973标书黄芪对腹膜透析效能及腹膜间皮细胞与腹腔免

1、百度文库 - 让每个人公平地提升自我登记序号：方案类别：分类代码：项目编号：科技项目方案设计任务书项目名称：黄芪对腹膜透析效能及腹膜间皮细胞与腹腔免疫功能的影响担当单位：单位地址：邮编：项目负责人：电话： 职务职称：主管部门：南京市卫生局填报日期： 2002 年 04 月 26 日江苏省科学技术厅二 oo 一年制14一、立项依据：1、国内外争辩现状、进展趋势及理论实践依据：随着腹膜透析（peritoneal dialysis，pd）技术的不断提高和透析理论的日趋完善，尤其是 1976 年 popovich 提出的连续非卧床腹膜透析（continuous ambulatory peritonea

2、l dialysis，capd）治疗方法带来了腹膜透析的空前富强。近年来的流行病学资料表明接受腹膜透析治疗的终末期肾功能不全（end-stage renal disease，esrd）患者正以每年%的比例快速增长，目前全球已有超过 120000的患者在接受腹膜透析治疗。腹膜透析因其相对于血液透析更高的生活质量、显 著的残余肾功能爱护、优于或等于血液透析的生存率以及较少的资金花费，故有 作者提出，腹膜透析应当是肾脏替代疗法的首选1,2。然而，随着腹膜透析患者寿命的延长，腹膜透析的远期并发症腹膜功能衰竭 已成为 esrd 患者透析技术性失败的最重要的缘由3，并成为制约腹膜透析进展的“瓶颈”。 资料

3、显示约 1/3 的腹膜透析患者 6 年后因腹膜功能衰竭而退出透析治疗。腹膜功能衰竭与长期腹膜透析后腹膜结构和功能破坏进而导致腹膜超滤失 败以及溶质转运功能障碍亲热相关4。腹膜透析液的生物不相容性是导致腹膜功 能衰竭的首要缘由，腹膜间皮细胞作为腹膜组成部分在这一过程中扮演着重要角 色。近年来随着人腹膜间皮细胞标准培育方法和腹膜透析动物模型的确立，腹膜 功能衰竭的机理得以初步阐明。腹膜间皮细胞在长期非生理性透析液刺激下，转 移生长因子（tgf-）mrna 过度表达，tgf-作为细胞增殖与细胞外基质合成的重要调整因子，导致细胞外基质合成增加和腹膜纤维化5，最终导致腹膜超 滤失败和溶质转运功能障碍。同

4、时 tgf-也是调整细胞凋亡的重要细胞因子， 组织病理学证明腹膜功能衰竭的重要特征表现为腹膜间皮细胞的丢失，过多的tgf-表达将增加间皮细胞的凋亡，导致间皮细胞的完整性受到破坏，争辩表明 完整的间皮细胞层可以显著延缓腹膜纤维化的进程。其次，腹膜透析的主要并发 症腹膜感染也是导致腹膜功能衰竭的重要缘由,反复的炎症刺激使腹膜局部高水 平 tgf-持续存在致使腹膜发生纤维化和硬化6。目前公认长期腹膜透析时腹腔细胞免疫功能抑制是导致腹膜反复感染的主要缘由,尤其是被认为是腹腔细胞免 疫功能最重要组成部分和腹膜抵制细菌感染第一道屏障的巨噬细胞功能的明显 抑制。争辩表明，腹膜在长期非生理性透析液的刺激下，巨

5、噬细胞功能受到抑制， 当腹膜发生感染时透析患者腹腔巨噬细胞功能指标包括吞噬指数、白细胞介素 1（il-1）和肿瘤坏死因子（tnf-）水平显著降低，假如改用更符合生理条件的透析液则可以使腹腔巨噬细胞功能得到明显增加，从而增加腹膜对感染的抵制 力量，削减腹膜炎的发生7。最近，腹膜血管在腹膜功能衰竭中的作用也得到重视，充分的血流除了能有效增加腹膜的抵制力削减腹膜炎的发生外8，也是维持长期腹膜透析患者腹膜转运功能的重要因素。腹膜血管血流量削减时腹膜溶质转运和腹膜超滤率均显著下降9，争辩显示长期腹膜透析患者腹膜血管内皮细胞依靠的血管舒张因子显著削减，从而影响腹膜透析的效能，而如在腹膜透析液中添 加扩血管

6、物质硝普纳则能有效提高腹膜透析患者的透析效果。基于上述争辩结果，近年来临床医师始终致力于两方面的争辩。一是争辩更符合生理条件以及不影响腹膜免疫功能的全新的腹膜透析液。虽然已有诸如含多聚糖、含氨基酸、含碳酸氢根等多种透析液的体外试验的报道，但事实上全部这些透析液并不能完全替代葡萄糖作为渗透性物质的作用，其临床应用前景尚不明确。另一方面，肾脏病医师通过在现有的透析液中添加一些物质来达到爱护和改善腹膜功能的目的。有争辩表明在透析液中加入双嘧莫达能显著降低小鼠腹透液中 tgf-的含量，而加入透亮质酸可以在爱护腹膜间皮细胞方面起到肯定的效果。中药黄芪是一种含有多糖、甙、黄酮和微量元素等多种成分的物质，其

7、具有多重药理作用10。黄芪能显著抑制炎症因子 tgf-的表达，从而延缓肝脏、肾脏等多种脏器疾病时发生纤维化的进程；能明显减缓人胚二倍体细胞自然年轻过 程延长细胞寿命约 1/3 左右11；能有效地调整细胞免疫功能，通过向小鼠腹腔注射黄芪可以发觉腹腔巨噬细胞吞噬功能得到增加，从而增加腹膜抗菌力量；黄芪 还具有扩血管的作用，争辩显示其能显著抑制血管收缩物质内皮素的释放，从而 可能起到扩张血管增加血流量的作用12。依据黄芪的上述作用，可以推想，在腹膜透析液中加入黄芪可以起到延长腹膜间皮细胞的寿命、抑制间皮细胞 tgf- 的分泌、提高腹腔巨噬细胞功能、改善局部微循环，从而阻挡/延缓腹膜纤维化 和防止腹膜

8、感染的发生，达到阻挡/延缓腹膜功能衰竭的目的。然而关于黄芪在 腹膜透析中的应用尚无相关报道。主要参考文献：1. thodis e, passadakis p, vargemezis v, oreopoulosdialysis: better than, equal to, or worse than hemodialysis? data worth knowing before choosing a dialysis modality. perit dial int ,2001; 21:25-35.2. van biesen w,vanholder r, lameirerole of peri

9、toneal dialysis as the first-line renal replacementdial int , 2000;20: 375 - 3833. an s. de vriese, siska mortier, norbert h,ethappens to the peritoneal membrane in long-term peritoneal dialysis? perit dial int, 2001;vol. 21 ;:s9-284. devuyst o,topley n,williamsand functional changes in the dialysed

10、 peritoneal cavity:impact of more biocompatibledial transplant,2002;17(3):12-5gc,schiemann wp,lodishrole of transforeing growth factor beta in humanengl j med ,2000;342:1350-86lin cy,chen wp,yang ly,ettransforming growth factor-betal 1 expression may ptedict peritoneal fibrosis in capd patients with

11、 frequent peritonitisj nephrol,1998;18:513-9s,holmes cj,mackenzie rk, dialysis with bicarbonate/lactate-buffered peritoneal dialysis fluids in a long-term improvement in ex vivo peritoneal macrophagea soc nephrol,2002;13:s97-1038parkincreasing severnity of peritonitis in long-term peritoneal dialysi

12、sren replace ther，1998；5：185-93c,brendolan a,crepaldi c,etand clearence studies in human isolated pertoneal vascularpurif,1994;12:233-4210. 耿长山。黄芪的免疫药理争辩进展。中西医结合杂志，1986；6：62-6411. 孟庆云。中国中医药进展 50 年。p28012. 伍敦裕，林海玲。黄芪注射液治疗慢性肾功能不全患者血浆内皮素变化及其意义。有用医学杂志，1998；14：6112、争辩目的与意义： 争辩目的：通过体外人腹膜间皮细胞培育观看中药黄芪在抑制由高糖

13、引起的 tgf-过度表达中的作用，通过动物试验从组织病理学角度观看黄芪对腹膜间皮细胞完整性的维护和腹膜纤维化的抑制以及巨噬细胞功能调整等方面的作用，通过临床观看了解黄芪对腹膜转运功能和免疫功能的影响，从不同层面了解黄芪在阻挡/延缓腹膜功能衰竭中的作用及其机制，为临床上改善长期腹膜透析患者透析疗效供应一种新的治疗方法。争辩意义：随着临床腹膜透析的广泛应用以及腹膜透析患者寿命的延长，临床上因长期腹膜透析导致腹膜功能衰竭进而透析失败的患者越来越多。中药黄芪在我国分布广泛且有 2000 多年的应用历史。目前临床上已有黄芪注射液制剂，并且由于黄芪可以直接注入腹腔，因此通过从不同层面了解黄芪在阻挡/延缓腹

14、膜功能衰竭中的作用及其机制的争辩，在临床上推广使用黄芪来阻挡/延缓腹膜功能衰竭从而延长 esrd 患者腹膜透析时间、提高透析质量、削减透析失败率，提高腹膜透析远期疗效具有广泛的应用前景。3、技术查新：参见附页。二、争辩内容：争辩内容：本课题接受体外细胞培育、动物试验、组织病理学与临床相结合的系统争辩方法，从多个方面争辩中药黄芪在防止/延缓腹膜功能衰竭中的作用，并从不同层面和角度解释其作用机理。通过体外人腹膜间皮细胞培育了解黄芪在抑制间皮细胞 tgf-表达方面的作用；通过动物试验从组织病理学的角度直观了解黄芪在间皮细胞爱护以及在阻挡/延缓腹膜纤维化中的作用；通过临床应用，了解黄芪对腹膜转运功能以

15、及免疫功能方面的影响。关键技术和技术难点：（1） 体外人腹膜间皮细胞培育及干预方法的建立；（2） 动物腹膜透析模型及干预方法的建立；（3） tgf-、tnf-免疫组化检测；（4） 巨噬细胞吞噬功能的诱导及检测；（5） 标准腹膜透析腹膜转运功能转变的争辩。课题的特色和创新之处：（1） 腹膜功能衰竭是一多因素参与的病理过程，由于西药作用较为单一，因此在如何有效阻挡/延缓腹膜功能衰竭的争辩中显得较为局限，而中药黄芪具有多重药理作用，在阻挡/延缓腹膜功能衰竭的争辩中具有较大的优势。（2） 由于部分药物无法进行腹腔内应用，因此以往的争辩大多停留在体外试验的水平，而黄芪可以平安地应用于腹腔内注射，本课题的

16、争辩成果能够直接应用于临床。（3） 通过从体外细胞培育、动物试验、组织病理学以及临床全面地对黄芪在阻挡/延缓腹膜功能衰竭中的作用及机制进行争辩，至今尚未见类似的争辩报道。主要技术指标：（1） 黄芪抑制间皮细胞tgf-分泌的指标；（2） 反映巨噬细胞免疫功能的tnf-分泌水平以及吞噬功能的指标；（3） 黄芪对腹膜间皮细胞的维护和抑制纤维化的指标；（3）黄芪对腹膜转运功能的影响。三、争辩方法及技术路线：争辩工作总体思路：本争辩首先通过人腹膜间皮细胞体外培育的方法在培育基中添加黄芪观看 其抑制由高糖引起的间皮细胞 tgf-过度表达中的作用，了解黄芪与腹膜间皮细胞 tgf-表达之间的关系。然后通过腹膜

17、透析动物模型从组织病理学角度直观了解黄芪对腹膜间皮细胞损伤的爱护以及抑制腹膜纤维化方面的作用。最终通过在临床上的应用了解黄芪对腹膜转运功能以及腹膜免疫功能的影响，并探讨其作用机制。从而为临床上阻挡/延缓长期腹膜透析患者因腹膜纤维化、腹膜反复感染导致的腹膜功能衰竭供应新的治疗方法。技术路线：（1） 体外细胞培育部分： 从择期手术小网膜切除的标本获得人网膜组织，依据文献方法培育间皮细胞，通过调整原代（1-9 代）人腹膜间皮细胞培育液中葡萄糖浓度，在%、%葡萄糖条件下观看添加与不添加黄芪对腹膜间皮细胞 tgf- 表达的影响，tgf-用免疫组化方法检测。（2） 动物模型部分： 依据标准腹膜透析小鼠动物

18、模型建立方法建立小鼠腹膜透析模型，分别接受添加和不添加黄芪的葡萄糖浓度为%、%的透析液进行腹膜透析， 8 周后取小鼠腹膜组织，10%甲醛溶液固定、脱水、 石蜡包埋后 he、pas、pasm 染色，在光学显微镜下进行病理组织学检查。（3） 临床部分： 在临床上选择长期腹膜透析患者，接受自身对比的方法观看添加黄芪前后患者腹膜转运功能和患者透析液中 tnf-浓度以及巨噬细胞吞噬功能的变化。（4） 总结资料，分析结果。争辩方法：（1） 组织细胞培育方法。（2） 动物试验学争辩方法。（3） 组织病理学方法。（4） 生化分析方法。四、现有争辩条件和工作基础：1、现有工作基础：-临床上有大量的长期腹膜透析的

19、随访病人。争辩者已成功把握了人腹膜间皮细胞培育方法和腹膜透析小鼠动物模型建立方法，具备了 tgf-、tnf- 的检测力量，以及本争辩所需的组织病理学检查条件。同时在预试验中已经得出黄芪能有效抑制体外培育人腹膜间皮细胞 tgf-的表达。因此，本争辩具有很强的可行性和较高的成功率。2、项目负责人近年来争辩成果简介近年发表相关论文： 近年争辩成果：3、争辩队伍：4、支撑条件：五、方案进度：1、总进度和年度进度：课题预备，订购动物与试剂。细胞培育争辩部分。动物试验部分。临床部分。总结资料，分析结果，科研鉴定。2、项目完成形式：（1） 项目完成可通过论文形式考察，估量可在核心期刊发表论文4-6 篇。（2

20、） 细胞培育争辩部分通过对 tgf-表达的检测可以了解高糖在腹膜间皮细胞 tgf-表达中作用，了解黄芪在拮抗tgf-过度表达中的作用。（3） 动物试验部分通过腹膜组织病理学检查了解黄芪对腹膜间皮细胞损伤的爱护以及抑制腹膜纤维化方面的作用，可通过病理切片形式表达。（4） 临床争辩部分可通过治疗前后患者tgf-、tnf-水平以及巨噬细胞吞噬功能了解腹膜功能的转变，用差异性来表示。（5） 通过成果考核。（6） 成果可达到国际先进水平。六、项目争辩预期成果及效益：预期达到的主要技术指标：（1） 黄芪有效抑制体外培育人腹膜间皮细胞的tgf-的分泌。（2） 应用黄芪后在腹膜透析动物模型腹膜组织病理检查中发觉黄芪能维护腹膜间皮细胞的完整性和抑制腹膜纤维化的发生。（3） 黄芪能改善腹膜透析病人的腹膜转运功能和增加巨噬细胞的免疫功能。（4） 该争辩成果预期达到国际领先水平，为临床上阻挡/延缓腹膜功能衰竭提 供新的治疗方法。经济效益和社会效益：通过本课题的系列争辩，预期可以明确黄芪有效阻挡/延缓长期腹膜透析病 人腹膜功能衰竭的进程，从而延长腹膜透析时间、提高腹膜透析质量。从经济效 益来讲，腹膜透析是一种价格低廉的肾脏替代疗法，长期的腹膜透析必将大大减 轻社会及其个人的经济负担。从社会效益来讲，腹膜