薄层层析方法与注意问题

1、薄层层析薄层层析是将作为固定相的支持剂均匀地铺在支持板（一般是玻璃板）上，成 为薄层，把样品点到薄层上，用适宜的溶剂展开，从而使样品各组分达到分离的 层析技术。如果支持剂是吸附剂，如硅胶、氧化铝、聚酰胺等，则称之为薄层吸 附层析；如果支持剂是纤维素、硅藻土等，层析吋的主要依据是分配系数的不同, 则称之为薄层分配层析；同理，如果支持剂是离子交换剂，则称为薄层离子交换 层析；薄层若由凝胶过滤剂制成，则称为薄层凝胶层析。薄层层析的操作与纸层析相似，但比纸层析速度快，一般仅需15-30min, 分辨力比纸层析高10-100倍，它既能分离0.01 u g的微量样品，又能分离500mg 基至更多的样品作制

2、备用。薄层的制备可规格化，样品滴加后可立即展开，不受 温度影响。其缺点是rf值的重现性比纸层析差，对生物大分子物质的分离效果 不大理想。一、支持剂的选择与处理薄层层析的支持剂种类很多。使用时应根据欲分离物质的种类进行选择。支持剂颗粒大小要适当。颗粒大，展开速度快。但颗粒过大时，分离效果不 好；而颗粒过小，则展开速度太慢，容易出现拖尾现象。一般有机类支持剂如纤 维索粉的颗料为70140目（直径0.10.2mm）,薄层厚度为l-2mm；无机类支持剂 如氧化铝、硅胶等的颗粒一般为150-300 口，薄层厚度为0.25-lmmo在薄层层析中，使用较多的是硅胶、氧化铝等吸附剂，其处理方法同吸附柱 层析。

3、同样，用离子交换剂，凝胶过滤剂等为支持剂时，支持剂均耍按柱层析处 理填料的相应方法处理。二、薄层板的制作支持板要表面平整、光滑，用前应洗净、干燥。常用的薄层板有硬板（湿板）与软板（干板）z分。在支持剂中加入粘合剂（锻石 膏、淀粉、竣甲基纤维索钠盐等），调成糊状物所制成的薄层板为硬板，用粉状 支持剂直接制成的薄层板为软板。硬板粘牢在支持板上，调成糊状物喷显色剂吋 不会冲散，可以直立展开，而软板只能接近水平展开。薄层板常用的制作方法有：1. 浸涂法：将玻璃板在调好的支持剂浆液中浸一下，使浆液在玻璃板上形成 薄层。2. 喷涂法：用喷雾器将调好的浆液喷在玻璃板上，形成薄层。3. 倾斜涂布法：将调好的支

4、持剂浆液倒在玻璃板上，然后将玻璃板前后左右 倾斜，使支持剂漫布丁整块玻璃板上而形成薄层。4. 推铺法：在一根玻璃棒的两端适当距离处分别绕几圈胶布条，胶布条的圈 数视所需薄层厚度而定，然后把准备好的支持剂倒在玻璃板上，用玻璃棒压在玻 璃板上，将支持剂均衡地向一个方面推动，而制成薄层。推铺法既适用于干板的涂布和湿板制作。其他方法只能用于湿板制作。湿板制 作屮的一个重要环节是调浆，一般支持剂与蒸傭水或缓冲液之比一般为1 ：2至 1 ： 2.5 o调浆时要调和均匀，但不宜用力过猛，以免产生气泡而影响分离效果。薄层板涂好后，让其自然干燥后方能使用。若为吸附薄层层析，制好板后还 需加热活化，口的是使其减少

5、水分而具有一定有吸附能力。三、层析方法1 点样点样操作与纸上层析相似。点样前，先将制好的薄层修整一下，然后在距一 端2cm左右处划一原线，并每隔2cm左右划一原点。样品用合适的溶剂溶解， 吸附薄层层析一般用氯仿、乙醇等有机溶剂溶解，不宜用水溶解。点样可用微量 注射器，或微量吸管、毛细管。点样量一般在50ug之内，点样体积不宜超过 20ulo样品液可直接点在薄层板的原点上。也可点在圆形滤纸片上（直径 2-3mm）,再把滤纸片小心地放在薄层板原点上，并加少许可溶性淀粉糊，使滤 纸片粘牢在薄层板上。2. 展开展式方式与纸层析一样，冇上行法、下行法等，但软板薄层只能近水平展开（与 水平成10o-20o

6、）o吸附薄层层析所用展开剂主要是低沸点的冇机溶剂，一般采用2-3种组分的多元 溶剂系统。展开剂的选择是根据被分离物极性、溶剂的极性以及支持剂的特性 三方面来考虑。分配薄层层析展开剂的选择与纸上层析相似。离子交换薄层层析、 凝胶过滤薄层层析展开剂的选择则与相应柱层析的洗脱剂的选择相同。3. 显色薄层层析展开后，如果样品木身有颜色，就可直接看到斑点所在位置。若是 无色物质，则需加以显色。显色方法与纸层析一样，可用显色剂显色，也可用 紫外光显色。此外，如呆薄层板是由无机物质制成的，述可以用强腐蚀性的显色 剂，如硫酸、硝酸、珞酸或它们的混合物，这些强酸几乎可以使所有有机化合物 变为碳，而成黑色斑点，但不能用于定量分析。4. 定性与定量分析薄层层析法与纸层析一样，用rf值来表示被分离物质在薄层上的位置，与已 知标准物质的rf对照，可进行定性分析。定量分析时，可把斑点所在位置的支持剂连同物质一起刮厂