肌肝糖元说明书(南京建成)

1、本试剂盒仅用于科研、实验室南京建成 肌糖元及肝糖元测定试剂盒、原理：糖元在浓硫酸的作用下可脱水生成糖醛衍生物，后者再与蒽酮作用形成蓝色化合物，与同法处理的标准葡萄糖溶液比色定量。糖元在浓碱溶液中非常稳定， 故在显色之前先将组织放入浓碱中加热以破坏其它成分而保留糖元。、试剂组成与配制：（50T）1、碱溶液40ml XI瓶，室温或28C保存6个月。2、1mg/ml葡萄糖标准贮备液 5ml XI支，室温或28C保存6个月。0.01mg/ml葡萄糖标准应用液的配制：葡萄糖标准品贮备液：蒸馏水 =1 : 99,现用现配，保存一天。3、 显色剂：粉剂X6支，室温或28 C保存6个月。用时每支加浓硫酸 25

2、ml （浓硫酸自备），混匀，现用现配。显色剂配制的注意点：1、浓硫酸浓度必须 95% 98%的分析纯并且不可开瓶太久（开瓶 放置太久，浓度会降低）2、配制显色剂的容器和量筒必须绝对干燥，否则会使试剂三无法 充分溶解3、配制显色剂时：先将粉剂倒入烧杯中，然后加少量浓硫酸（约 10ml）,用玻棒压碎粉剂，使其充分溶解，然后再加入剩余的浓 硫酸，充分搅拌后室温避光保存。三、样本前处理：1、 取样：取新鲜肝脏或肌肉样本用生理盐水漂洗后，滤纸吸干，称重（样本重量w100mg为宜，不要 100mg ）。2、 水解：按样本重量（mg）:碱液体积（卩l） =1 : 3, 起加入试管中，沸水浴煮20min,流水

3、冷却。例如：肝脏组织称重 75mg按重量体积比1 ：3应加入碱液的量为 225卩l ; 肌肉组织称重85mg按重量体积比1 ：3应加入碱液的量为 255卩l。*注：在煮前用冰箱保鲜膜将管口扎起，以防水分蒸发，然后在膜上用针头扎一小孔，以 便气体热胀冷缩。3、将糖元水解液进一步制备成糖元检测液：肝糖元检测液为1%，加蒸馏水的量为：肝脏重量X100肝脏重量X 4*=肝脏重量X 96肌糖元检测液为5%，加蒸馏水的量为：肌肉重量X20肌肉重量X 4*=肌肉重量X 16注：4*为水解时碱液与组织的体积数。例如上例：制备1%肝糖元检测液，加蒸馏水的量为：75X 96=7200卩l =7.2 ml;制备5%

4、肌糖元检测液，加蒸馏水的量为：85 X 16=1360卩l =1 .36ml。四、操作表：'空白管标准管测定管蒸馏水（ml） 1.0 0.90.01mg/ml 标准(ml)1.0糖兀检测液（ml）0. 1显色液（ml） 222混匀后置沸水中煮 5min，冷却后于620nm波长，1cm光径，空白管调零，测各管OD值。1本试剂盒仅用于科研、实验室南京建成 五、计算与举例:1、公式:糖元含量 测定管0D值标准管含量=x（mg/g组织） 标准管0D值 （O.OImg） 注：*样本测试前稀释倍数为样本前处理第样本测试前x稀释倍数*X10*-1.113步中稀释倍数，即肝脏为100、肌肉为20。2本

5、试剂盒仅用于科研、实验室南京建成 *10为测试过程中的稀释倍数。*1.11为此法测得的葡萄糖含量换算成糖元含量的系数，即100卩g糖元用蒽酮试剂显色的颜色相当于111卩g葡萄糖用蒽酮试剂显色的颜色。2、举例：（1 ）、肝糖元计算举例：取小鼠肝脏按上述步骤操作，测得标准管OD值为0.174，测定管OD值为0.223,计算结果为：0.2230.174X0.01 X100 X10 -1.11 =11.546（mg / g肝组织）小鼠肝糖元含量（mg / g肝组织）（2 ）、肌糖元计算举例:取小鼠肌肉按上述步骤操作，测得标准管OD值为0.174，测定管OD值为0.171,计算结果为：小鼠肌糖元含量（mg/g肌肉组织）0.1710.174X0.01 X20 X10 -1.11 = 1.771（mg/g肌肉组织）#本试剂盒仅用于科研、实验室南京建成 #本试剂盒仅用于科研、实验室南京建成 南京建成生物工程研究所南京建成科技有限公司#本试剂盒仅用于科研、实验室南京建成 #本试剂盒仅用于科研、实验室南京建成 地 址:邮 编: 联系人: 投诉电话：建成主页：南京市中央路 258- 27号 电 话:新立基大厦11层1106室210009季建平传真:（025） 57713719短信: （建成生物）E-maiL:（建成科技）（025） 833603218336