大学生药学方向科研计划课题申请表

1、课题类别： （科研部填写）浙江大学城市学院2015年度大学生科研计划课题申请表课题名称：骨碎补提取工艺及抗膝骨关节炎作用的研究申报类别：1一般课题辺.重点课题所属领域：1.科技制作类；2.创意设计类；论文类4.调研报告类；5.其他（请在所选项的数字前打钩）课题申请人王会芳所属分院、：年（班）级：医学院指导老师傅旭春申请时间2014年12月申请经费1400联系电江大学城市学院科研部2014年11月申请者的承诺:我和我小组的成员保证如实填写本表各项内容。如果获准立项，我承诺以本表为有约束力的协议，遵守浙江大学城市学院大学生科研计划”和学生科研管理的有关规定，认真开展研究工

2、作，按时提交 项目执行报告，在规定时间内取得预期研究成果并做好课题的总结报申请者（签名）：年 月 日指导教师承诺：本人承诺对本课题研究提供学术指导，督促课题研究工作有计划地开展，按时完成本课题的研究计划。指导老师（签名）：年 月 日6、课题简况课题名称骨碎补提取工艺及抗膝骨关节炎作用的研究所属领域1.科技制作类；2.创意设计类；论文类；4.调研报告类；5.其他经费申请 额度1400研究起止 时间2015年1月1日至2015年12 月30日课题申请 人姓名江南性别女出生 女年月1991.09所在系医学院成果归属.论文;2制作设计;3软件;4.调研报告；5.创意作品；6其他指导老师 姓名傅旭春（职

3、务）教授研究茹严方向药学课题简要说明（限200个字）膝骨关节炎是老年人常见的关节疾病， 化学药物治疗通常有较大的副作用。 骨碎 补性味苦、温，归肝、肾经，具有疗伤止痛、补肾强骨的功能。在中医临床上可见用 于治疗膝骨关节炎，无明显毒副作用。本课题用正交设计法优化骨碎补水提工艺，并 研究骨碎补水提物对木瓜蛋白酶与半胱氨酸联合诱导的小鼠膝骨关节炎模型和木瓜 蛋白酶诱导的大鼠膝骨关节炎模型的作用。课题介绍：阐明本课题的研究目的意义、主要研究内容、研究难点和创新点、研究工作的计划、研究的方式、产生成果的形式等（限1500字）1. 研究目的及意义膝骨性关节炎是以关节软骨退行性改变为核心，累及骨质并包括滑膜

4、、关节囊及 关节其他结构的全方位、多层次、不同程度的与老龄化有关的一种关节疾病。目前国 内大概有20%的老年人饱受该病带来的痛苦。非甾体镇痛抗炎药等化学药物治疗通常有较大的副作用。中药通常有多组分、多靶点、毒副作用小等特点，研究与开发膝骨性关节炎的中药具有重要意义和良好前景。骨碎补是水龙骨科植物槲厥的根茎，性味苦、温，归肝、肾经，具有疗伤止痛、 补肾强骨的功能。在中医临床上可见用于治疗膝骨关节炎， 无明显毒副作用。但骨碎 补水提物的提取工艺和抗膝骨关节炎的实验动物模型的研究报道尚不多见。本课题以骨碎补的主要活性成分-柚皮苷（也是中国药典规定的骨碎补质量指标 成分）含量为指标，用正交设计法优化骨

5、碎补水提工艺， 并研究骨碎补水提物对木瓜 蛋白酶与半胱氨酸联合诱导的小鼠膝骨关节炎模型和木瓜蛋白酶诱导的大鼠膝骨关 节炎模型的作用。为骨碎补治疗膝骨性关节炎的临床应用提供科学实验依据，为进一步研究与开发骨碎补中成药提供一定的实验依据。2. 研究内容及实验方案（1）骨碎补提取工艺的研究用正交设计法优化骨碎补水提工艺。以骨碎补的主要活性成分 -柚皮苷（也是中 国药典规定的骨碎补质量指标成分）含量为指标，选用 L934正交试验设计方案，考 察溶媒量、提取时间和提取次数对柚皮苷提取率的影响，确定最佳提取工艺。（2）骨碎补对膝骨关节炎小鼠实验模型的作用实验动物：ICR小鼠造模方法：用生理盐水配制 4%木

6、瓜蛋白酶溶液与0.03molL半胱氨酸，并将两 者1:1混合，从小鼠右后足足垫部肌肉注射。 造模需注射3次，每次注射0.1ml只后, 相隔两天再次注射。空白组注射等量生理盐水。分组：将小鼠随机分成空白对照组、模型组、盐酸氨基葡萄糖组（阳性对照组） 和骨碎补水提物高、中、低3个剂量组。给药：从开始造模的第3天起灌胃给药，每天2次。给药体积为0.1ml10g,空 白组与模型组给等体积纯净水。疗效评价：小鼠足垫部肌肉注射木瓜蛋白酶与半胱氨酸混合液后，小鼠会出现足趾肿胀、足趾坏死脱落及血瘀块的情况。给药约1周后开始对小鼠足趾的肿胀程度以 及坏死状况、血瘀块颜色进行评分，频率为每周 1次。在对肿胀程度评

7、分后，小鼠眼 眶采血，测定血液中 MMMP-3等的含量。肿胀程度评分规则：O-不肿胀；1-轻度肿胀；2-明显肿胀；3-非常肿胀；4-爆肿。 坏死程度评分规则：1个足趾记1分，足垫上下表面斑块按面积等同几个足趾记 几分。血瘀块颜色评分规则：O-无血瘀块；1-红；2-红转深红；3-白或发黑。将足趾肿胀程度、坏死程度及血瘀块颜色三组评分加和，得各小鼠足趾总评分。(3) 骨碎补对膝骨关节炎大鼠实验模型的作用实验动物：SD大鼠造模方法：将4%木瓜蛋白酶注入大鼠右后足踝关节腔中建立大鼠膝骨关节炎模 型，造模共需注射3次，每次注射后隔两天再次注射。前两次注射剂量为 0.15ml只， 第3次注射剂量为0.2m

8、l只，空白组注射等量生理盐水。分组：同小鼠分组。给药：从开始造模的第4天起灌胃给药，每天1次。给药体积均为1ml100g ,空 白组与模型组给等体积纯净水。疗效评价：造模成功后，大鼠踝关节甚至右后足趾会出现明显红肿，且关节肿胀 程度随模型程度不同而不同，可通过观察大鼠右后足肿胀情况、 颜色给各组大鼠肿胀 度进行评分。在对肿胀程度评分后，大鼠眼眶采血，测定血液中MMMP-3等的含量。木瓜蛋白酶诱导的大鼠膝骨关节炎 MAl指数：0-无关节炎；1-关节有红色斑点或 轻度肿胀；2-关节中度肿胀；3-关节重度肿胀；4-关节严重红肿且不能负重。3. 创新点用正交设计法优化骨碎补水提工艺，并研究骨碎补水提物

9、对木瓜蛋白酶与半胱氨 酸联合诱导的小鼠膝骨关节炎模型和木瓜蛋白酶诱导的大鼠膝骨关节炎模型的作用。 为骨碎补治疗膝骨性关节炎的临床应用提供科学实验依据，为进一步研究与开发骨碎 补中成药提供一定的实验依据。4.进度安排2015.012015.02文献查阅，订购试剂及实验动物2015.03 2015.04骨碎补提取工艺研究2015.05 2015.072015.08 2015.102015.11 2015.12骨碎补对膝骨关节炎小鼠实验模型的作用的研究 骨碎补对膝骨关节炎大鼠实验模型的作用的研究 总结，撰写报告本课题已有研究基础：指围绕本课题的研究方向已开展的研究工作、研究准备及已产 出的成果，无研究基础的不用填写本栏（限 600字）本课题组已经掌握了在小鼠足垫部肌肉注射木瓜蛋白酶与半胱氨酸混合液建立小 鼠膝骨关节炎实验模型的方法，并研究了骨碎补水提物对小鼠膝骨关节炎的作用，对 小鼠足趾的肿胀程度进行评分的结果如下：组别只数剂量（gkg）肿胀体积空白组100.231 ±.020模型组100.432 ±.036阳性组100.9750.439 ±.052*骨碎补组1011.70.288 ±.02