20156340023-15食品-臧敏

1、潍坊医学院实验报告科目食品理化检验班级： 2015 级食品班组别： 5 姓名： 臧敏学号： 20156340023 试验项目：克伦特罗检测（elisa检测法）日期： 2018.04.23 一、实验目的：1、掌握 elisa法检测瘦肉精的原理2、掌握快速检测的基本程序及操作，具有独立进行快速检测的基本技能。二、实验原理：间接竞争 elisa方法1、在酶标板孔条上预包被克伦特罗抗原，2、 加入抗克伦特罗抗体， 样本残留的克伦特罗和微孔条上预包被的抗原竞争抗克伦特罗抗体，3、加入酶标二抗后，用tmb 底物（标记物为辣根过氧化物酶）显色。4、样本吸光值与其残留物克伦特罗呈负相关，与标准曲线比较再乘以其

2、相对应的稀释倍数，即可得出样品中克伦特罗的含量。三、实验主要仪器设备：克伦特罗 elisa检测试剂盒（深圳市绿诗源生物技术有限公司）、微孔板酶标仪450/630nm、电子称（ 0.01g）、漩涡混合振荡器、离心机（15ml管和 1.5ml ep 管）、恒温培养箱四、实验步骤：1、样品前处理组织用剪刀剪碎，研钵内研成匀浆，取2g 肉/ 肝脏匀浆放入 15ml 离心管中 加入 6ml 去离子水，充分震荡2min，室温 4000r/min 以上离心 10 分钟，（注若组织样本中油脂含量较高，可在振荡后放入85水浴 10min 后再离心。） 取 20ul 上层液进行分析，样本稀释4 倍。 2 、分析微

3、孔板编号， 如 1-12 号标准品，13/14 号样品等 (每样品或标准品均做平行对照即各2 孔) 加标准品 / 样品：微孔中加入 20ul 样品或标准品 +50ul 克伦特罗酶标物 +80ul 克伦特罗抗试剂，轻轻振荡混匀，盖板膜盖板后，25避光 30min 洗板：孔内液体甩干，用去离子水液300ul/ 孔，充分洗涤 5 次，每次间隔 30s，用吸水纸拍干（若有未拍干的气泡用枪头戳破）显色： 每孔加入 50ul 底物 a+50ul 底物 b， 轻轻振荡混匀，盖板膜盖板后，25避光 15-20min（蓝色）测定：加入 50ul 终止液（黄色），轻轻振荡混匀。酶标仪450nm/630nm 双波长

4、检测 od值（可在加入终止液前目测含五、实验结果及计算：1. 原始数据：a b c d e f 样品 1 样品 2 浓度值0 0.1 0.3 0.9 2.7 8.1 吸光度值 1 2.790 1.250 1.037 0.675 0.354 0.196 2.692 1.489 吸光度值 2 2.577 1.356 1.156 0.874 0.361 0.209 2.278 1.434 平均值2.6835 1.3030 1.0965 0.7745 0.3575 0.2025 2.4850 1.4615 吸光度值百分比（% ）48.56% 40.86% 28.86% 13.32% 7.55% 92.

5、60% 54.46% 2. 标准曲线y = -12.53ln(x) + 26.359r2 = 0.99450510152025303540450.250.5124吸光度值百分比（%）浓度值的半对数克伦特罗吸光度值百分比吸光度值百分比对数(吸光度值百分比 )3. 样品浓度值计算计算过程：样品 1：c=exp(26.359-92.6)/12.53)*4=0.005059*4=0.0202ppb 样品 2：c=exp(26.359-52.46)/12.56)*4=0.125167*4=0.5007ppb六、讨论1、检测结果本组样品 1 为猪肉，样品 2 为猪肝，其克伦特罗含量分别为0.0202ppb

6、、0.5007ppb，根据猪肉中克伦特罗标准 : 加拿大和 who 是 40ppb,而联合国粮农组织则是10ppb。中国、日本和新西兰规定该国生产不许使用，但进口猪肉中则允许有小于10ppb 的残留。此次试验猪肉和猪肝为非进口产品，所以其克伦特罗含量均超标。2、分析讨论1）、实验操作过程中标枪使用不够规范，试剂可能有轻微污染2）、试剂反应过程中由于同学无意的行为导致实验试剂之间可能相互污染影响实验结果3）、试剂反应时间以及洗涤时间过短，反应及洗涤不完全也会影响结果七、注意事项1. 试剂使用前要回复到室温否则影响结果（室温放置30min 以上）2. 洗版拍干后要立即进行下一步否则影响结果3. 每加一种试剂前需轻