可减小含量测定的误差。差。4. 特点特点（1）灵敏度高灵敏度高样品样品 : 碘碘 = 1 : 8（2）反应条

24、件、实验操作要求高反应条件、实验操作要求高V对对、V对空对空V样样、V样空样空1份含量份含量加试剂次序、反应时间、滴定速度相同加试剂次序、反应时间、滴定速度相同4I28I-5. 计算计算原料原料%WWVVVV对对照照品品）（）（含含量量样样对对对对对对空空样样样样空空 - - -相当于标示量%=S0 -SR0 -RCUWU0D平均装量 100%制剂制剂电位配位滴定法（汞量法）电位配位滴定法（汞量法）（二二）1. 原理原理SHROH- - -青霉素族青霉素族（水解水解）HgRS2 2）（青霉素族青霉素族ChP+ +2 2Hg6 6 .pH2. 方法方法 总总样样VNOHgHNONaOH2 2 醋

25、酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液pH4.6滴定滴定水解水解( (降降) )空空醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液V(NO3)2HgpH4.6滴定滴定样样品品 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定3、 讨论讨论（1）水解必须完全水解必须完全（2）汞盐滴定液用汞盐滴定液用EDTAEDTA标定标定（3）空白试验空白试验 消除已降解产物干扰消除已降解产物干扰（4）优点优点 不需标准品不需标准品%WFTV%WFTV% - - 空空空空样样样样含量含量4、 计算计算%FTWVWV% - - ）（含含量量空空空空样样样样可见可见- -紫外分光光度法紫外分光光度法（三三）1、 酸水解酸水解-铜盐法铜盐法稳定剂稳定

26、剂nmCupHpHA22 + +2 2青霉烯酸青霉烯酸青霉素族青霉素族（水解）（水解）CH2COCONHHCCH3CH3CCOOHCCNHSHCONSOHNCOOHCH3CH3CH2 pHACu+ +2 22、 硫醇汞盐法硫醇汞盐法（1）原理原理青霉烯酸硫醇汞盐青霉烯酸硫醇汞盐青霉素族青霉素族HgCl2（咪唑咪唑）nmmax 5 5 2 25 5 HgClCH3CH3COONaSNHCONCH2NHCOCH3NSOHNCOONaCH3CH3OCCH2NHCOCH32 2HgCl咪唑咪唑nmmax 5 5 2 25 5 （2）方法方法对照品法对照品法%WWAA%对照品对照品样样标标标标样样 计算

27、计算标标样样咪咪唑唑硼硼酸酸缓缓冲冲液液标标准准液液供供试试液液AAHgCl- -2pH 9（3）注意注意 侧链有侧链有-NH-NH2 2时，需加醋酐先时，需加醋酐先 将其乙酰化后才能发生上述将其乙酰化后才能发生上述 反应反应NSOHNCOOCH3CH3OCCH2NH2NaNSOHNCOONaCH3CH3OCCH2NHCOCH3 OCHCH2 22 2 pH93、 羟肟酸比色法羟肟酸比色法Fe3+/3H+红色红色NaOHHClNOHH2- - 内酰胺类内酰胺类羟肟酸衍生物羟肟酸衍生物HPLCHPLC法法ChPChP 内标法校正因子内标法校正因子外标法外标法特点特点 快速、高效、灵敏快速、高效、

28、灵敏 专属性强、重现性好专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测）一法多用（鉴别、检查、含测）第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素苷苷苷苷元元糖糖缩缩合合 + +氨基糖苷氨基糖苷苷元苷元氨基糖氨基糖缩合缩合 + +链霉素链霉素 双氢链霉素双氢链霉素新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素庆大霉素庆大霉素 巴龙霉素巴龙霉素链霉素链霉素链霉胍链霉胍 + 链霉糖链霉糖 + N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 苷元苷元糖糖链霉双糖胺链霉双糖胺NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺

29、NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺巴龙霉素巴龙霉素D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺+ +脱氧链霉胺脱氧链霉胺+D-+D-核糖核糖+ +巴龙霉糖巴龙霉糖巴龙胺巴龙胺苷元苷元巴龙二糖胺巴龙二糖胺 糖糖 D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺脱氧链霉胺脱氧链霉胺D-D-核糖核糖巴龙霉糖巴龙霉糖OOOOHOCH2OHHONH2HOOOHNH2NH2OHOOHR2NH2CH2OH*R1庆大霉素庆大霉素 糖糖 苷元苷元绛红糖胺绛红糖胺 + 脱氧链霉胺脱氧链霉胺 + 加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 ROC R1R2H

30、NNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺ROC R1R2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺庆大霉素庆大霉素C复合物复合物 庆大霉素庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素庆大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H 庆大

31、霉素庆大霉素C2b R=R1=H R2=CH3一一、结构与性质结构与性质多与硫酸成盐多与硫酸成盐链霉素链霉素 3 3个个庆大霉素庆大霉素 5 5个个碱性中心碱性中心碱性碱性（一）（一）水溶性水溶性溶解性溶解性（二）（二）链霉素链霉素 pH57.5庆大霉素庆大霉素 pH212 稳定稳定稳定性稳定性（四四）UV（三三）NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3坂口反应坂口反应N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反应糖胺反应麦芽酚反应麦芽酚反应二二、 鉴别鉴别 茚三酮反应茚三酮反应（一一）蓝蓝紫紫色色庆庆大大霉霉素素链链霉霉素素茚茚三三酮酮羟基胺结构羟基胺

32、结构 Molisch 试验试验（二二）氨基糖苷类氨基糖苷类H+ 糠醛糠醛羟甲基糠醛羟甲基糠醛 -萘酚萘酚 蒽酮蒽酮呈色呈色OHOH2CCHOOHOH2CCHOHOHOH红紫色红紫色N-N-甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应（三三）甲基葡萄糖胺甲基葡萄糖胺巴龙霉素巴龙霉素链霉素链霉素水解水解- -N乙酰丙酮乙酰丙酮 OH-吡咯衍生物吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+红色红色（Elson-Morgan反应反应）庆大霉素庆大霉素NHCH3NHNHNH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNCH3COCH3HHOCH2CHOH3(缩合缩合)323COC

33、HCOCHCH- -OHHHH3CH3CCHNNCOCH3CH3COCH3CH3N红色红色对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+NCH3COCH3HHOCH2CHOH3 麦芽酚反应麦芽酚反应（四四） 链霉素特征反应链霉素特征反应链链霉霉糖糖链链霉霉素素- -OH麦麦芽芽酚酚紫紫红红色色 + +3FeH+分子重排分子重排NH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHNHNHCH3H2O NaOHOOOHCH3OOCH3Fe3+H+OFe33+/紫红紫红麦芽酚麦芽酚链霉胍特有反应链霉胍特有反应橙橙红红羟羟基基喹喹啉啉链链霉霉胍胍链链霉霉素素次次溴溴酸酸钠钠-

34、- -8OH（或或-萘酚萘酚）NOH8-8-羟基喹啉羟基喹啉坂口反应坂口反应（五五）-萘酚萘酚OHONBrRNHCO NH（六六）- -24SO反应反应白白 - -2 2 + +2 2BaSOSOBaH+UV法法（七七）庆大霉素无庆大霉素无UVUV吸收吸收nmmax22 链霉素链霉素（八）色谱法（八）色谱法（1 1）TLCTLC法：硫酸庆大霉素的鉴别法：硫酸庆大霉素的鉴别 点样：供试液：展开、凉干、碘蒸气中显色点样：供试液：展开、凉干、碘蒸气中显色 对照液对照液 判断：供试液与对照液所显斑点的颜色与位判断：供试液与对照液所显斑点的颜色与位 置应一致。置应一致。 点样：供试液点样：供试液 对照液

35、对照液：硫酸链霉素标准品：硫酸链霉素标准品 对照液对照液：硫酸链霉素标准品：硫酸链霉素标准品 + + 硫酸硫酸 新霉素标准品新霉素标准品+ + 硫酸卡那霉素标准品硫酸卡那霉素标准品判定法：供试液中主斑点的位置、颜色、大小判定法：供试液中主斑点的位置、颜色、大小 应与对照液应与对照液 相同，相同， 对照液对照液应显示分离清晰的应显示分离清晰的3 3个斑点个斑点 否则试验无效。否则试验无效。（2 2）HPLCHPLC法：硫酸庆大霉素的鉴别法：硫酸庆大霉素的鉴别 比较供试液与对照液各组分的保留比较供试液与对照液各组分的保留时间。时间。三三、 特殊杂质检查特殊杂质检查链霉素杂质链霉素杂质（一）（一）链

36、霉素链霉素B B（甘露糖链霉素）（甘露糖链霉素） 方法方法 TLCTLC中的对照品法（中的对照品法（BPBP）1. 来源来源 反应中间体反应中间体对微生物的活性无明显差异对微生物的活性无明显差异毒副作用和耐药性不同毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同发酵菌种不同工艺差别工艺差别C C组分比例组分比例不一致不一致规定控制各组分的相对百分含量规定控制各组分的相对百分含量ChPUSPBPJP庆大霉素庆大霉素C C组分的测定组分的测定（二二）+ + + .pH吲哚衍生物吲哚衍生物巯基醋酸巯基醋酸邻苯二醛邻苯二醛氨基氨基max = 330nm衍生化原理衍生化原理 1.1.1-烷基硫代烷基硫代-2-烷基烷基异

37、吲哚衍生物异吲哚衍生物RNH2+HSCH2COOHOH-CHOCHONRSCH2COOHRPHPLC方法方法 2.规定规定 C1 2550% C1a 1540% C2a +C2 2050%计算计算 3.%AAAAA%ACCCCiiaa + + + + 2 22 2 峰面积归一化法峰面积归一化法四四、 含量测定含量测定微生物检定法微生物检定法 各国药典主要采用各国药典主要采用HPLC法法 常用于体内药分常用于体内药分 2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R1第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素ABCD2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R1123456789

38、1011122CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO四环素四环素（TC）tetracycline2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOCl金霉素金霉素 (CTC) chlortetracycline氯四环素氯四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOOH土霉素土霉素 (OTC) oxytetracycline氧四环素氧四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3OH多西环素多西环素 (DOXC) doxycycline脱氧土霉素脱氧土霉素美他环素美他环素（METC） metacyclineHOHCONH2OOHOHOOHN CH3 2OHCH

39、22CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R1一、一、 结构与性质结构与性质两性两性（一）（一）1. 与酸、碱均能成盐与酸、碱均能成盐2.强酸或强碱中溶解度强酸或强碱中溶解度 酚羟基、烯醇型羟基酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱碱性弱碱性与金属离子生成有色配位化合物与金属离子生成有色配位化合物Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+ UV UV和荧光性质和荧光性质（三三）与金属离子络合与金属离子络合（四四）pH3 7.5 荧光荧光 （二）（二）旋光性旋光性HOHOCaOOOOHOHOO不稳定性不稳定性（五）（五）1. 差向异构化差向异构化差向金霉素差向金霉素差向四环

40、素差向四环素金霉素金霉素四环素四环素- - - - 6 62 2pH淡黄淡黄黑黑蓝色荧光蓝色荧光OHCONH2OOHOHOOHCH3HCH32NHO差向四环素差向四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHR2R1HO（土霉素、多西环素不易差向异构化土霉素、多西环素不易差向异构化）2. 降解反应降解反应（1）酸性下降解酸性下降解max = 445nmmax = 435nm橙黄色橙黄色脱水金霉素脱水金霉素脱水四环素脱水四环素金霉素金霉素四环素四环素 2 2pH2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HON CH3 2HOHCONH2

41、OOHOOHCH3OH脱水四环素脱水四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOpH26pH26TCOHCONH2OOHOHOOHCH3HCH32NHOETCN CH3 2HOHCONH2OOHOOHCH3OHATCN2CH3OHCONH2OOHOHOHOCH3HEATCpH2pH2（2）碱性下降解碱性下降解异四环素异四环素四环素四环素- -OHHOHCONH2OOHOHOOHCH3ON CH3 2二二、 鉴别试验鉴别试验 浓浓H H2 2SOSO4 4反应反应（一一）黄色黄色朱红色朱红色绿绿蓝蓝深紫色深紫色盐酸多西环素盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸金霉素盐酸四环

42、素盐酸四环素 2 2SOH盐酸美他环素盐酸美他环素橙红色橙红色FeCl3反应反应（二二）褐色褐色橙褐色橙褐色深褐色深褐色红棕色红棕色盐酸多西环素盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸金霉素盐酸四环素盐酸四环素 FeClTLCTLC法法（三三）盐酸土霉素的鉴别盐酸土霉素的鉴别 HPLC HPLC法法（五五）EDTAEDTA 克服痕量金属造成的克服痕量金属造成的 拖尾现象拖尾现象比较保留时间比较保留时间三三、 特殊杂质检查特殊杂质检查 4-4-差向四环素（差向四环素（ETCETC） 脱水四环素脱水四环素（ATCATC） 差向脱水四环素差向脱水四环素（EATCEATC） 盐酸金霉素盐酸金霉素

43、（CTCCTC） 有关物质有关物质（一一）HPLCHPLC法（法（20002000版）版）盐酸四环素盐酸四环素四环素有关物质四环素有关物质TLCTLC图图I. 供试液供试液( 5 mg/ml)ETC( 0.2 mg/ml) ATC( 0.025 mg/ml)IV. EATC ( 0.025 mg/ml)CTC ( 0.1 mg/ml)VI. 混合液混合液40.50.52吸收度吸收度（二）（二）nmmax5555268268 、盐酸四环素盐酸四环素杂质吸收度杂质吸收度 取供试品配成每毫升取供试品配成每毫升10mg/ml10mg/ml的溶液的溶液至至4cm4cm的吸收池中，在的吸收池中，在530nm530nm处测定，其处测定，其吸收度不得超过吸收度不得超过0.120.12。应严格控制温度和时间应严格