植物组织培养第十二章2几种花卉的组织培养ppt课件

1、第十二章第十二章 (2)(2)几种花卉的组织培养几种花卉的组织培养本章内容与目的要求：本章内容与目的要求： 掌握百合生物学特性和快速繁掌握百合生物学特性和快速繁殖方法殖方法 掌握兰科植物组培的大致过程掌握兰科植物组培的大致过程 掌握胡蝶兰花梗组培的方法掌握胡蝶兰花梗组培的方法第一节第一节 百合的组织培养百合的组织培养 全世界已发现百合约全世界已发现百合约89余种，主要分布地区是中余种，主要分布地区是中 国、日本、北美和欧洲等温带地区；国、日本、北美和欧洲等温带地区； 北美百合协会将百合园艺品种划分为北美百合协会将百合园艺品种划分为10个种系；个种系； 观赏栽培的主要是观赏栽培的主要是4个种系，

2、即：亚洲百合杂种个种系，即：亚洲百合杂种 系、茶香百合杂种系、东方百合杂种系、麝香百系、茶香百合杂种系、东方百合杂种系、麝香百 合杂种系；合杂种系； 以上四品系株形端正，花色清白给人以清纯、高以上四品系株形端正，花色清白给人以清纯、高 雅的印象，是切花中的佳品。雅的印象，是切花中的佳品。 亚洲百合亚洲百合我国昆明、上海、我国昆明、上海、深圳的百合切花深圳的百合切花生产发展较快，生产发展较快，已形成三大生产已形成三大生产基地。基地。麝香百合麝香百合 目前国内切花目前国内切花栽培的百合大多栽培的百合大多是亚洲型，主要是亚洲型，主要从荷兰、日本引从荷兰、日本引进，经过几年的进，经过几年的栽培试验，已

3、筛栽培试验，已筛选出一批适合我选出一批适合我国生产的品种。国生产的品种。一、形态特性和生物学习性一、形态特性和生物学习性百合是百合科百合属植物的统称，为多年生的草百合是百合科百合属植物的统称，为多年生的草本植物。本植物。鳞茎无皮，广卵形，直径鳞茎无皮，广卵形，直径5 8cm，白色或黄白色，白色或黄白色，茎高茎高3090cm，直立，叶多而散生，披针形，光滑。，直立，叶多而散生，披针形，光滑。花单生或数花横向着生茎顶，花朵呈喇叭状、筒花单生或数花横向着生茎顶，花朵呈喇叭状、筒状，有清香。花被先端外卷，花被筒深处淡绿色。状，有清香。花被先端外卷，花被筒深处淡绿色。百合属于球根花卉，要求肥沃、疏松和排

4、水良好百合属于球根花卉，要求肥沃、疏松和排水良好的沙壤土，以有利于鳞茎发育膨大。的沙壤土，以有利于鳞茎发育膨大。二、传统的繁殖方法二、传统的繁殖方法1. 1.分球法：百合母球生长过程中，于茎轴分球法：百合母球生长过程中，于茎轴上逐渐形成小鳞茎，称上逐渐形成小鳞茎，称“茎生小球茎生小球”，经一年栽培，可分生经一年栽培，可分生1 13 3个甚至个甚至7 79 9个个小球。小球。 2.鳞片扦插法：于89月，取成熟健壮的老鳞茎，阴干后剥下鳞片，斜插于湿润木屑或颗粒泥炭中，在适宜温度、湿度下，经24个月生根发叶，并在鳞片基部生长出小磷片，1片鳞片可获5060个子球，三、百合的组织培养三、百合的组织培养本

5、方法自本方法自20世纪世纪70年代后期开始，日本人以叶年代后期开始，日本人以叶片为外植体诱导出大花卷丹的小植株；片为外植体诱导出大花卷丹的小植株；我国于我国于80年代初由兰洲百合的花药、花丝等培年代初由兰洲百合的花药、花丝等培育出完整小植株。育出完整小植株。 80年代以后，培养出去病毒的百合种苗和通过年代以后，培养出去病毒的百合种苗和通过胚培养获得远缘杂交的新品种。胚培养获得远缘杂交的新品种。1 1、花器的组织培养、花器的组织培养(1)(1)取材和灭菌取材和灭菌 花蕾开花前数日的）花蕾开花前数日的） 酒酒精精7070擦拭花蕾表面擦拭花蕾表面 酒精灯酒精灯上灼烧上灼烧3 35s 5s 剥开花蕾无

6、菌剥开花蕾无菌培养皿内）培养皿内） 分别切取花丝、子分别切取花丝、子房、花柱等房、花柱等3 35mm5mm） 接种。接种。（2 2培养基培养基 花柱花梗、茎段等）：花柱花梗、茎段等）：MS + IAA MS + IAA l.0 + BA 0.2 l.0 + BA 0.2 ； 叶片用：叶片用：MS+NAA 1.0+BA 0.1 MS+NAA 1.0+BA 0.1 ； 植株分化：植株分化：MS + NAA 2.0 + IBA 0.4 MS + NAA 2.0 + IBA 0.4 + Kt0.05+ Kt0.05； 以上均附加：蔗糖以上均附加：蔗糖3 3和琼脂和琼脂0.70.7，pH5.8pH5.8

7、6.26.2。（3 3培养条件培养条件 光照度光照度2000Lx2000Lx，每天照用，每天照用15h15h，保温，保温 2020。 花器部位：以花丝的部位为好，成活率很高，花器部位：以花丝的部位为好，成活率很高，发芽较多；其次为子房和花柱部分。发芽较多；其次为子房和花柱部分。 子球形成途径：一是从切中处形成愈伤组织，子球形成途径：一是从切中处形成愈伤组织，以后再发芽；或是从切口直接产生芽。以后再发芽；或是从切口直接产生芽。 麝香百合花器培养得到的植株，生长约麝香百合花器培养得到的植株，生长约6个月个月即可开花，未发现不正常现象，只是母株的花即可开花，未发现不正常现象，只是母株的花较大，且全株

8、无病毒症状。较大，且全株无病毒症状。(4)(4)生长情况生长情况2、鳞片组织培养 对于扩大培养材料来源，加快繁殖速度和培养得到无病毒苗等皆有重要意义。（1 1取材与消毒：以鳞片外植体，受土壤微生物的影取材与消毒：以鳞片外植体，受土壤微生物的影响，所以污染率相当高。为此外植体消毒要严加注意，响，所以污染率相当高。为此外植体消毒要严加注意，可应用几种消毒剂并用的方法，切取可应用几种消毒剂并用的方法，切取0.5cm20.5cm2鳞片接种。鳞片接种。（2 2初代培养基：初代培养基：MS + 2,4D 1.0 + IAA 1.0 + MS + 2,4D 1.0 + IAA 1.0 + Kt 0.5Kt

9、0.5 继代培养：继代培养：MS + NAA 2 + IBA 0.4 + Kt MS + NAA 2 + IBA 0.4 + Kt 0.05 0.05 （3 3培养条件：培养条件：2525土土 22，照光，照光 9-10 h9-10 hd d，光强，光强1200 Lx1200 Lx。（4 4生长情况生长情况 接种接种2 2周后，即有周后，即有9898左右的鳞片切左右的鳞片切块在近轴面或边缘上有淡黄色的不定芽块在近轴面或边缘上有淡黄色的不定芽原基呈环状突起原基呈环状突起2 24 4个个/ /块），块），4 4周后，周后，可形成中间抽出绿色的白色小鳞茎，其可形成中间抽出绿色的白色小鳞茎，其基部发生

10、一些粗壮的根。基部发生一些粗壮的根。 将幼苗切成将幼苗切成1.51.52cm2cm长的片断，接长的片断，接种到诱导愈伤组织的培养基上，种到诱导愈伤组织的培养基上，3 3周后周后叶子的基部、叶脉、叶缘上均可诱导出叶子的基部、叶脉、叶缘上均可诱导出一团团淡黄色的愈伤组织。一团团淡黄色的愈伤组织。愈伤组织转移到分化培养基愈伤组织转移到分化培养基1010周后，周后，逐渐膨大，分化出许多大小不等的鳞茎，逐渐膨大，分化出许多大小不等的鳞茎，并在基部长出许多粗壮的根。并在基部长出许多粗壮的根。（5 5试管苗移栽试管苗移栽 首先应把根部的培养基清洗干首先应把根部的培养基清洗干净。净。 移栽前，放在移栽前，放在

11、4 41010低温条低温条件下锻炼件下锻炼2 23 3周，这样移栽后的幼周，这样移栽后的幼苗生长更加健壮。苗生长更加健壮。 移栽幼苗最好用消毒的腐殖土移栽幼苗最好用消毒的腐殖土或泥炭土加蛭石的混合基质，育苗盘或泥炭土加蛭石的混合基质，育苗盘必须清洗消毒。必须清洗消毒。 移栽后注意湿度管理，相对湿移栽后注意湿度管理，相对湿度控制在度控制在80809090，防止烈日曝晒，防止烈日曝晒，后期幼苗不宜浇水过多，并及时喷洒后期幼苗不宜浇水过多，并及时喷洒药剂预防病虫危害。药剂预防病虫危害。四、鳞茎打破休眠的方法 百合栽培中首先避免因球根的休眠而导致发芽率不高及盲花。仅靠贮藏无法打破休眠，需要人工打破休眠

12、，方法有： 1.1.冷藏：冷藏：13131515预冷，预冷，3 355冷藏冷藏6-76-7周。周。2.2.温水浸泡：于温水浸泡：于4848的温水中，每隔的温水中，每隔2 23min3min提起提起再泡入，反复再泡入，反复2 23 3次，后在次，后在4545温水中浸泡温水中浸泡1h1h，严格掌握水温。严格掌握水温。3.3.激素处理：用激素处理：用1000 xGA1000 xGA溶液浸泡，为避免发根阻溶液浸泡，为避免发根阻碍，可先将球根倒置浸泡一半，而后恢复正常位碍，可先将球根倒置浸泡一半，而后恢复正常位置予以静置。置予以静置。第二节 兰花的组织培养技术兰花系兰科植物，在自然条件下主要靠分株繁殖，

13、兰花系兰科植物，在自然条件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有几倍，所以无法大量繁殖生产，而繁殖率一年只有几倍，所以无法大量繁殖生产，而且由于长期进行无性繁殖，带病毒株增多，逐渐使且由于长期进行无性繁殖，带病毒株增多，逐渐使种性降低，影响生长。种性降低，影响生长。 一、概述法国法国Morel(1952年年)等观察到虎头兰的茎尖在无菌等观察到虎头兰的茎尖在无菌培养基上能形成扁圆形的小球体，这些小球体与种培养基上能形成扁圆形的小球体，这些小球体与种胚发育成的原球体非常相似，即原球茎，是兰花培胚发育成的原球体非常相似，即原球茎，是兰花培养成功的关键。养成功的关键。原球茎增殖很快，并可形成幼苗。这一方法和

14、技原球茎增殖很快，并可形成幼苗。这一方法和技术在兰花生产上得到广泛的应用，造就了现在的术在兰花生产上得到广泛的应用，造就了现在的“兰花工业的发展。兰花工业的发展。国兰原球茎的增殖国兰幼苗的形成主要部位是：顶芽侧芽和花梗等主要部位是：顶芽侧芽和花梗等1. 1.新芽的茎尖新芽的茎尖 茎尖是细胞分裂最旺盛的部分，也是培养茎尖是细胞分裂最旺盛的部分，也是培养成功率最高的部位。成功率最高的部位。 2.2.花梗花梗 当兰花开花约一个月后，剪取其花梗顶端当兰花开花约一个月后，剪取其花梗顶端及若干个花梗腋芽。及若干个花梗腋芽。二、培养部位二、培养部位三、茎尖的选取、灭菌和接种三、茎尖的选取、灭菌和接种1. 1

15、.芽的准备和灭菌芽的准备和灭菌灭菌：切取灭菌：切取2 26cm6cm大小的芽大小的芽 流水冲洗流水冲洗 去掉去掉1 12 2片苞叶片苞叶 1010次氯酸钠或漂白次氯酸钠或漂白粉溶液中浸粉溶液中浸10 10 15 min 15 min 接种。接种。剥离和切割：剥离和切割： 在切割时应将芽放在无菌水中操作，减少褐在切割时应将芽放在无菌水中操作，减少褐变的机会。以消除病毒为目的时要尽量小些，变的机会。以消除病毒为目的时要尽量小些，可以小到可以小到0.1mm0.1mm：若以繁殖为目的，培养物：若以繁殖为目的，培养物可在可在2 25mm5mm左右。左右。2 2、培养基、培养基 大多兰花以大多兰花以MSM

16、S培养基最好，另外培养基最好，另外KCKC培养基也不错。培养基也不错。 大多品种兰的茎尖接种以固体培养大多品种兰的茎尖接种以固体培养基为好；基为好； 蕙兰属在液体培养基培养形成原球蕙兰属在液体培养基培养形成原球茎后则用固体培养基进行继代培养；茎后则用固体培养基进行继代培养； 卡德兰属和石斛属这一类易变褐枯卡德兰属和石斛属这一类易变褐枯死，以在液体培养基为好。死，以在液体培养基为好。3.3.继代培养继代培养 接种后接种后1 12 2个月培养的茎尖即可形个月培养的茎尖即可形成原球茎球状体，以后即发芽生根长成原球茎球状体，以后即发芽生根长叶。叶。 发芽前把它切成小块进行转移，让发芽前把它切成小块进行

17、转移，让它继续不断地形成原球茎球状体。它继续不断地形成原球茎球状体。 这样连续的进行继代培养，短时间这样连续的进行继代培养，短时间可以得到大量的原球茎球状体。可以得到大量的原球茎球状体。 苗有苗有34叶大小，根叶大小，根23条时可移植。条时可移植。 (1)从试管内取的苗用水将琼脂冲洗掉，冲洗不彻从试管内取的苗用水将琼脂冲洗掉，冲洗不彻 底会发生霉菌腐烂。底会发生霉菌腐烂。 (2)经水冲洗的苗吸干水分阴晾经水冲洗的苗吸干水分阴晾1h再定植。再定植。 (3)移栽后保证，移栽后保证，50的弱光，温度的弱光，温度2025，保，保持一定的湿度，不能完全密闭，也要注意通风。根持一定的湿度，不能完全密闭，也

18、要注意通风。根在开始生长后可在开始生长后可1周浇一次周浇一次1000倍的复合肥料。倍的复合肥料。4 4、试管苗的移栽、试管苗的移栽第三节 蝴蝶兰的培养1.茎尖培养 (1) 将芽外植体消毒：除去叶后，用水冲洗，10的漂白粉灭菌15min。除去叶原基后，用5的漂白粉灭菌l0min，以后用无菌水冲洗35次。 (2) 接种：切取茎尖和各叶基部的腋芽，约23mm大小，接种到培养基中。 (3) 培养基：采用VW培养基，添加15CM进行液体培养，或进行固体培养。茎尖茎尖(4) (4) 培养条件培养条件 温度温度2525，光照强度，光照强度2000Lx2000Lx，照明，照明161624h24h。 液体培养基用液体培养基用60r60rminmin的速度进行振的速度进行振荡培养，培养荡培养，培养7 710d10d再转移到新的培养再转移到新的培养基，培养基，培养1 1个月后转移到固体培养基。个月后转移到固体培养基。 培养培养1 1个月即可形成原球茎球状体，个月即可形成原球茎球状体，以后再进行继代培养，不断繁殖原球茎以后再进行继代培养，不断繁殖原球茎球状体。球状体。2 2、花梗腋芽的培养、花梗腋芽的培养 表面消毒表面消毒: : 带腋芽花梗带腋芽花梗 自来水冲洗自来水冲洗 1010漂白粉溶液浸泡漂白粉溶液浸泡20m