流式细胞术检测1150例HLA―B27抗原临床价值探析

1、流式细胞术检测1150例hla-b27抗原临床价值探析【摘要】目的为了探讨hla-b27抗原检测的临床 价值。方法用流式细胞术检测本院及外院送检的1050例患 者及100例健康人群的外周血淋巴细胞hla-b27抗原，分析 其抗原表达情况与强直性脊柱炎(ankylosing spondyliti, as)的关系。结果1150例检测人群中疑诊as者582例，症 状不典型患者468例，健康体检者100例。在疑诊as者中 hla-b27阳性率313/582(53. 7%),临床最后确诊为as者288 例(占阳性的92.0%),症状不典型者中hla-b27阳性率 89/468 (19. 0%),临床最后

2、确诊为as者70例(占阳性的 78. 7%),健康体检者中hla-b27阳性率4/100 (4. 0%),且4 例均为同一家庭成员，临床无1例确诊为as。所有hla-b27 阴性患者中有12例最终为as者(占阴性的1.6%)。结论 hla-b27与as高度相关，对as的辅助诊断具有重要价值， 灵敏度为96. 8%,特异度为93. 5%,阳性预测值89. 0%,阴性 预测值98. 1%,采用流式细胞仪进行hla-b27的检测具有简 便、快速、易于标准化及质量控制、结果准确可靠等优点， 有利于临床推广应用。【关键词】强直性脊柱炎；hla-b27；流式细胞术doi： 10.3969/j. issn.

3、 1004-7484 (s) .2013. 08. 696 文 章编号：1004-7484 (2013) -08-4684-03人类白细胞抗原hla-b27与人类的免疫系统功能密切相 关，与多种疾病具有相关性，尤其是强直性脊柱炎 (ankylosing spondylitis, as) 1,是 as 的重要辅助诊 断依据，为了满足我市as患者的诊治需求，我院于2008年 开展了流式细胞术检测hla-b27抗原，现已完成1050例患 者及100例健康体检者的检测，现报告如下。1资料与方法1. 1研究对象1050例均来自2008年7月至2013年5 月我院及周边医院送检的住院或门诊患者，男性612

4、例，年 龄14岁-58岁，平均年龄22. 8岁，女性438例，年龄18岁 -62岁，平均年龄25.8岁，其中as患者582例，症状不典 型患者(如轻度腰背痛、手臂疼痛、关节疼痛、关节僵硬等) 468例，按1984年纽约修订的as诊断标准，最后明确诊断 as的有370例。健康体检者100例均来自我院体检中心临床 无腰背、关节疼痛或僵硬等症状者，其中男性68例，女性 32例，年龄19岁-55岁，平均年龄24. 5岁。1. 2方法1.2. 1标本按测定要求抽取患者静脉血1ml-2nd于 edta-k2抗凝或肝素抗凝管中，立即轻轻颠倒混匀，于24小 时内完成检测。1. 2. 2试剂与仪器 仪器使用美国

5、beckman/coulter epics xl型流式细胞仪，试剂使用美国beckman/coulter公 司生产的hla-b27-fitc/hla-b7-pe荧光双色试剂、阴性对 照igg2a-fitc/iggl-pe试剂及全部原装配套试剂。1.2.3检测方法检测严格按仪器及试剂说明书进行。1.2.3. 1 样本处理及检测 将 hla-b27-fitc/hla-b7-pe 单克隆抗体20 ul加入到100 p1全血中混匀，与白细胞膜 上相应的抗体结合，经过溶血(和固定)、洗涤等步骤后， 在流式细胞仪上进行分析测定。1.2.3.2结果判断hla-b27阳性且hla-b7阴性 (hla-b27+

6、/hla-b7-)的细胞达 90. 0%以上,同时 hla-b27 的平均荧光强度(x-mean)达到8.0以上时判断为阳性结果, 否则判断为阴性。1.2.4统计方法 结果采用百分比表示，组间结果采用 x 2检验进行相互比较，p 目前，文献报道4-8检测 hla-b27对于早期诊断as具有重要价值，as患者hla-b27 阳性率90%, hla-b27阳性的人群中约有20%-30%的人患有 as,而hla-b27阴性者99. 9%不会患as,如症状和体征提示 as, b27阳性会显著增加正确诊断的机会，b27阴性则排除 as诊断的。强直性脊柱炎是一种具有较强的家族遗传倾向， la-b27阳性的

7、as患者的hla-b27阳性亲属的发病率高达 25%-50%,如果对hla-b27阳性患者的一级亲属进行b27检 测，对as早期诊断及早期干预治疗均有重要价值。我们的 分析显示：在370确诊as患者中hla-b27阳性358例（阳 性率96. 8%）,在406例hlab27阳性患者中临床最终确诊as 者 358 例（占 hla-b27 阳性率 96. 7%）, 744 例 hla-b27 阴性 者中临床最终确诊as者12例（占hla-b27阴性率1.6%）, 非as者732例（占hla-b27阴性率98. 4%）,健康体检中4 例hla-b27阳性（占健康人群的0. 4%）,均为同一亲缘关系

8、的家庭成人，且临床均无明显症状。我们的结果表明：除 hlab27阳性者中确诊as者比例高于文献报道外，其余与文 献报道相近，这可能与我们检测的标本多为临床有症状者， 尤其部分是临床高度疑诊as者有关。因此，在传统诊断的 基础上加上hla-b27的检测，可以提早诊断as,为患者的治 疗和预防赢得时间9,是as重要的辅助诊断及鉴别诊断依 据。目前检测hla-b27的主要方法有补体依赖性微量淋巴细 胞毒试验（cdc法）、玫瑰花法、elisa发、流式细胞术（fcm 法）、pcr法等，与微量细胞毒法和pcr检测方法比较，流式 细胞仪检测hla-b27的表达无须分离淋巴细胞，且操作简单, 其检测灵敏度可达

9、100%,特异性为97. 4%,不同仪器型号及 实验室之间的检测重复性高8-9,易于标准化和质量控制, 更有利于临床推广应用。由于hla-b27. b7抗原均属于交叉 反应的b7群，b27单抗在识别b27抗原时可与b7抗原发生 交叉反应，因此fcm法必须排除e7对b27的干扰。我院使 用美国 beckman/coulter 公司生产的 hla-b27-fitc/hla-b7-pe检测试剂盒，其阳性结果判断标准 为:hla-b27 阳性且 hla-b7 阴性(即 hla-b27+/hla-b7-) 的细胞达90. 0%以上，同时hla-b27的平均荧光强度(x-mean) 达到8.0以上，从而有

10、效的排除了 b7对b27的干扰。本文 的结果显示：用流式细胞仪检测hla-b27,其结果准确可靠, 在as的辅助诊断中具有重要价值，其灵敏度为96. 8%,特异 性为93.5%,阳性预测值89. 0%,阴性预测值98. 1%,其中灵 敏度、特异性及阴性预测值与文献报道相近，而阳性预测值 高于文献报道，原因可能是：3.1我们检测的人群多数是有症状的患者，尤其部分是 临床高度疑诊as者，他们本身就是hla-b27高表达的人群。3.2我们判定阳性的标准较高，在实验中我们发现，有 部分人的hla-b27表达超过50%,甚至超过80%,但是根据 标准，我们仍然是判定为阴性，这部分人很可能是发展为as 的

11、潜在人群，建议临床随访。总之，hla-b27检测可辅助as诊断，对疑为as患者进 行淋巴细胞表面hlab27抗原的检测有助于提高早期诊断 as的可能性，为此类患者的诊断和鉴别诊断提供线索，可弥 补x线不能早期诊断as的不足10。hla-b27检测还可预测 幼年特发性关节炎患儿的转归，如患者阳a-b27阳性，则发 展为as的可能性大。同时hla-b27抗原检测对as的预防亦具有一定意义，itla-b27阳性患者的一级亲属可检测b27, 对as进行早期诊断，及早进行干预治疗7。参考文献1龙溯，刘兰，黎莉竺，等.西宁地区1000例hla-b27 检测男、女阳性率比较j.中外健康文摘，2013, 10

12、 (9)： 203-204.2陈建华，魏文宁，喻喜，等援孕悦砸郵杂杂孕法与 流式细胞仪检测强直性脊椎炎患者hla-b27的比较比较j. 检验医学与临床，2007, 4 (3)： 161-162.3高云风.hla-b27检测应用于强直性脊柱炎的临床 意义j.吉林医学，2012, 33 (6)： 1164-1165.4洪俊，张平安，李艳，等强直性脊柱炎患者人类 白细胞抗原b27三种检测方法的对比j.检验医学，2006,21: 1一3.5蒋叙川，卢峰.hla-b27检测在强直性脊柱炎中的临 床应用j内蒙古中医药,2012, 11： 97-98.6刘好.hla-b27检测在豫西地区强直性脊柱炎诊断中的意义j山东医药，2006, 46 (27) 11, 69-70.7宋秀军，江其生强直性脊柱炎hla-b27检测及其临床意义j放射免疫学杂志,2010, 23 (3)： 315-316.戴庆富