单基因病致病基因的鉴定

1、1会计学单基因病致病基因的鉴定单基因病致病基因的鉴定234567功能克隆：功能克隆：从蛋白质着手进行基因克隆的策略。从蛋白质着手进行基因克隆的策略。定位克隆定位克隆：在蛋白质产物未知的情况下进行基因克隆的在蛋白质产物未知的情况下进行基因克隆的策略。策略。蛋白蛋白酶消化、分离酶消化、分离氨基酸序列测定氨基酸序列测定设计合成寡核苷酸设计合成寡核苷酸筛选筛选cDNAcDNA文库文库不同多肽片段不同多肽片段家系资料家系资料连锁分析连锁分析获得差异片段获得差异片段染色体异常染色体异常筛选筛选cDNAcDNA文库文库 克隆全长基因克隆全长基因精细定位精细定位消减克隆消减克隆891011甲甲 型型 血血 友

2、友 病病遗传方式：遗传方式：XRXR发病率：发病率：1/10,0001/10,000（男）（男）病因：病因：FF基因遗传性缺陷基因遗传性缺陷 ( (缺失、点突变、插入、重复、倒位缺失、点突变、插入、重复、倒位) ) 基因定位：基因定位：Xq28Xq28 基因全长基因全长186kb186kb，含，含2626个外显子个外显子 临床表现：外伤后出血不止，关节血肿临床表现：外伤后出血不止，关节血肿12 F F因子基因的功能克隆因子基因的功能克隆功能克隆是从功能克隆是从蛋白质蛋白质着手进行基因克隆的策略。着手进行基因克隆的策略。因子因子 多肽多肽 不同多肽片段不同多肽片段蛋白酶消化蛋白酶消化分离分离氨基

3、酸序列测定氨基酸序列测定设计合成寡核苷酸设计合成寡核苷酸筛选筛选cDNA文库文库13通过动物模型鉴定疾病基因通过动物模型鉴定疾病基因14151617基于染色体异常的基因定位基于染色体异常的基因定位18连锁分析连锁分析19确定致病基因确定致病基因o突变筛查：在家系中该突变与表型共分离是最主要的证据o表型拯救：有些导致疾病的突变通常引起基因功能的丧失，而且其表型是可逆的。如果从一个患者的细胞中能够发现基因突变的表型，我们就可以检测转染了候选基因野生型等位基因的表达载体是否能够“拯救”突变并恢复正常的表型o建立疾病的小鼠模型：如果能够在某一家系中确定一个致病基因，但又无法利用更多的无关患者来验证，通

4、过构建小鼠模型来验证。对于功能丧失性突变导致的表型可以通过制作基因敲除（knock-out）小鼠。对于功能获得性突变导致的表型或者突变效应不清楚的表型，可以制作突变基因敲入（knock-in）模型2021Duchenne型肌营养不良型肌营养不良（ Duchenne muscular dystrophy, DMD）n遗传方式：遗传方式： XRn发病率：发病率：1/3400（男）（男）n临床表现：双下肢临床表现：双下肢肌无力、肌无力、Gower征、腓肠肌征、腓肠肌假性肥大、进行性肌萎缩（一般假性肥大、进行性肌萎缩（一般20岁）。岁）。n病因：病因：DMD基因突变，基因突变，抗肌萎缩蛋白（抗肌萎缩蛋

5、白（dystrophin）。n基因定位：基因定位：Xp21.23，全长，全长2,400kb，含，含79个外个外显子，是已知最大的致病基因。显子，是已知最大的致病基因。22Gower综合征综合征23 DMD DMD基因的定位克隆基因的定位克隆定位克隆是在定位克隆是在蛋白质产物蛋白质产物未知的情况下进行基因克隆的策略。未知的情况下进行基因克隆的策略。家系资料家系资料 精细定位精细定位 消减克隆消减克隆连锁分析连锁分析获得差异片段获得差异片段染色体异常染色体异常筛选筛选cDNA文库文库克隆全长克隆全长242526272829303132功能克隆：功能克隆：从蛋白质着手进行基因克隆的策略。从蛋白质着手进行基因克隆的策略。定位克隆定位克隆：在蛋白质产物未知的情况下进行基因克隆的在蛋白质产物未知的情况下进行基因克隆的策略。策略。蛋白蛋白酶消化、分离酶消化、分离氨基酸序列测定氨基酸序列测定设计合成寡核苷酸设计合成寡核苷酸筛选筛选cDNAcDNA文库文库不同多肽片段不同多肽片段家系资料家系资料连