蛋白芯片技术检测结核分枝杆菌IgG抗体结果分析

1、蛋白芯片技术检测结核分枝杆菌IgG抗体结果分析 摘要 目的：分析结核菌的特异性细胞壁脂阿拉伯甘露糖(LAM)的抗体、16 KDa抗体和38 KDa抗体3种特异性抗体的检出率及临床意义。方法：用PBI型生物芯片识别系统及相应检测试剂盒进行检测。结果：在检测的434例标本中，全阴占627%，3种抗体均为阳性的占41%，LAM抗体和38 KDa抗体同时阳性占295%，LAM抗体单项阳性的占28%，16 KDa抗体单项阳性占09%。结论：LAM抗体、16 KDa抗体和38 KDa抗体的检测对结核病的诊断具有重要的临床意义。关键词 结核杆菌抗体；蛋白芯片技术检测；结果分析结核病(tuberculosis

2、)是由结核分枝杆菌(Mycobacteruin tuberculosis)引起的一种慢性传染病。目前全球有结核患者2 000万人，我国目前有4亿人感染过结核菌，现有的传染性核患者达200万人。利用蛋白芯片技术，检测抗结核菌的特异性细胞壁脂阿拉伯甘露糖(Lipoarabinomannan,LAM)抗原的抗体、16 KDa抗体和38 KDa抗体3种对结核杆菌诊断具有特异性的3种抗体，对结核病的诊断及治疗具有重要的临床意义。实验方法11标本来源2005年6月至2004年6月，本院住院及门诊患者。12仪器及试剂PBI型生物芯片识别系统及相应试剂盒，南京大渊生物工程有限责任公司生产。13操作方法取静脉血

3、2 ml，分离血清。按本产品使用说明书进行操作。2结果21试验结果434例血液标本中有162例标本检出3种抗体中的一种或几种抗体，阳性率为373%。结果见表1。表1434例结核分枝杆菌IgG抗体检出结果（略）3讨论31结核分枝杆菌的LAM是细胞壁重要组成成分结核菌的LAM含量比其他分枝杆菌的含量高许，因此许多研究都认为检测患者血清中的抗LAM抗体是诊断结核病的重要标志之一。LAM要分布于细胞壁表面，组成成分为碳水化合物。主要生物学活性为具有抗原性、抑制T淋巴细胞增殖、破坏巨噬细胞的干扰、清除有毒的自由基、抑制蛋白激酶的活性及其他在宿主体内的有害活性 。 目前，LAM的主要用途是将其作为主要的包

4、被或者样抗原，以检测结核患者血清中的相应抗体，用于结核病的诊断。32结核分枝杆菌的16 KDa蛋白16 KDa是指结核分枝杆菌主要蛋白抗原63(major protein antigen63 of tuberculosis,MPT63)抗原，因为其分子量为16 KD,故名16 KDa，主要存在于培养滤液中，MPT63抗原的种特异性：非MTC分枝杆菌缺乏MPT63，MPT63没有环境中常见的分枝杆菌抗原表位，其可作为非常有潜力的免疫诊断用抗原1。 33结核分枝杆菌的38KDa蛋白利用免疫电泳技术测得其分子量为38 KDa，故称之为38 KDa蛋白。38 KDa 蛋白为脂蛋白，存在于细胞外，含25

5、%碳水化合物，是从细胞分泌的，其与细胞膜或者菌体表面的脂肪结构相连。分枝杆菌中只在结核菌和牛分枝杆菌(M boris)发现38 KDa蛋白，而且结核菌的反应强度较牛分枝杆菌强10倍。3.4结核多种抗原IgG抗体蛋白芯片检测系统由芯片和试剂两部分组成芯片以微孔滤膜为载体，同时将结核分枝杆菌(结核菌)的特异性细胞壁脂多糖抗原LAM和经重组DNA技术生产纯化的结核菌的16 KDa和38 KDa的特异性抗原固定在特制的载体上，利用微孔滤膜的渗滤、浓缩、凝集作用，捕捉被检样品中特异性抗体,使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，复合物再与标记有的二抗金溶胶试剂作用,在膜上形成紫红色的斑点。显色后通过芯片识别系

6、统进行分析，判定结果用于结核菌感染的临床辅助诊断。该产品结合了基因重组技术、斑点免疫渗滤技术与微阵列技术，是结核菌抗体快速诊断的一大突破。 由于人群中感染结核分枝杆菌十分普遍，健康人体内也会携带低水平的抗结核分枝杆菌抗体，这就要求试剂的敏感性即不能太高，也不能太低。敏感性太高，能检出任何水平的抗体，就会增加假阳性率；反之，敏感性太低，某些较低水平抗体的结核病患者就可能被漏诊2。35结核3种抗原的IgG抗体蛋白芯片检测意义当LAM、38 KDa任意一指标为阳性结果或单一指标呈阳性时，表示患者体内有活动性结核分枝杆菌抗体存在，结合临床症状后需要进行抗痨治疗。此两项指标可排除卡介苗接种的影响；仅当1

7、6 KDa为阳性时，表示患者体内有结核分枝杆菌抗体，但不排除卡介苗接种的影响，需要结合其他信息进一步确认；当3项指标均为阳性时，表示患者体内有活动性结核分枝杆菌存在，需要及时的给予抗痨治疗；当3项指标均为阴性时，表示患者未被活动性结核分枝杆菌感染；当患者第1次检查时，某项指标为阳性时，但没有任何临床症状时，需要在一个半月至2个月后复检，如果为阴性，不需要对其治疗，如果仍为阳性，需要进一步查找原因，并给予患者适当的治疗；当患者经过1个疗程治疗2个月后复检时LAM或38 KDa仍呈阳性反应，表示治疗效果不佳，需要调整治疗方案并持续治疗。如果呈阴性反应，表示治疗达到效果。特异结核菌抗原LAM、16 KDa、38 KDa，这些抗原是其他分枝杆菌所不具有的或者含量非常低的，人感染结核菌后会产生针对此3种抗原的特异性抗体。应用蛋白芯片技术可从患者血清中检测到这些特异性抗体，而对患者做出早期诊断。已证实接种卡介苗后，人体不会出现针对3种抗原的抗体，