不同产地粉葛四种异黄酮含量比较

1、不同产地粉葛四种异黄酮含量比较粉葛为豆科植物甘葛藤 Pueraria thomsonii Benth 的干燥 根，载于中国药典 1 ，具有解肌退热、生津止渴的功效、 临床主要用于外感发热头痛、项背强痛、口渴等症状。粉葛的主 要化学活性成分有葛根素、 3'- 甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷 元等异黄酮类化合物 2 ，具有降血压、降血糖、保护肝脏、治 疗颈椎病等作用 3-4 ；同时粉葛富含淀粉，因此具有较高的医 用和食用价值。 近年来， 文献报道对粉葛异黄酮多指标成分的含 量测定 5-8 ，但是随着粉葛栽培面积的不断扩大，出现了许多 栽培品种，因此不同产地药材之间的有效成分含量存在着一定的

2、差异，进而影响了药材的质量。 研究采用高效液相色谱法同时对 广东、广西、安徽粉葛中四种异黄酮成分的含量，为粉葛药材质 量控制提供方法和依据。1 仪器与试药1.1 仪器 Waters2695 高效液相色谱系统 （2998 型二极管阵 列检测器）；KQ3200D型数控超声波清洗器（昆山市超市仪器 XX公司）；Thermo超纯水设备；电子分析天平（梅特勒 -托利多 仪器上海XX公司）；FW135中草药粉碎机（天津市泰勒特仪器 XX公司）。JP+21.2 药品与试剂 3'- 甲氧基葛根素对照品（批号： 141217，成都普菲德生物技术 XX公司）；葛根素对照品（批号：10752-201313

3、）、大豆苷对照品（批号： 111738-201302）、大 豆苷元（批号： 111502-200402 ）均购自中国食品药品检定研究 院；粉葛（批号：150420,安徽本草国药饮片 XX公司；批号： 150302，安徽省金芙蓉中药饮片 XX公司；批号：1504005,江西 樟树天齐堂中药饮片 XX公司）；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试 剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 对照品溶液的制备 精密称取各对照品适量,分别用甲 醇制成每毫升中含有葛根素 0.062 mg、 3'- 甲氧基葛根素 0.0076 mg 大豆苷0.012 mg、大豆苷元 0.0164 mg即可。2.2 供试品溶液的制备

4、取不同产地的粉葛粉末 （过三号筛） 约 1.0 g ,精密称定,分别置于具塞锥形瓶中,精密加入 30%乙 醇 100 ml ,称定重量,超声提取 30 min ,放冷,再称定重量,用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45卩m 微孔滤膜,即得。2.3 色谱条件 色谱柱Hypersil C18 色谱柱（4.6 mmx 250 mm 5 a m）；检测波长：250 nm 柱温：30 °C；流速：1.0 ml/min ； 进样量：10 a l ;梯度洗脱条件见表1。色谱见图1。2.4 方法学考察2.4.1 线性范围考察 分别精密吸取上述对照品溶液 0.2、0.5、1、2、

5、5、10 ml，置于10 ml容量瓶内，以甲醇定容至刻度，摇匀，0.45 a m微孔滤膜滤过。分别按“ 2.3 ”项下条件测 定，以峰面积（A）为纵坐标，进样量为横坐标（X, ng）绘制标 准曲线，得到葛根素、 3'- 甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的 回归方程，见表 2。2.4.2 精密度试验 取混合对照品溶液， 按“2.3 ”项色谱条 件重复测定 6 次，测得葛根素、 3'- 甲氧基葛根素、大豆苷、大 豆苷元的峰面积 RSD分别为0.52%、1.36%、1.00%、0.35%,结 果表明仪器精密度良好。2.4.3 重复性试验 取同一来源的粉葛 6份,分别按“2.2” 项下制

6、备供试品溶液,按“ 2.3”项下色谱条件进行测定,记录 峰面积,计算葛根素、 3'- 甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的平均含量分别为 0.29%、0.04%、0.04%、0.03%, RSD分别为 1.61%、 1.98%、 1.50%、 1.62%。结果表明本方法重复性良好。2.4.4 稳定性试验 取同一来源的供试品溶液, 按“2.3”项 下的色谱条件，分别用于 0、2、4、6、8 12 h进样10卩L分 别测定葛根素、 3'- 甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的峰面积, RSD分别为1.02%、1.98%、1.15%、1.54%，结果表明供试品溶液 在 12 h 内稳定性良好

7、。2.4.5 加样回收率试验 精密称取同一粉葛根粉末约 0.5 g ,置于锥形瓶中,精密加入适当量的对照品溶液,按“ 2.2”项下 制备供试品溶液, 平行制备 6份。按“2.3”项下色谱条件测定, 计算平均回收率和 RSD葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、 大豆苷元的平均回收率分别为101.1%、 99.86%、 101.78%、103.39%, RSD分别为 1.43%、1.29%、0.95%、1.21%。结果表明 该方法准确可靠。 JP2.5 样品含量测定 取不同产地的粉葛， 分别按“ 2.2 ”项下 方法制备供试品溶液，按“ 2.3”项下色谱条件测定，记录各个 成分的峰面积， 以外标法计算样品中各成分的含量， 结果见表 33 讨论 不同产地粉葛药材中四种异黄酮类成分含量比较，葛根素： 广东安徽广西； 3-甲氧基葛根素：安徽 广东广西；大豆苷： 广东 安徽或广西；大豆苷元：广东 广西安徽；不同产地之间 含量相差较大的是 3'- 甲氧基葛根素，