生化分离技术复习题及答案

1、离心技术1、什么是离心技术？这种技术主要应用于哪些方面？离心技术是分子生物学和生物化学研究中不可缺少的一种技术。它是利用物质沉降系数、密度、浮力等方面的差别，用强大的离心力场将其分离、浓缩、纯化和鉴定的技术。离心技术既可以是制备性的也可以是分析性的。处理的样品可多可少（几千L至0.2mL以下），应用范围十分广泛。这项技术应用很广，诸如分离出化学反应后的沉淀物，天然的生物大分子、无机物、有机物，在生物化学以及其它的生物学领域常用来收集细胞、细胞器及生物大分子物质。2、离心机的种类有哪些？主要性能如何？根据性能，离心机分为三种类型，即低速离心机（转速在20006000r/min之间，最大RCF可达

2、6000g）、高速离心机（转速在1800025000r/min之间，最大RCF可达60 000g）、超速离心机（转速在40 000100 000r/min之间，最大RCF可达803 000g）。超速离心机按性能又分为分析型、制备型和分析制备型三类。3、超速离心机主要由哪四个部分构成？分析性离心机构造的特点是什么？超速离心机主要由驱动和速度控制、温度控制、真空系统和转头四部分组成。分析性离心机使用了特殊设计的转头和光学检测系统，以便连续地监视物质在一个离心场中的沉降过程。从而确定其物理性质。分析性超速离心机的转头是椭圆形的，以避免应力集中于孔处。此转头通过一个有柔性的轴联接到一个高速的驱动装置上

3、，转头在一个冷冻的和真空的腔中旋转，转头上有26个装离心杯的小室，离心杯是扇形石英的，可以上下透光，离心机中装有一个光学系统，在整个离心期间都能通过紫外吸收或折射率的变化监测离心杯中沉降着的物质，在预定的期间可以拍摄沉降物质的照片，在分析离心杯中物质沉降情况时，在重颗粒和轻颗粒之间形成的界面就像一个折射的透镜，结果在检测系统的照像底板上产生了一个“峰”，由于沉降不断进行，界面向前推进，因此峰也移动，从峰移动的速度可以计算出样品颗粒的沉降速度。4、转子是离心机的附件，制备转子主要由哪几种？它们各适用于哪种离心方法？ 角式转头 荡平式转头：这种转头最适合做密度梯度区带离心， 区带转头：区带转头的“

4、壁效应”极小，可以避免区带和沉降颗粒的紊乱，分离效果好，而且还有转速高，容量大，回收梯度容易和不影响分辨率的优点，使超离心用于制备和工业生产成为可能。 垂直转头：适合用于密度梯度区带离心，离心结束后液面和样品区带要作九十度转向，因而降速要慢。 连续流动转头：可用于大量培养液或提取液的浓缩与分离。5、塑料离心管都配有管盖，管盖的作用如何？防止样品外泄。用于有放射性或强腐蚀性的样品时，这点尤其重要。防止样品挥发。支持离心管，防止离心管变形。6、什么是离心力和相对离心力？离心作用是根据在一定角速度下作圆周运动的任何物体都受到一个向外的离心力进行的。离心力（Fc）的大小等于离心加速度2X与颗粒质量m的

5、乘积。相对离心力RCF就是实际离心场转化为重力加速度的倍数。7、什么是沉降速度？沉降速度是指在强大离心力作用下，单位时间内物质运动的距离。8、简述离心技术的基本原理。当物体围绕某一中心轴做圆周运动时，运动物体就受到离心力的作用。旋转速度越高，运动物体所受到的离心力就越大。如果装有悬浮液或高分子溶液的容器进行高速水平旋转，强大的离心力作用与溶剂中的悬浮颗粒或高分子，会使其沿着离心力的方向运动而逐渐背离中心轴。在相同转速条件下，容器中不同大小的悬浮颗粒或高分子溶质会以不同的速率沉降。经过一定时间的离心操作，就有可能实现不同悬浮颗粒或高分子溶质的有效分离。9、相对离心力列线图在实际应用中有什么意义？

6、将离心机转数换成相对离心力时，先在离心机半径标尺上取已知的离心机半径和在转数标尺上取已知的离心机转数，然后将这两点间划一条直线，在图中间RCF标尺上的交叉点，即为相应的离心力数值。例已知离心机转数为2500rpm，离心机的半径为7.7cm，将两点连接起来交于RCF标尺，此交点500×g即是RCF值。10、沉降系数S有哪两个重要用途？预计沉降时间 ；测定物质分子质量11、按照实际工作的需要，已设计出的离心方法主要有哪些？平衡离心法根据粒子大小、形状不同进行分离，包括差速离心法和速率区带离心法。等密度离心法又称等比重离心法，依粒子密度差进行分离，等密度离心法和上述速率区带离心法合称为密度

7、梯度离心法。经典式沉降平衡离心法用于对生物大分子分子量的测定、纯度估计、构象变化等。12、离心操作的注意事项主要有哪些？1）使用各种离心机时，必须事先在天平上精密地平衡离心管和其内容物，平衡时重量之差不得超过各个离心机说明书上所规定的范围，每个离心机不同的转头有各自的允许差值，转头中绝对不能装载单数的管子，当转头只是部分装载时，管子必须互相对称地放在转头中，以便使负载均匀地分布在转头的周围。2） 装载溶液时，要根据各种离心机的具体操作说明进行，根据待离心液体的性质及体积选用适合的离心管，有的离心管无盖，液体不得装得过多，以防离心时甩出，造成转头不平衡、生锈或被腐蚀，而制备性超速离心机的离心管，

8、则常常要求必须将液体装满，以免离心时塑料离心管的上部凹陷变形。每次使用后，必须仔细检查转头，及时清洗、擦干，转头是离心机中须重点保护的部件，搬动时要小心，不能碰撞，避免造成伤痕，转头长时间不用时，要涂上一层上光腊保护，严禁使用显著变形、损伤或老化的离心管。3） 若要在低于室温的温度下离心时。转头在使用前应放置在冰箱或置于离心机的转头室内预冷。4） 离心过程中不得随意离开，应随时观察离心机上的仪表是否正常工作，如有异常的声音应立即停机检查，及时排除故障。5）每个转头各有其最高允许转速和使用累积限时，使用转头时要查阅说明书，不得过速使用。每一转头都要有一份使用档案，记录累积的使用时间，若超过了该转

9、头的最高使用限时，则须按规定降速使用。13. 比较差速沉降离心法与区带离心法的不同？差速沉降离心法区带离心法概 念采用逐渐增加离心速度或低速和高速交替进行离心，使沉降速度不同的颗粒，在不同的离心速度及不同离心时间下分批分离的方法。是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡，在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。缺 点 差速离心的分辨率不高 粗制品提取。 容易变性失活。离心时间较长；需要制备惰性梯度介质溶液；操作严格，不易掌握。优 点 操作简易 离心后用倾倒法即可将上清液与沉淀分开 可使用容量较大的角式转子分离效果好适应范围广颗粒不会挤压变形，能保持颗粒

10、活性用 途一般用于分离沉降系数相差较大的颗粒。 差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒，又能分离有一定浮力密度差的颗粒； 电泳技术1、哪一年，哪个国家的科学家因为什么贡献获得了1948年的诺贝尔化学奖？1937年瑞典Uppsala大学的Tiselius对电泳仪器作了改进，创造了Tiselius电泳仪，建立了研究蛋白质的移动界面电泳方法，并首次证明了血清是由白蛋白及、球蛋白组成的，由于Tiselius在电泳技术方面作出的开拓性贡献而获得了1948年的诺贝尔化学奖。2、电泳技术的基本原理？电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有

11、可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。3、何为电泳迁移率（m）和电泳相对迁移率（Rm）？电泳迁移率（m）是指在单位电场强度（1V/cm）时带电分子的迁移速度相对迁移率mR就是两种带电粒子在凝胶中泳动迁移的距离之比。 4什么是电渗作用？液体在电场中，对于固体支持介质的相对移动，称为电渗现象。5按分离原理电泳技术可分为哪几类？电泳按其分离的原理不同

12、可分为： 区带电泳； 自由界面电泳； 等速电泳； 等电聚焦电泳6醋酸纤维薄膜电泳的优点有哪些？ 醋酸纤维薄膜对蛋白质样品吸附极少，无“拖尾”现象，染色后蛋白质区带更清晰。 快速省时。 灵敏度高，样品用量少。 应用面广。 醋酸纤维薄膜电泳染色后，用乙酸、乙醇混合液浸泡后可制成透明的干板，有利于光密度计和分光光度计扫描定量及长期保存。7琼脂糖凝胶电泳主要有哪些类型？水平式板状琼脂糖凝胶电泳，垂直式琼脂糖凝胶电泳8琼脂糖凝胶电泳的优点有哪些？1）支持物透明、无紫外吸收特性，易于检测。2）凝胶制作简单。3）分辨率高。4）重复性好。5）电泳区带易于染色，易于洗脱。9什么是聚丙烯酰胺凝胶电泳？凝胶聚合的单

13、体、交联剂是什么？聚合方法有哪两种方式？需要的加速剂和催化剂是何物？聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳。聚丙烯酰胺凝胶是由单体的丙烯酰胺和交联剂甲叉双丙烯酰胺聚合而成。常用的催化聚合方法有两种：化学聚合和光聚合。化学聚合通常是加入催化剂过硫酸铵（AP）以及加速剂四甲基乙二胺（TEMED），光聚合的催化剂是核黄素10聚丙烯酰胺凝电泳的优点有哪些？可以随意控制胶浓度“T”和交联度“C”，从而得到不同的有效孔径，用于分离不同分子量的生物大分子。能把分子筛作用和电荷效应结合在同一方法中，达到更高的灵敏度。电泳时不会产生“电渗”。由于可以制得高纯度的单体原料，因而电泳

14、分离的重复性好。透明度好，便于照相和复印。机械强度好，有弹性，不易碎，便于操作和保存。无紫外吸收，不染色就可以用于紫外波长的凝胶扫描作定量分析。还可以用作固定化酶的惰性载体。11聚丙烯酰凝胶分离物质的依据是什么？聚丙烯酰胺凝胶电泳是根据被分离物质所带电荷多少及其分子大小、形状的不同，在电场作用下，产生不同移动速度而分离的方法。它具有电荷和分子筛双重作用。12不连续系统PAGE建立了哪些不连续性？分离物质的依据是什么？孔径不连续：大孔胶浓缩胶,小孔胶分离胶缓冲系统不连续:电极缓冲液Tris-Gly ；制胶缓冲液Tris-Hcl PH不连续： 电极缓冲溶液pH8.3,浓缩胶缓冲溶液pH6.7,分离

15、胶缓冲溶液pH8.9. 分离物质的依据是电荷效应、分子筛效应和浓缩效应13.SDS-PAGE分离蛋白质的原理是什么？如何测定蛋白质的分子质量？电泳样品加入强还原剂 ，使SDS与蛋白质充分结合，以使蛋白质完全变性和解聚，并形成棒状结构。SDS与蛋白质结合后使蛋白质SDS复合物上带有大量的负电荷，平均每两个氨基酸残基结合一个SDS分子，这时各种蛋白质分子本身的电荷完全被SDS掩盖。这样就消除了各种蛋白质本身电荷上的差异。亚基大小靠凝胶分子筛效应分离。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳还可以用于未知蛋白分子量的测定，在同一凝胶上对一系列已知分子量的标准蛋白及未知蛋白进行电泳，测定各个的标准蛋白的电泳距离（或迁

16、移率），并对各自分子量的对数（log Mr）作图，即得到标准曲线。测定未知蛋白质的电泳距离（或迁移率），通过标准曲线就可以求出未知蛋白的分子量。14.IEF-PAGE分离蛋白质的原理是什么？等电聚焦电泳是根据两性物质等电点（pI）的不同而进行分离的，它具有很高的分辨率，可以分辨出等电点相差0.01的蛋白质，是分离两性物质如蛋白质的一种理想方法。等电聚焦的分离原理是在凝胶中通过加入两性电解质形成一个pH梯度，两性物质在电泳过程中会被集中在与其等电点相等的pH区域内，从而得到分离。 层析技术1、英国生物学家Martin和Synge，首先提出了色谱塔板理论。他们提出的两个远见卓识预言是什么？因此,

17、他们在那一年被授予诺贝尔化学奖？英国生物学家Martin和Synge提出了远见卓识的预言：一、流动相可用气体代替液体，与液体相比，物质间的作用力减小了，这对分离更有好处；二、使用非常细的颗粒填料并在柱两端施加较大的压差，应能得到最小的理论塔板高(即增加了理论塔板数)，这将会大大提高分离效率。前者预见了气相色谱的产生，并在1952年诞生了气相色谱仪，它给挥发性的化合物的分离测定带来了划时代的变革；后者预见了高效液相色谱（HPLC）的产生，在60年代末也为人们所实现，现在HPLC已成为生物化学与分子生物学、化学等领域不可缺少的分析分离工具之一。因此, Martin和Synge于1952年被授予诺贝

18、尔化学奖。2、层析技术分离物质的基本原理是什么？层析的一般原理是所有的层析系统都由两部分组成，即：固定相和流动相。由于被分离物质之间在两相中的分配系数不同，使得被分离物在层析过程中被有效的分开。3、层析系统由什么组成？层析系统都由两部分组成，即：固定相和流动相4、解释分配系数、有效分配系数和理论塔板数（n）概念。分配系数是指在一定的条件下，某种组分在固定相和流动相中含量（浓度）的比值，常用K来表示。分配系数是层析中分离纯化物质的主要依据。容量因子D:又称有效分配系数（B）,指固定相与流动相中溶质量的分布比。理论塔板数（n）用来表示柱中发生的相间有效平衡的次数，N越大，平衡次数越多，洗脱区带越集

19、中，层析柱越有效。理论塔板数（n）等于柱长除以理论塔板高度。5、影响分配系数的因素有哪些？分配系数主要与下列因素有关：被分离物质本身的性质；固定相和流动相的性质；层析柱的温度。6、什么是层析技术的分辨率（或分离度）？提高分辨率Rs 的方法有哪些？分辨率一般定义为：相邻两个峰的分开程度。用Rs来表示。为了提高分辨率Rs 的值，可采用以下方法： 使理论塔板数N增大，则Rs上升。 增加柱长，N可增大，可提高分离度 减小理论塔板的高度 采用适当的流速，也可使理论塔板的高度降低，增大理论塔板数。 改变容量因子D（固定相与流动相中溶质量的分布比）。我们可以通过改变柱温（一般降低温度），改变流动相的性质及组

20、成（如改变pH值，离子强度，盐浓度，有机溶剂比例等），或改变固定相体积与流动相体积之比（如用细颗粒固定相，填充的紧密与均匀些），提高D值，使分离度增大。 增大a（分离因子，也称选择性因子，是两组分容量因子D之比），使Rs变大。 7、最常用的层析技术是依据各种原理建立的液相柱层析技术，简述其基本操作方法。柱层析的基本操作包括以下一些步骤： 装柱：一般要求柱子装的要均匀，不能分层，柱子中不能有气泡等。否则要重新装柱。 平衡柱子装好后，要用所需的缓冲液（有一定的pH和离子强度）平衡柱子。 加样加样量的多少直接影响分离的效果。一般讲，加样量尽量少些，分离效果比较好。 洗脱当我们选定好洗脱液后，洗脱的方

21、式可分为简单洗脱、分步洗脱和梯度洗脱三种。 收集、鉴定及保存在生化实验中，基本上我们都是采用部分收集器来收集分离纯化的样品。在合并一个峰的各管溶液之前，还要进行鉴定。最后，为了保持所得产品的稳定性与生物活性，我们一般采用透析除盐、超滤或减压薄膜浓缩，再冰冻干燥，得到干粉，在低温下保存备用。 基质（吸附剂、交换树脂或凝胶等）的再生许多基质（吸附剂、交换树脂或凝胶等）可以反复使用多次，而且价格昂贵，所以层析后要回收处理，以备再用，严禁乱倒乱扔。8、凝胶过滤分离大分子物质的机理是什么？凝胶层析是依据分子大小这一物理性质进行分离纯化的。层析过程如图11 所示。凝胶层析的固定相是惰性的珠状凝胶颗粒，凝胶

22、颗粒的内部具有立体网状结构，形成很多孔穴。当含有不同分子大小的组分的样品进入凝胶层析柱后，各个组分就向固定相的孔穴内扩散，组分的扩散程度取决于孔穴的大小和组分分子大小。比孔穴孔径大的分子不能扩散到孔穴内部，完全被排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外的空间随流动相向下流动，它们经历的流程短，流动速度快，所以首先流出；而较小的分子则可以完全渗透进入凝胶颗粒内部，经历的流程长，流动速度慢，所以最后流出；而分子大小介于二者之间的分子在流动中部分渗透，渗透的程度取决于它们分子的大小，所以它们流出的时间介于二者之间，分子越大的组分越先流出，分子越小的组分越后流出。这样样品经过凝胶层析后，各个组分便按分子从大到小的

23、顺序依次流出，从而达到了分离的目的。 9、什么是外水体积、内水体积、基质体积、柱床体积、洗脱体积？外水体积是指凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积，也就是凝胶颗粒间液体流动相的体积。内水体积是指凝胶颗粒中孔穴的体积，凝胶层析中固定相体积就是指内水体积。基质体积是指凝胶颗粒实际骨架体积。而柱床体积就是指凝胶柱所能容纳的总体积。洗脱体积是指将样品中某一组分洗脱下来所需洗脱液的体积。10、分子量为8万和10万Da的蛋白质能否用Sephadex-75柱分开？为什么？否。Sephadex G-75对球形蛋白的分级分离范围为3,00070,000，它表示分子量在这个范围内的球形蛋白可以通过Sephadex G-

24、75得到较好的分离。8万和10万Da的蛋白质超出其分级分离范围。11、凝胶过滤柱层析有哪些实际用途？1）. 生物大分子的纯化2）. 分子量测定3）. 脱盐及去除小分子杂质4）. 去热源物质5）. 溶液的浓缩12、凝胶柱层析测定蛋白质分子质量的原理如何？在一定的范围内，各个组分的Kav以及Ve与其分子量的对数成线性关系。 Kavb lg MWc Veb' lg MWc' 由此通过对已知分子量的标准物质进行洗脱，作出Ve或Kav对分子量对数的标准曲线，然后在相同的条件下测定未知物的Ve或Kav，通过标准曲线即可求出其分子量。凝胶层析测定分子量操作比较简单，所需样品量也较少，是一种初

25、步测定蛋白分子量的有效方法。13、简述Sephadex-25分离血红蛋白和铁氰化钾的原理。本实验属于凝胶层析，Sephadex-25作为基质，具有立体网状结构，筛孔直径一致，且呈珠状颗粒。这种基质对生物大分子可以完全或部分排阻于筛孔之外，而对小分子物质则不能排阻，但可让其在筛孔中扩散、渗透。大分子无法进入凝胶颗粒之间的流动相中，因而以较快速度首先流出层析柱，而小分子则能自由出入凝胶颗粒中，并很快在流动相和固定相之间形成动态平衡，因此就要花费较长的时间流经柱床，从而使不同大小的分子得以分离。血红蛋白是一种相对分子量较高的生物大分子，溶液外观呈红色，而铁氰化钾是相对分子质量较低的无机小分子，溶液外

26、观颜色为黄色。在实验过程中，明显可见两者分离的过程。铁氰化钾因相对分子质量较小，在层析柱中呈现本来的黄色带而远远地落在血红蛋白后面。14、在凝胶层析柱中分离某有效成份时，洗脱体积是140ml，其外水体积和总体积分别是60ml和200ml，求分配系数是多少？Kav=(Ve-V0)/(Vt-V0)=（140-60）/（200-60）=0.5715、离子交换剂由哪几部分组成？何为阳离子和阴离子交换剂？离子交换剂可以分为三部分：高分子聚合物基质、电荷基团和平衡离子平衡离子带正电的离子交换剂能与带正电的离子基团发生交换作用，称为阳离子交换剂；平衡离子带负电的离子交换剂与带负电的离子基团发生交换作用，称为

27、阴离子交换剂。 16. 0.015mol/LNa2SO4溶液的离子强度？I = 1/2CZ2 = 1/2（0.015×2×12 +0.015×22）= 0.045二、名词解释：1. 离心技术是分子生物学和生物化学研究中不可缺少的一种技术。它是利用物质 沉降系数、密度、浮力等方面的差别，用强大的离心力场将其分离、浓缩、纯化和鉴定的技术。2. 沉降系数表示单位离心力场下的沉降速率即通过单位离心力场所需要的时间，因此其单位为秒。1S单位等于1×10-13秒。3. 电泳：带电颗粒在电场中向着与其电性相反电极方向移动的现象。4. 液体在电场中，对于固体支持介质的相

28、对移动，称为电渗现象。5. 区带电泳：电泳过程中，待分离的各组分分子在支持介质中被分离成许多条明显的区带，这是当前应用最为广泛的电泳技术。6. 自由界面电泳：这是瑞典Uppsala大学的著名科学家Tiselius最早建立的电泳技术，是在形管中进行电泳，无支持介质，因而分离效果差，现已被其他电泳技术所取代。7. 等电聚焦电泳：由两性电解质在电场中自动形成pH梯度，当被分离的生物大分子移动到各自等电点的pH处聚集成很窄的区带。8. 在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体或超临界体等，都称为流动相。9. 分配系数：是指在一定的条件下，某种组分在固定相和流动相中含量（浓度）

29、的比值，常用K来表示。分配系数是层析中分离纯化物质的主要依据。10. 在一定条件下，在相同的时间内某一组分在固定相移动的距离与流动相本身移动的距离之比值。常用Rf来表示。11. 在一定条件下，在相同时间内，某一组分在固定相中移动的距离与某一标准物质在固定相中移动的距离之比值。它可以小于等于1，也可以大于1。用Rx来表示。12. 排阻极限是指不能进入凝胶颗粒孔穴内部的最小分子的分子量。13. 层析法是一种基于被分离物质的物理、化学及生物学特性的不同，使它们在某种基质中移动速度不同而进行分离和分析的方法。14. 能对抗外来少量强酸强碱或稍加稀释不引起溶液PH值发生明显变化的作用叫做缓冲作用;具有缓

30、冲作用的溶液,叫做缓冲溶液。 15. 同离子效应：在弱电解质溶液的平衡体系中，加入与弱电解质含有相同离子的、易溶的强电解质时，使解离平衡发生移动，降低弱电解质解离作用，这种现象称为同离子效应。16. 分辨率一般定义为：相邻两个峰的分开程度。用Rs来表示。17. 分配层析是根据在一个有两相同时存在的溶剂系统中，不同物质的分配系数不同而达到分离目的的一种层析技术。18. 凝胶过滤层析是以具有网状结构的凝胶颗粒作为固定相，根据物质的分子大小进行分离的一种层析技术。19. 离子交换层析是以离子交换剂为固定相，根据物质的带电性质不同而进行分离的一种层析技术。20. 亲和层析是根据生物大分子和配体之间的特

31、异性亲和力（如酶和抑制剂、抗体和抗原、激素和受体等），将某种配体连接在载体上作为固定相，而对能与配体特异性结合的生物大分子进行分离的一种层析技术。亲和层析是分离生物大分子最为有效的层析技术，具有很高分辨率。21. 外水体积是指凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积，也就是凝胶颗粒间液体流动相的体积。22. 内水体积是指凝胶颗粒中孔穴的体积，凝胶层析中固定相体积就是指内水体积。23. 基质体积是指凝胶颗粒实际骨架体积。24. 柱床体积就是指凝胶柱所能容纳的总体积。25. 洗脱体积是指将样品中某一组分洗脱下来所需洗脱液的体积。26. 吸水率是指1g干的凝胶吸收水的体积或者重量，但它不包括颗粒间吸附的水份。

32、27. 床体积是指1g干的凝胶吸水后的最终体积。28. 热源物质是指微生物产生的某些多糖蛋白复合物等使人体发热的物质。三、填空：1. 离心机可分为工业用离心机和实验用离心机。2. 制备性离心机可分为三类：普通离心机、高速冷冻离心机和超速离心机。3. 制备性超速离心的分离方法有两种：差速沉降离心法和密度梯度区带离心法（或区带离心法）。4. 生物化学研究中，沉降系数S有两个重要用途：预计沉降时间和测定物质分子质量。5. 超速离心机转速可达5000080000pm，相对离心力最大可达510000×g。6. 超速离心机主要由四部分组成驱动和速度控制、温度控制、真空系统和转头。7. 常用的分离

33、纯化方法和技术有离心技术、电泳技术、层析技术、一般生化分离应用技术。8. 电泳装置主要包括电源和电泳槽两个部分。9. 电泳槽可以分为水平式和垂直式两类。10. 影晌电泳分离的主要因素：待分离生物大分子的性质、 缓冲液的性质、电场强度和焦耳热 、电渗 、 支持介质的筛孔。 11. 将下列缩写符号译成中文：PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳；IEF等电聚焦；CE毛细管电泳；IEC离子交换层析；SDS十二烷基磺酸钠。12. 电泳按支持介质的不同可分为纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳五类。13. 纸电泳点样方法有干点法和湿点法。 14. 琼脂糖凝胶电泳分为

34、垂直及水平型两种。15. 聚丙烯酰胺凝胶电泳中常用的催化聚合方法有两种化学聚合和光聚合。16. pH梯度的组成方式有二种：人工pH梯度和天然pH梯度。17. CE的优点可概括为三高二少：高灵敏度、高分辨率、高速度、样品少、成本低。18. 在层析技术中，温度对分辨率的影响，是对分离因子与理论塔板高度的综合效应。19. 一般来说，分离纯化极性大的分子（带电离子等）采用正相色谱（或正相柱），而分离纯化极性小的有机分子（有机酸、醇、酚等）多采用反相色谱（或反相柱）。20. 根据固定相基质的形式分类，层析可以分为纸层析、薄层层析和柱层析。21. 根据流动相的形式分类，层析可以分为液相层析和气相层析。22

35、. 根据分离的原理不同分类，层析主要可以分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。23. 在生化实验中，基本上我们都是采用部分收集器来收集分离纯化的样品。 24. 葡聚糖凝胶主要由Pharmacia Biotech生产。常见的有两大类，商品名分别为Sephadex和Sephacryl。 25. 一般的凝胶层析实验可以分为两类：分组分离和分级分离。 26. 纸电泳定量测定的方法有洗脱法和光密度法。27. 在PAGE中，当T保持恒定，C为4时，有效孔径最小，C大于或小于4时，有效孔径变大。28. PAGE实验中最常用的C是2.6和3。29. 等电聚焦电泳是根据两性物质等电点（pI）的不同而进行分离的。30. 变性PAGE可分为三类SDS-PAGE、尿素-PAGE和SDS-尿素-PAGE。31. 在电泳时，当样品pI=pH ，其净电荷数为0， 电场中不动；当pI pH，净电荷数为正，电场中向负极移动；当