液相分析方法进行方法学验证时各项指标的可接受标准

1、液相分析方法进行方法学验证时各项指标的可接受标准标准化管理处编码BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N液相分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受标准审评四部黃晓龙1、有矢物质药品中的有尖物质泛指在药品的生产与储存过程中产生的工艺杂质或降解产物。山于这 些有矢物质的存在会影响到药品的纯度，进而可能会产生毒副作用，所以有尖物质的控 制是药 品研发的一个重要方面，也是我们在药品审评中一直重点矢注的要点之一。而要对有矢物质进 行严格的控制，就离不开专属性强、灵敏度高的分析方法，这就涉及到分析方法的筛选与验 证。从现有的申报资料看，药品研发单位已基本上意识到分析方法验证的重 要性，但

2、是对验证 时各具体指标是否可行尚没有一个明确的可接受标准，从而难以对验证结果进行评判。为解决 这一问题，本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求，提出了在对有矢物质检查方 法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研 究时参考。1 准确度该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求根据有矢物质的定量限与质量标准中 该杂质的限度分别配制三个浓度的供试品溶液各三份(例如某杂质的限度为，则可分别配制 该杂质浓度为、和的杂质溶液)，分别测定其含量,将实测值与理论值比较，计算回收 率，并计算9个回收率数据的相对标准差(RSD)。该项忖的可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在80%-1

3、20%之间，如杂质的浓度为 定量限，则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%,相对标准差应不大于10%。2线性线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为：在定量限至一定的浓度范 围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定该杂质峰的面积，汁算相应的含量。以含量为横坐 标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，进行线性回归分析。可接受的标准为：回归线的相尖系数(R)不得小于，丫轴截距应在100%响应值的25%以内， 响应因子的相对标准差应不大于10%。3.精密度1）重复性配制6份杂质浓度（一般为）相同的供试品溶液，山一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大

4、于1概。2）中间精密度配制6份杂质浓度（一般为）相同的供试品溶液，分别山两个分析人员使用不同的 仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于20%。4. 专属性可接受的标准为：空口对照应无干扰，该杂质峰与其它峰应能完全分离，分离度不得小 于。5. 检测限杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。6 定量限杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液， 所测6份溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于，峰面积的相对标准差应不大 于。7耐用性分别考察流动相比例变化±5%、流动相PH值变化土、柱温变化±5乜、检测波长变化±5nm

5、、流速相对值变化±20%以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：各杂质峰的拖尾因子不得大于，杂质峰与其他成分峰必须达到基线分离；各 条件下的杂质含量数据(n二6)的相对标准差应不大于，杂质含量的绝对值在±%以内。&系统适应性配制6份相同浓度的朵质溶液进行分析，该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于，保留 时间的相对标准差应不大于。另外，杂质峰的拖尾因子不得大于，理论塔板数应符合质量标 准的规定。9 溶液稳定性按照分析方法分别配置对照品溶液与供试品溶液，平行测定两次主成分与杂质的含量， 然后将上述溶液分别贮存在室温

6、与冰箱冷藏室(4°C)中，在1、2、3、5和7天时分别平行测 定两次主成分与杂质的含量。可接受的标准为：主成分的含量变化的绝对值应不大于，杂质含量的绝对值在±%以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质。2、含量在进行质量研究的过程中，一项重要的工作就是要对质量标准中所涉及到的分析方法进行方法 学验证，以保证所用的分析方法确实能够用于在研药品的质量控制。为规范对各种分析方法的 验证要求，我国已于2003年颁布了分析方法验证的指导原则。该指导原则对需要验证的分析 方法及验证的具体指标做了比较详细的阐述，但是文中未涉及各具体指标在验证时的可接受标 准，国际上已颁布的指导原则中也未发

7、现相矢的要求。另一方面，大多数药品研发单位在进行 质量研究时，已逐步认识到分析方法验证的必要性与重要性，大都也在按照指导原则的要求进行分析方法验证，但验证完后却因没有一个明确的可接受标准，而难以判断该分析方法是否符 合要求。本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面 的要求，提出了在对含量测定方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参考。1. 准确度该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求分别配制浓度为80%、100%和120%的供 试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在號之间，9个回收率数据的相对标准

8、差(RSD)应不大于 °2. 线性线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为：在80%至120%的浓度 范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量o以含量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，进行线性回归分析。可接受的标准为：回归线的相矢系数（R）不得小于，丫轴截距应在100%响应值的2%以 内，响应因子的相对标准差应不大于。3. 精密度D重复性配制6份相同浓度的供试品溶液，11 一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6 份供试液含量的相对标准差应不大于。2）中间精密度配制6份相同浓度的供试品溶液，分别山两个分析人员使用不同的仪器与试剂进

9、行测试， 所得12个含量数据的相对标准差应不大于。4. 专属性可接受的标准为：空口对照应无干扰，主成分与各有尖物质应能完全分离，分离度不得小 于。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。5. 检测限主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。6. 定量限主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于亂7 耐用性分别考察流动相比例变化±5%、流动相pH值变化土、柱温变化±hC、流速相对值变 化 ±20%时，仪器色谱行为的变化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于，主峰与杂质峰必须达到