液相色谱应用教程实用教案

1、会计学1液相色谱应用液相色谱应用(yngyng)教程教程第一页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接常见的液相色谱仪问题(wnt)色谱峰加宽分辨率低裂峰柱压比预期值高第1页/共44页第二页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用正确连接液相色谱仪系统可使用户受益，原因如下： 相对比较便宜不需要花费大量的时间系统中大多数流体连接均易于检修通常(tngchng)有助于避免不必要的硬件替换接头对正确连接至关重要，因此知道接头的一些基本特点也很重要。液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接第2页/共44页第三页，共44页。液

2、 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接接头的普通特征螺纹（10-32， -28， M6x1）管道外径（1/16”、1/32”、1/8”）端口几何形状(xngzhun)（锥形、平底）管套直径接头(ji tu)要素第3页/共44页第四页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接套圈固定管道，并且始终(shzhng)以相同方式固定用力按入圆锥形端口，如下图所示套圈(to qun)锥度（或角度）端口锥度（或角度）接头要素第4页/共44页第五页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确液

3、相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接然后(rnhu)在套圈接触内套处压紧管壁。接头(ji tu)要素第5页/共44页第六页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接通用端口有以下特征：螺纹管道尺寸内部(nib)几何形状但并非所有的接头都是通用的!接头(ji tu)要素第6页/共44页第七页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接接头(ji tu)要素管套(un to)的深度并非通用!即使是最好的接头，如果不正确使用也会产生许多问题。为什么会出现问题？第7页/共44页第八页，共44

4、页。液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接接头(ji tu)要素以下示例解释了不匹配(ppi)的接头导致多种色谱法问题的原因：第8页/共44页第九页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用接头(ji tu)要素液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接连接出现泄漏后将会引发以下问题：系统压力损失注射假象（鬼峰） 出现混合(hnh)室（死体积）将会引发以下问题：色谱峰加宽分辨率减低显著残留裂峰引发色谱法问题的原因很多时，接头不匹配或使用不当将可能导致液相色谱仪的所有主要问题发生!第9页/共44页第十页，共44页。液 相 色 谱 仪

5、的 使 用接头(ji tu)要素液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接选择匹配的接头时，应首先清楚以下问题：使用的端口螺纹类型（例如， 10-32、 -28 等。）使用的端口几何尺寸 （例如，锥形或平底）所需连接的管道外径（例如， 1/16”， 1/8”）是否可以手动紧固(jn )连接接头应与哪些化学药品兼容接头应该承受多大压力第10页/共44页第十一页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用管道(gundo)要素液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接关于液相色谱仪中的管道(gundo)，以下三个要素必须考虑：管道(gundo)的正确型号管道(gundo)

6、的最有效尺寸切割管道(gundo)的合适工具如果想获取最好的色谱法效果，必须考虑这三个方面！第11页/共44页第十二页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用管道(gundo)要素液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接如果您想选择适合应用需要的管道类型，请考虑以下问题：管道在系统中的使用位置(wi zhi)哪种管道材料能够实现最好的兼容性产生多少压力可提供多种不同类型的管道高压管道：不锈钢、PEEK、Radel R、 PEEKsil等。低压管道: Teflon FEP、 Teflon PFA、Tefzel等。第12页/共44页第十三页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使

7、用管道(gundo)要素液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接选择合适的管道尺寸时，请考虑(kol)以下问题： 接受端口需要什么尺寸的管道？流速多少？管道将会产生多大压力？接头提供的管道尺寸是多少？请始终注意 -高压管道最常见的尺寸为：1/16” OD x .010” ID-低压管道最常见的尺寸为： 1/8” OD x 1/16” ID第13页/共44页第十四页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用管道(gundo)要素液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接第14页/共44页第十五页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用管道(gundo)要素液相色谱

8、仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接在具体应用中，仅仅选择合适的管道类型和正确的管道尺寸还远远不够，但是如果管道切割不当， 那么结果可能(knng)仍不理想。第15页/共44页第十六页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用管道(gundo)要素液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接正确的切割技术(jsh)确实能影响色谱法的质量 不正确切割 正确切割第16页/共44页第十七页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接储液器和泵之间的管道连接管道通常用Teflon材料制造，尺寸为1/8” OD x 1/16”

9、 ID。将管道连接至泵上的接头通常为-28螺纹，平底几何形状(xngzhun)。泵和检测器之间的管道连接管道通常用PEEK聚合体或不锈钢材料制造，尺寸为：1/16” OD x .010” ID 或稍小。将管道连接至系统部件上的接头通常为10-32 螺纹，锥形几何形状(xngzhun)。检测器之后的管道连接管道通常用Teflon材料制造，尺寸为1/16” OD选择正确接头(ji tu)和管道的一般准则第17页/共44页第十八页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接管道内径的公英制(yn zh)换算内径体积内径体积英寸mmuL/cm英寸m

10、muL/cm0.0050.130.130.030.754.560.0070.180.250.041.008.110.010.250.510.0461.2010.720.020.52.03第18页/共44页第十九页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接HPLC系统不同(b tn)部位的管道部位种类内径/mm长说明储液器泵聚四氟乙烯1.6随意能透氧泵进样器不锈钢管1.0随意进样器定量管不锈钢或PEEK视定量管体积而定进样器柱不锈钢管0.20.25尽量短柱检测器不锈钢或PEEK0.20.25尽量短检测器放空聚四氟乙烯或聚乙烯0.25随意需要

11、时加长到1米，增加流过池出口压力第19页/共44页第二十页，共44页。液 相 色 谱 仪 的 使 用液相色谱仪的正确液相色谱仪的正确(zhngqu)连接连接不同色谱(s p)柱的管道使用指南色谱柱/(1mL/min)不同内径(mm)管柱外峰宽效应5时最大长度/cm柱长(mm)内径(mm)填料粒度um塔板数0.18mm0.25mm0.5mm334.6344002298504.63667733148 1004.6313333672781504.65120001676882504.652000027811482502.0520000502082501.05200001288第20页/共44页第二十一

12、页，共44页。液 相 色 谱 分 析 分析型液相色谱定性及定量分析 a.灵敏度的要求(yoqi) b.样品的复杂性 c.样品量的要求(yoqi) d.精度及准确度的要求(yoqi) e.容易使用第21页/共44页第二十二页，共44页。液 相 色 谱 分 析 制备型液相色谱(s p)分离及纯化 a.化合物的稳定性 b.样品的复杂性 c.制备量的要求 d.纯度的要求及纯度的鉴定 e.方法的安全性第22页/共44页第二十三页，共44页。液 相 色 谱 分 析0.0100200300400510152025mVt0tR1tR2tR3tR4tR5Q：需要(xyo)什么样的分离结果？A：分辨率高。第23页

13、/共44页第二十四页，共44页。液 相 色 谱 分 析W1W2tR1tR2什么什么(shn me)是色谱的分辨率？是色谱的分辨率？分辨率R的公式(gngsh)：) 12(1221WWtRtRR第24页/共44页第二十五页，共44页。液 相 色 谱 分 析影响影响(yngxing)(yngxing)分辨率的因素：分辨率的因素：KK，a a，N N分辨率的方程(fngchng)：411NaaKKRK是容量因子，表达了样品与填料的作用强弱。a是选择性系数，描述(mio sh)两化合物分离的好坏程度， 是化学因素。N是理论塔板数，描述(mio sh)色谱峰的谱带展宽程度。第25页/共44页第二十六页，

14、共44页。液 相 色 谱 分 析V1Wh/2色谱色谱(s p)(s p)柱的柱效柱的柱效N N理论(lln)塔板数计算公式：2h/2Wt54. 5RN第26页/共44页第二十七页，共44页。液 相 色 谱 分 析提高提高(t go)柱效的方法柱效的方法色谱柱本身减小填料的颗粒度找到最佳的流速（根据不同的内径）合适的温度降低(jingd)溶剂的粘度增加柱长第27页/共44页第二十八页，共44页。液 相 色 谱 分 析其他影响其他影响(yngxing)柱效的因素柱效的因素柱外效应连接管路进样器检测器进样体积样品(yngpn)浓度第28页/共44页第二十九页，共44页。液 相 色 谱 分 析容量因子

15、容量因子K KK12345510152025510152025510152025K峰高R与峰高的关系(gun x) 与R的关系(gun x) 1/(KKR改变K值的方法(fngf)：调节流动相的极性、pH、离子强度等梯度淋洗k=(tR-t0)/ t0第29页/共44页第三十页，共44页。液 相 色 谱 分 析选择性系数选择性系数(xsh)a(xsh)a定义(dngy)：120102kkttttaRRa1时两组分(zfn)分不开，aaR1改变a的途径：改变流动相改变固定相改变温度改变样品的本身性质第30页/共44页第三十一页，共44页。液 相 色 谱 分 析a a、KK、N N 如何如何(rh)

16、(rh)控制分辨率控制分辨率 原始分离(fnl)状态改变(gibin) K 后改变 a 后改变 N 后第31页/共44页第三十二页，共44页。液 相 色 谱 分 析 分析方法建立(jinl)的实例等度分析等度分析色谱柱：色谱柱：C18C18，4mm4mm30mm30mm流动相：乙腈流动相：乙腈/ /水，不同的溶剂强度水，不同的溶剂强度(qingd)(qingd)，60/4060/40、50/5050/50、40/6040/60，由强渐弱，由强渐弱流速：流速：2ml/min2ml/min样品：样品： 对羟基苯甲酸甲酯对羟基苯甲酸甲酯(Methyl Paraben)(Methyl Paraben)

17、 对羟基苯甲酸丙酯对羟基苯甲酸丙酯(Propyl Paraben)(Propyl Paraben) 对羟基苯甲酸丁酯对羟基苯甲酸丁酯(Butyl Paraben)(Butyl Paraben)第32页/共44页第三十三页，共44页。液 相 色 谱 分 析 分析方法建立(jinl)的实例改变(gibin)容量因子 K第33页/共44页第三十四页，共44页。液 相 色 谱 分 析 分析方法建立(jinl)的实例改变(gibin)选择性 a通过改变流动相改变选择性同样强度的不同溶剂(rngj)改变色谱柱1231THF/H2O 28:722MeOH/H2O 58:423CH3CN/H2O 38:62第

18、34页/共44页第三十五页，共44页。液 相 色 谱 分 析 分析方法建立(jinl)的实例梯度方法(fngf)的建立梯度洗脱的特点优点单位时间的分离能力增加检测灵敏度提高缺点仪器设备要求高不适合某些检测方式(fngsh)柱需再生定量分析的重复性较低分析时间长第35页/共44页第三十六页，共44页。液 相 色 谱 分 析 分析方法建立(jinl)的实例梯度的洗脱(x tu)方式高压梯度(t d)及低压梯度(t d)溶剂 A溶剂 B泵 A泵 B混合器A 高压梯度溶剂 A泵溶剂 B比例阀（溶剂混合点）混合器B 低压梯度（溶剂混合点）第36页/共44页第三十七页，共44页。液 相 色 谱 分 析 分析方