实验二经口急性毒性试验

1、毒理学实验二 经口急性毒性试验1、掌握实验动物分组方法2、测定ld50的试验设计原则3、小鼠的经口灌胃技术二、试剂和材料1、实验动物：(1) 动物品种：健康成年icr小鼠，体重22g(2) 样品来源：首都医科大学实验动物部2、器材：注射器(lml).灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物 秤。3、试剂：敌敌畏(1400mg/ml)、苦味酸染液(标记用)。三、实验内容1、健康实验动物的选择和性别鉴定选择健康的雄性小鼠(健康标准：毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎，废弃。)肛门与生殖孔距离：大者为雄性，小者为雌性2、实验动物称重、编号和随机分组选择体重在18-22

2、 g的小鼠，采用随机分组的方法(动物按体重分为几个体重 段，再从每个体重段分岀各组动物)，每组10只小鼠，用黄色的苦味酸饱和液 标号1-9,10号小鼠不标记。3、受试化学物溶液的配制(1) 确定灌胃量：0.1ml/10g(2) 确定最高给药量，计算溶液浓度，估计给药总体积(3) 药品称量及稀释4、小鼠灌胃技术左手固定，右手持灌胃器，插入动物口腔，沿咽后壁徐徐插入食道，深度为 口腔至剑突的距离。5、毒性体征的观察和ld50计算(1)毒性体征的观察： 染毒后注意观察小鼠中毒的发牛、发展过程及死亡数和死亡时间 按表格记录动物体征及岀现吋间，记录死亡情况及吋间，观察期为30 min（2） ld50的计

3、算：a、实验各组剂量的确定：设5组，每组雌雄动物各10只。 剂量组距d为：_ lg厶dioo-lgld=组数_1 -d为相邻两个剂量组剂量对数之差 利用igldo依次加d,取反对数，即可得幽各组剂量。b、ld50的计算（见附件）:xk :最人剂量的对数d:相邻两组对数剂量之差数pi：各组死亡率i：组数c、求半数致死量的95%可信区间标准误公式：ni :实验动物数。95% 可信区间：lg ' (lg 厶d 50 ± 1 96 s lg ld 50 )四. 实验过程1、人员分工：本次实习同学分两个大组（a组和b组），分别在不同实验室。每大 组分5个小组，分别处理雌雄动物，每小组1

4、0只动物。集体活动：1、2、3、4、5组各1人，进行受试物配制。各小组活动:每小组1人 每小组1人 每小组1人 每小组1人（共4人）,（共4人）,（共4人）,（共4人）,进行动物标记。（140号）进行体重记录。（110号） 进行灌胃。（kl0号）根据体重吸取受试物（0.1ml/10g）五. 剂量设计及受试物配制表见附件六、实验结果1、急性经口毒性试验原始记录（见附件）2、ld50计算表（见附件）3、结果计算（按照ppt中所给的剂量设计及受试物配制表计算）lg l £)100 lg ldo组数-1=(lg500-lgl00)-?4= (0.6990-2) -4=0.1747sls

5、76; = dj 工号护=0.1747x0.62” =0-0316lg ld、o = xk-丄 d 工+ p, +1)(0.65+1)(0.2+0.65) +95%可信区间:=2.1747-1/2x ( (0+0.35) + (0.35+0.2) +=1.8777lg“(lg 厶 d50 ± 1.965 lg 厶 dq95%可信区间:lg'1 (1.8777±1.96x0.0316)即：65.433587.0162mg/kg七、实验结论与分析1、毒性物质敌敌畏为屮等毒性，体重在18-22g z间的雄性健康成年icr小鼠（来 源于首都科大学实验动物部）经口急性染毒的ld50为65.433587.0162mg/kg。2、毒性特征：小鼠在经口染毒后短时间内出现抽搐，躁动不安，麻痹，肌张力 松弛，反应减弱，同时伴有呼吸加快，口吐白沫，鼻孔溢液，尿失禁，腹泻等症 状，然后在10分钟左右死亡。3、本组小鼠为径口染毒的最低剂量，没有出现死亡小鼠，观察过程中，6号小 鼠出现亢奋，8号小鼠