一种抗HER2人源化单克隆抗体药物的药学研究

1、一种抗HER2人源化单克隆抗体药物的药学研究王晓闻，刘培培，吕锋华，谭青乔*（抗体药物国家工程研究中心，201203）摘要：目的 对一种用于治疗HER2阳性乳腺癌的抗HER2人源化单克隆抗体靶向生物制剂进行有效性和安全性的药学研究。方法 采用高效液相色谱、毛细管电泳、圆二色谱、差示扫描量热技术、液质联用和基于人乳腺癌细胞的体外活性检测以及SPR技术分析抗HER2抗体的纯度、结构、翻译后修饰以及功能活性等关键质量属性。结果 该抗体的单体纯度>98%，聚体含量<2%；轻重链电泳纯度>97%；具有正确的二级与三级结构，相变温度为72.65±0.1，和85.08±

2、0.1；大于99%的分子具有正确的糖基化修饰，且N糖分布大体上与参比制剂高度相似，高甘露糖含量少但唾液酸含量多；对人乳腺癌细胞的增殖抑制活性和ADCC活性与参比制剂相当（P=0.96），与HER2抗原以及Fc受体的结合也无显著差异。结论 该抗体在药学评价上展现了高纯度、低杂质、结构稳定以及正确的翻译后修饰的特性，通过如此精心的分子和工艺设计，使其表现出与参比制剂相同的生物等效功能作用，而且也在免疫原性和稳定性上都表现出低风险，具备良好的安全性和有效性。关键词: HER2; 单克隆抗体; 质量; 有效性; 安全性The Pharmaceutical Research of an Anti-HER

3、2 Humanized Monoclonal Antibody Drug ProductWANG Xiao-wen, LIU Pei-pei, LV Feng-hua，TAN Qing-qiao*（National Engineering Research Center of Antibody Medicine，Shanghai 201203，China）ABSTRACT： OBJECTIVE To perform a pharmaceutical study on the efficacy and safety of a therapeutic anti-HER2 humanized mon

4、oclonal antibody targeting HER2-positive breast cancer. METHODS The critical quality attributes such as purity, structure, post-translation modifications, function and efficacy are analyzed using HPLC, CE-SDS, Circular Dichroism, Differential Scanning Calorimeter, LC-MS/MS, human breast cancer cell-

5、based in vitro bioactivity assay and SPR binding kinetics. RESULTS The monomer content of the antibody is more than 98% while the polymer impurities are less than 2%. The sum of heavy chain and light chain peak area is over 97% on the CE-SDS electrophoretogram. The antibody drug demonstrates correct

6、 secondary and tertiary structure with two phase transition temperatures of 72.65±0.1 and 85.08±0.1. More than 99% of the molecules are correctly glycosylated with a highly similar N-glycan profiling to the reference product. The differences exist where the experiment subject has higher co

7、ntent of high mannose structure but lower sialic acids. The two products keep the same level on BT474 proliferation inhibiting bioactivity and ADCC efficacy（P=0.96）,and show no significant difference on the binding affinity to HER2 and Fc Receptors. CONCLUSION The antibody drug product demonstrates

8、excellent characteristics such as high purity, few impurities, stable structure and correct post translation modifications in the pharmaceutical evaluation. By means of these well-designed molecules and production process, the drug product is proved bioequivalent to the reference product as well as

9、low-risk of immunogenicity and stability. The antibody drug product has good safety and efficacy. KEY WORDS: HER2; monoclonal antibody ; quality;efficacy;safety作者简介：王晓闻，女，硕士 研究方向：抗体药物质量分析评价*通讯作者：谭青乔，男，博士 研究方向：抗体药物质量分析评价 Tel：（021）60753275 E-mail: tanqqcpgj-据世界卫生组织数据统计，每年有超过50万人死于乳腺癌，高居女性恶性肿瘤发病率的第一位，占

10、所有妇女癌症的16%。一项全国多中心10年回顾临床流行病学研究显示1，我国女性乳腺癌患者具有发病年龄早、浸润性导管癌多、肿块更大、分期更晚、ER和PR表达比例更低和HER2比例更高（18%）的特点。临床上常用的乳腺癌化疗药物有紫杉类、长春碱类、铂类和蒽环类，化疗药物由于缺乏对肿瘤细胞的选择性杀伤，大多会有心脏、血液、肠胃、肝脏、肾脏或神经毒性，毒副作用明显2。而针对肿瘤发生机制中的关键受体、基因和调控分子3的靶向生物制剂治疗性单克隆体的出现克服了化疗药物的缺陷。经过近三十年的发展，治疗性单克隆抗体已经成功地成为肿瘤治疗的主流方式，其与靶点的特异识别以及多样的免疫治疗途径决定了单抗在安全性和有效

11、性上的特殊优势，每年全球单抗市场销售额可超过两百亿美元，产品管线以百数计4。目前，研究较为成熟的针对乳腺癌的靶向治疗方法主要以表皮生长因子受体2（HER2）为靶点，因为HER2基因的扩增和蛋白的过度表达的乳腺癌对常规的化疗和内分泌治疗反应差，无病生存期短，预后差5。以HER2为靶点的治疗性单抗以其定向性、高特异性、安全性和低风险成为了针对HER2阳性乳腺癌的有效治疗方法，既能阻断HER2抑制乳腺癌细胞增殖，又能激活免疫系统对肿瘤细胞的攻击。然而，由于欧美发达国家对重组单抗技术的封锁和专利垄断致使进口药品售价高昂，国内的患者选择单一却大多负担不起，这也是虽然乳腺癌被认为是发达国家的疾病，但大多数

12、乳腺癌死亡病例（69%）发生在发展中国家的重要原因。可喜的是，国内已有企业突破了哺乳动物细胞大规模培养和单抗大规模分离纯化技术壁垒，自主创新开发出产业化生产的抗HER2人源化抗体，现已成功完成临床三期，充分证实了国产抗HER2人源化抗体的有效性和安全性。除了临床评价以外，药学评价更是贯穿于初始分子构建至上市后的整个生命周期，因为单抗药物由数百个氨基酸组成，分子量巨大，结构复杂，且通过哺乳动物细胞表达存在翻译后修饰造成了分子的异质性，复杂的修饰和多级结构直接影响到单抗的药效功能，蛋白质较不稳定的特性和复杂且随着技术更新而变化的生产工艺也与其质量和安全性息息相关。为了揭示一种HER2人源化单克隆抗

13、体产品的有效性和安全性，本研究采用高效液相色谱法、毛细管电泳法、基于人乳腺癌细胞的体外活性检测法、SPR技术、质谱技术、圆二色谱技术、差示扫描量热技术等多种技术手段分析了该单抗的关键质量属性，从药学研究角度解析了该单抗药物的分子结构设计、杂质纯度与其安全有效的良好质量表现之间的内在关系。1. 材料与方法重组抗HER2人源化单克隆抗体（MAb302），规格50mg/支，商品名赛普汀，上海中信国健药业股份有限公司生产。参比生物制剂为赫赛汀®。活性试验中使用自制的参考品作为参比品。1.1 还原型毛细管凝胶电泳CE-SDS纯度和杂质分析：样品经-巯基乙醇还原和SDS变性后在PA800 plu

14、s毛细管电泳仪（Beckman Coulter）上进行CE-SDS分析，10kV电压进样，15kV电压下进行分离，214nm UV检测器进行信号采集。1.2 分子排阻液相色谱SECHPLC纯度和杂质分析：使用Dionex U3000高效液相色谱系统（Thermo Fisher）和TSK-Gel G3000SWXL5m 7.8*300mm色谱柱(Tosoh Bioscience)对样品进行分离，20g样品经200mM磷酸盐缓冲液等度洗脱后，280nm UV检测器进行信号采集。1.3 分子排阻色谱分离静态光散射SEC-DLS法测定聚体分子量：使用Agilent 1260 高效液相色谱系统（Agil

15、ent Technologies）和TSK-Gel G3000SWXL5m 7.8*300mm色谱柱(Tosoh Bioscience)对样品进行分离，200g样品经200mM磷酸盐缓冲液等度洗脱后，先经过280nm UV检测器进行信号采集，后串联ZMV2000动态光散射粒度仪（Malvern）检测散射光强计算分子量。1.4 圆二色谱分析：圆二色谱扫描在Chirascan圆二色谱仪（Applied Photophysics）上完成。分别在远紫外区260-180nm和近紫外区360-250nm波段下对样品进行扫描，远紫外区采用0.5mm光径长的石英比色皿，样品浓度为0.2mg·mL-1

16、，并以同比例稀释的制剂缓冲液作为背景对照；近紫外区则采用10mm的比色皿，样品浓度为1.0 mg·mL-1。1.5 Tm值分析 Tm值分析在MicroCal VP-Capillary DSC差示扫描量热仪 (GE Heathcare)上完成。用样品的缓冲液稀释样品到0.5 mg·mL-1，从10110逐渐升温蛋白发生去折叠，检测其热熔变化计算Tm值，即50%蛋白发生变性的相变温度。1.6 N-糖基化分析：样品经糖苷酶PNgase F(New England biolabs)酶切18h后，用3倍体积的冰乙醇沉淀脱糖蛋白后离心取上清液于60烘干。用过量的2-AB（国药试剂）于6

17、5标记N-寡糖3小时，标记后经固相萃取小柱Cleanert HILIC（天津博纳艾杰尔科技）去多余的标记液及杂质，纯化后的N-寡糖溶液经离心后取上清经ACQUITY UPLC BEH 1.7um 2.1*150mm Glycan色谱柱（Waters）分离后先经过荧光检测器330nm激发光和420nm发射光检测N-寡糖荧光信号，后串联XEVO G2 Q-Tof质谱（Waters）进行N-寡糖的分子量鉴定。1.7 细胞增殖抑制活性试验采用人乳腺癌细胞系BT-474（ATCC HTB-20）检测样品对细胞增殖的抑制功能活性。样品2倍比稀释13个浓度加样到铺有BT-474细胞的培养板中，375%CO2

18、培养7天后，使用CellTiter 96® AQueous非放射性细胞增殖检测试剂盒（Promega）显色读数。检测结果为与自制参考品的相对活性，即四参数量效曲线EC50值之比。1.8 ADCC活性试验BT-474细胞与NK92 CD16a细胞以1：5比例铺板，样品3倍比稀释10个浓度加样，375%CO2孵育46h后离心取上清，使用CytoTox-Glo细胞毒性检测试剂盒（Promega）显色读数。检测结果为与自制参考品的相对活性，即四参数量效曲线EC50值之比。1.9 与HER2抗原的结合活性试验Recombinant HumanErbB2/HER2（北京义翘神州）12mg

19、3;mL-1包被于ELISA板上，样品2倍比稀释11个浓度加样，孵育后使用HRP标记anti-Human Ig G(Fc) antibody（Sigma）作为二抗进行检测，采用TMB显色读数。检测结果为与自制参考品的相对结合活性，即四参数量效曲线EC50值之比。1.10 与HER2抗原的亲和力分析使用Biacore T200分子相互作用分析仪（GE Healthcare）进行亲和力分析。Anti-Human Ig G(Fc) antibody（GE Healthcare）经氨基偶联试剂盒（GE healthcare）偶联到CM5芯片上（GE Healthcare）后，1 mg/ml的样品和Re

20、combinant Human ErbB2/HER2（北京义翘神州）依次通过流路，样品被捕获而HER2与样品发生结合解离，最后使用氯化镁再生芯片。使用5个不同浓度的HER2重复此循环，采用1:1 binding模式拟合数据计算亲和力。1.11 与FcRn受体的亲和力分析Recombinant Human FcRn、FcRIIIa V158、FcRIIIa F158（义翘神州）经氨基偶联试剂盒（GE healthcare）偶联到CM5芯片上（GE Healthcare）后，样品通过流路与芯片上的FcRn发生结合解离，用Tris-NaCl缓冲液再生芯片。使用6个不同浓度的样品重复此循环，采用Two

21、 State Reaction模式拟合数据计算亲和力。1.12 与FcRIIIa受体的亲和力分析Biotin CAPture Reagent（GE Healthcare）杂交于CAP芯片（GE Healthcare）后，生物素标记的Recombinant Human FcRIIIa V158、FcRIIIa F158（义翘神州）通过流路被链亲和素捕获固定于芯片，样品经过流路与芯片上的FcRIIIa发生结合解离，用盐酸胍-氢氧化钠再生芯片。使用6个不同浓度的样品重复此循环，采用1:1 binding模式拟合数据计算亲和力。2 结果2.1 CE-SDS纯度和杂质分析：还原CE-SDS是根据分子量大

22、小分离轻链、重链、非糖基化重链和其他杂质的方法，能够准确的定量非糖基化重链的含量和抗体轻重链纯度。图1分析结果显示，三个不同批次的MAb302的非糖基化重链的含量均小于1%，轻重链之和纯度均大于97%（表1）。对三个批次多次检测数据进行均值的统计学分析，得知Mab302的非糖基化重链含量的95%置信区间为（0.77%0.83%），轻重链纯度的95%置信区间为（97.3%97.6%），MAb302产品呈现高纯度的同时也展现了良好的批间一致性。 表1MAb302的还原CE-SDS纯度和杂质分析结果Tab.1 The results of reduced CE-SDS purity and impu

23、rities analysis of MAb302图1MAb302的还原型CE-SDS电泳图谱Fig.1 The reduced CE-SDS electrophoretogram of MAb3022.2 SEC-HPLC单体纯度和聚体杂质分析：同毛细管凝胶电泳相似，SEC-HPLC也是根据分子大小分离主要成分和杂质的方法。SEC-HPLC在天然情况下通过色谱填料孔径的筛分将MAb302单体与其他高分子量和低分子量杂质分离，其优势在于能够准确定量聚体和单体。为了鉴定聚体的聚合度，又进行了SEC-DLS分析，通过串联的DLS检测器研究各峰的颗粒大小从而评估其分子量。分析结果显示（图2），三个不

24、同批次的MAb302的聚体含量均小于2%，均值的95%置信区间为（1.05%1.33%），单体纯度均大于98%，均值的95%置信区间为（98.6%99.0%），远高于可接收标准95%。SEC-DLS分子量分析的结果显示MAb302聚体的分子量基本是单体的两倍左右，为二聚体（表2）。表2MAb302的单体纯度和聚体含量、分子量分析结果Tab.2 The results of monomer and polymer as well as Mw analysis of MAb302图2MAb302的SEC-HPLC图谱Fig.2 The SEC-HPLC chromatogram of MAb302

25、2.3 圆二色谱扫描分析：除了通过提高纯度控制杂质对产品质量的影响以外，抗体自身的正确折叠也是保障安全性和有效性的关键要素。圆二色谱通过测量样品分别对远紫外波段和近紫外波段下左右偏振光吸收程度的差异来反应Mab302二级结构（螺旋、折叠和无规则卷曲）和三级结构（氨基酸侧链残基）的折叠信息。对比Mab302与参比生物制剂的远紫外和近紫外（图3）CD图谱显示，两者图形一致，几乎可以重叠，显示了Mab302与参比生物制剂相似的二级和三级结构，是Mab302正确折叠的证据。图3MAb302与参比生物制剂的CD图谱Fig.3 The Circular Dichroism Spectrum of MAb3

26、02 and the reference product2.4 Tm值分析：抗体的高级结构决定了热稳定性，因而对其安全性有重要影响。DSC技术测量了Mab302和参比生物制剂在加热过程中发生去折叠而产生的热焓变化，推算Tm值反映了其50%天然高级结构被破坏时的相变温度。相变温度越高，热稳定性越好。单克隆抗体因为有多个结构域，通常会有多个相变温度代表不同结构域的去折叠。MAb302的Tm1值为72.65±0.1，Tm2值为85.08±0.1，而参比生物制剂的Tm1值为72.25±0.4，Tm2值为85.13±0.3（表3），MAb302的热稳定性与参比生物

27、制剂一致。表3Mab302与参比生物制剂的Tm值Tab.3 The Tm values of MAb302 and the reference product2.5 N-糖基化分析：对于由哺乳动物细胞表达的MAb302来说，拥有正确的结构和折叠尚不足以完全保障其有效性和安全性，还需要正确的糖基化修饰。糖基化修饰与单抗的功能紧密相关。首先，MAb302与参比生物制剂的N糖基化位点均发生在重链第297位天冬酰胺（数据未显示），其次经过脱糖荧光标记色谱分析的结果显示，MAb302和参比生物制剂均以G0F、G1F、G1F和G2F为主（图4），具有相似的糖型多样性，符合典型的单抗糖基化特征。根据N-寡糖

28、的特征性结构（唾液酸、半乳糖、岩藻糖、高甘露糖）来统计MAb302和参比生物制剂的N-寡糖种类和比例（表4），可以看出两者糖型分布总体高度相似，但略有差异，如在高甘露糖和唾液酸的含量上差异相对显著。MAb302含高甘露糖和含唾液酸的N-寡糖的比例分别为3.63±0.66%和2.74±0.72%，而参比生物制剂的含高甘露糖和含唾液酸的N-寡糖的比例分别为5.74±0.44%和1.58±0.10%，参比生物制剂的高甘露糖含量比MAb302多了60%左右，而MAb302的唾液酸含量则比参比生物制剂多了70%左右，且唾液酸均为NANA，没有发现NGNA。 表4M

29、Ab302与参比生物制剂的糖基化分析结果Tab.4 The N-glycan profiling of MAb302 and the reference product图4MAb302与参比生物制剂的N-寡糖荧光色谱对比图Fig.4 The fluoro-chromatograms of MAb302 and the reference product2.6BT-474细胞增殖抑制活性：MAb302在体内的一种作用机制是：靶向定位于乳腺肿瘤，与肿瘤细胞表面的HER2分子结合使之解聚，从而抑制下游信号的激活阻止其繁殖6。BT-474细胞是人乳腺癌细胞，其表面大量表达了HER2分子，在体外将MAb

30、302作用于BT-474细胞能够抑制其增殖，正是模拟了体内的作用机制，而量效曲线的建立和半数有效浓度的计算能够直接反映样品对肿瘤细胞的抑制能力。三批MAb302的BT-474细胞增殖抑制相对活性为103±8%，而三批参比生物制剂的相对活性为103±5%（表5），两者无显著差异（P=0.96）(图5)。 表5MAb302与参比生物制剂的BT-474细胞增殖抑制活性Tab.5 The BT-474 proliferation inhibiting bioactivity of MAb302 and the reference product图5MAb302与参比生物制剂对BT-

31、474细胞的增殖抑制量效曲线图Fig.5The response-dose curves of MAb302 and the reference product acting on BT-4742.7 ADCC活性除了抑制乳腺癌细胞的增殖以外，MAb302的另一种作用机制7是通过诱导ADCC效应激发免疫系统细胞杀伤癌细胞。体外的ADCC活性测试以BT-474为靶细胞，表达有FcRIIIa（CD16a）受体的NK细胞为效应细胞，通过加入MAb302诱发NK细胞对肿瘤细胞的杀伤，反映其ADCC活性。参比生物制剂的ADCC活性是MAb302的90%（图6）。图6MAb302与参比生物制剂的ADCC活

32、性量效曲线图Fig.6The ADCC response-dose curves of MAb302 and the reference product 2.8与HER2抗原的结合活性和亲和力：无论是通过增殖抑制还是ADCC效应，MAb302发挥功能的必要条件是与HER2分子的结合。与HER2分子更强的结合能影响更强的增殖抑制和ADCC活性。通过终点观察的ELISA方法和动态观察的SPR技术（表6），两项试验均证实了MAb302和参比生物制剂具有相似的与HER2的结合能力和亲和力。表6MAb302、参比生物制剂与HER2抗原的结合活性及亲和力Tab.6 The binding activity

33、 and affinity to HER2 of MAb302 and the reference product2.9与Fc受体的亲和力：除了Fab段与抗原分子HER2的结合，MAb302 Fc段与Fc受体的结合也与其功能作用紧密相关。重要的Fc受体主要有FcRn和FcRIIIa，MAb302与它们的结合强弱直接关系到血清半衰期和诱发ADCC效应的能力。通过SPR技术测定了MAb302和参比生物制剂与Fc受体的亲和力常数KD(表7)，可以看出，不管是与半衰期相关的FcRn受体还是与ADCC相关的FcRIIIa受体的结合解离能力，两者在同一个数量级上，无明显差异。表7MAb302、参比生物制剂

34、与Fc受体的亲和力Tab.7 The binding affinity to Fc receptors of MAb302 and the reference product3 讨论与结论单克隆抗体虽然是巨大、复杂而且具有多重异质性的分子，但是通过各种先进的分析技术，我们能够细致准确地研究其分子结构、杂质特征含量、稳定性、功能活性，反映单抗药物的质量、有效性和安全性，保障病患用药的关键要求。杂质含量的控制是单抗药物关键质量属性中保障药物安全性的重要标志，在满足如宿主DNA、宿主细胞蛋白、proteinA残留等单抗药物常见的工艺残留杂质符合安全标准和微生物安全的前提下，与蛋白本身相关的杂质的控制

35、更能体现生产者对MAb302的分子结构和工艺设计的心思。小于2%的聚体含量且聚合度为最小仅为二聚体，不但从含量上控制了杂质远在安全限度以下，而且从特性上降低了其免疫原性的风险8,9,10，聚合程度越低，免疫原性越弱。免疫原性也与糖基化中高甘露糖含量11和唾液酸中NGNA12的含量相关，MAb302较低的高甘露糖含量和NGNA的零存在是从分子结构设计上确保低免疫原性的实例。在高纯度、低杂质以及单抗分子正确的翻译后修饰的基础上，正确的结构也是确保MAb302安全和有效的重要因素。生产者设计了MAb302与参比生物制剂高度相似的二级和三级结构，是通过分子设计保障所需活性和功能的体现。而与安全性密切相

36、关的稳定性表现上，MAb302需要加热到72以上才开始明显地去折叠，完全去折叠需要80以上的高温，足以保证其在正确的储藏温度下蛋白高级结构的稳定性。抗HER2单克隆抗体的体外功能活性主要表现为对BT-474细胞的增殖抑制作用和介导ADCC效应。与同样以HER2为靶标的参比生物制剂相比，MAb302在此两种活性上与其没有显著差异。这可能来自于MAb302具有与参比生物制剂相似的与HER2抗原的结合能力和亲和力，与Fc受体一致的亲和力，也与两者相似的糖基化特征相关。糖基化的设计对单抗的功能活性、体内半衰期有着至关重要的影响作用13。没有糖基化修饰的单抗蛋白，是不存在ADCC活性，也不能够与Fc受体

37、结合的14,15。MAb302>99%的分子都是具有正确位点的糖基化修饰的，这是保障其具有针对肿瘤细胞的功能活性的先决条件。而与参比生物制剂高度相似的主要糖型和含量，是两者有效性可比的重要依据。对特殊类型的N-寡糖分析结果显示，MAb302的高甘露糖含量较参比生物制剂低而唾液酸含量较参比生物制剂高，这可能揭示了MAb302具有更长的半衰期，因为高甘露糖的存在会引起甘露糖受体16对血清中单抗这类糖蛋白的清除，而唾液酸的含量高17会增加血清半衰期。另外，在另一个与半衰期相关的受体FcRn18的结合能力上，两者的亲和力具有一致水平。通过对关键质量属性的分析研究，表明MAb302作为一个以HER

38、2为靶点的人源化单克隆抗体靶向生物制剂，其精心设计的分子结构和通过工艺设计有效控制的高纯度，能够使其表现出与参比制剂相同的生物等效功能作用，即通过抑制乳腺癌细胞的生长和引起免疫系统对靶细胞的攻击达到治疗疗效，而且也在免疫原性和稳定性上都表现出低风险，具备良好的安全性和有效性。REFERENCES1 ZHENG S, BAI J Q, LI J et al. The pathologic characteristics of breast cancer in China and its shift during 1999-2008: a national-wide multicenter cro

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47、rmaceutical Sciences, 2009,98(10): 3499350818 ROOPENIAN D C, AKILESH S. FcRn: the neonatal Fc receptor comesof age. Nat Rev Immunol. 2007,7(9):71525表1 MAb302的还原CE-SDS纯度和杂质分析结果Tab.1 The results of reduced CE-SDS purity and impurities analysis of MAb302 Test 1Test 2Test 3Test 4Test 5Test 6NGHC %Lot10.

48、840.850.860.840.850.85Lot20.700.730.750.720.730.74Lot30.820.820.840.820.830.84Sum of HC and LC%Lot197.397.297.397.397.297.3Lot297.897.797.697.897.697.6Lot397.497.397.497.597.597.3表2 MAb302的单体纯度和聚体含量、分子量分析结果Tab.2 The results of monomer and polymer as well as Mw analysis of MAb302Test 1Test 2Test 3Tes

49、t 4Test 5Test 6Polymer%Mw/DaLot305754Lot324169Lot353645Monomer%Mw/DaLot198.998.798.698.798.898.8162886Lot299.199.299.2162131Lot398.898.598.498.498.498.7161709表3 MAb 302与参比生物制剂的Tm值Tab.3 The Tm values of MAb302 and the reference prod

50、uctTm1 Tm2 MAb 302 Lot172.6285.05MAb 302 Lot272.7685.19MAb 302 Lot372.5885.01Reference Lot172.5284.95Reference Lot271.7485.54Reference Lot372.4884.90表4 MAb 302与参比生物制剂的糖基化分析结果Tab.4 The N-glycan profiling of MAb302 and the reference productHigh mannose%Defucosylated%Galactosylated%Sialylated%MAb 302 Lot13.399.3943.412.27MAb 302 Lot23.127.5750.632.38MAb 302 Lot34.389.2747.013.56Reference Lot16.2114.0850.7