番茄MPK2基因烟草遗传转化体系的建立

1、 番茄MPK2基因烟草遗传转化体系的建立 摘要：为建立高效快速的番茄MPK2基因烟草遗传转化体系。首先珊西烟草无菌苗的培养与再生，制备根癌农杆菌感受态，将质粒pCAMBIA2301-MPK2导入到根癌农杆菌中。然后通过根癌农杆菌介导法，卡那霉素的筛选以及多代培养得到MPK2的转基因烟草。最后提取转化烟草叶片DNA，进行PCR扩增并鉴定。本试验总结了已有的经验建立高效快速的番茄MPK2基因烟草遗传转化体系，对进一步探索番茄MPK基因功能与作用及其应用作出一定的贡献。10972关键词：MPK2基因；烟草；PCR；转化Establishment of Tomatoes MPK2 Gene Tobac

2、co Genetic Transformation SystemAbstract：The article was to establish a efficient and rapid tobacco genetic transformation system of tomato MPK2 gene. First, Nicotiana tabacum cv. Xanthi-ncsterile plants were cultivated and regenerated. After preparing Agrobacterium tumefaciens competent cells, we t

3、ransfered the plasmid pCAMBIA2301-MPK2 into the Agrobacterium tumefaciens. Then, though Agrobacterium tumefaciens-mediated , kanamycin and generational cultured, we got transformational tobacco. Finally, we extracted, amplified and identified the DNA of the transformational leaf by polymerase chain

4、reaction (PCR). The research summarized the existing experience to establish efficient rapid tobacco genetic transformation system of tomatoes MPK2 gene, to further explore the tomato MPK genes function and to make certain contribution in the application.Key words: MPK2 gene; Tobacco; Polymerase cha

5、in reaction; Transformation目录摘要1Abstract1引言11材料与方法31.1试验材料与仪器31.2 试验方法31.3转基因植株的获得及筛选42 结果与分析5 本试验以烟草为试验材料，用GV3101根癌农杆菌介导重组载体的转导，希望能为植物MAPK C族基因的研究作出一定的贡献。近年来，国内外的学者对烟草转化体系的研究已经较为成熟，本试验借鉴已经研究出的结果建立的番茄MPK2基因烟草遗传转化体系期望能对番茄MPK2基因的研究可以对植物MAPK基因功能作进一步诠释奠定一定的基础。1材料与方法1.1试验材料与仪器1.1.1材料烟草品种珊西、质粒pCAMBIA2301-

6、MPK2、转化受体菌大肠杆菌、GV3101根癌农杆菌等试验材料，均由周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室提供。1.1.2主要仪器琼脂糖凝胶电泳仪；中速离心机；摇床；无菌工作台；PCR仪；分光光度计；pH计。1.2 试验方法1.2.1无菌苗的培养将烟草种子用体积分数75%酒精浸泡30s，用蒸馏水冲洗23遍，再用5%次氯酸钠溶液消毒810min，用无菌水冲洗35次，将种子散播在MS培养基上。待其长出小苗，转移至盛有MS培养基(pH=5.8)的花瓶中，放于25，周期为16h的光照，8h的黑暗的组培间中，得到烟草无菌苗，待用。1.2.2珊西烟草的再生配制MS+6BA(3 mg/L)+蔗糖3%+NAA(0.2 mg/L)培养基，调培养基pH=6.06。将无菌苗于无菌水中切成1.0cm×1.0cm左右的叶盘直接放于配制好的培养基中，25，周期为16h的光照，8h的黑暗的组培间中培养观察再生情况。1.2.3根癌农杆菌活化随机挑取含有质粒pCAMBIA2301-MPK2的GV3101根癌农杆菌单菌落接种于LB添加有2