DNA重组技术的基本工具(1)ppt课件

1、能能发发光光的的水水母母不能发光的热带斑马鱼不能发光的热带斑马鱼能发能发荧光荧光的热的热带斑带斑马鱼马鱼普通热带斑马鱼是不发荧光的普通热带斑马鱼是不发荧光的能产生人胰岛素的大肠杆菌能产生人胰岛素的大肠杆菌RNADNA 蛋白质蛋白质转录转录翻译翻译复制复制 基因工程又叫做基因拼接技术或基因工程又叫做基因拼接技术或DNADNA重组技术。重组技术。 通俗地说，就是按照人们的志愿，把通俗地说，就是按照人们的志愿，把一种生物的个别基因复制出来，加以修饰一种生物的个别基因复制出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状目的。向地改造生物的遗传

2、性状目的。 目的基因目的基因供体细胞供体细胞受体细胞受体细胞基因重组基因重组DNADNA分子程度分子程度定向地改造生物的遗定向地改造生物的遗传性状，获得人类所传性状，获得人类所需求的种类。需求的种类。获得新性状获得新性状黏性末端黏性末端平末端平末端限制酶的种类与命名：迄今已从近迄今已从近300种微生物中分别出约种微生物中分别出约4000种限制酶。种限制酶。粘质沙雷氏杆菌粘质沙雷氏杆菌Serratia marcesens练习：流感嗜血杆菌的练习：流感嗜血杆菌的d d菌株菌株( Haemophilus influenzae d )( Haemophilus influenzae d )中先后分别到

3、中先后分别到3 3种限制酶，那么种限制酶，那么分别命名为分别命名为: :Hind、Hind和和Hind限制酶的作用特点：限制酶的作用特点：不同限制酶的识别与切割位点不同，表达了不同限制酶的识别与切割位点不同，表达了酶的专注性；酶的专注性；一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的位点上切割并在特定的位点上切割DNA分子，断开两个分子，断开两个核苷酸之间的磷酸二酯键。核苷酸之间的磷酸二酯键。 限制酶所识别的序列，限制酶所识别的序列，大多由大多由6个核苷酸组成，少个核苷酸组成，少数由数由4、5或或8个核苷酸组成，个核苷酸组成，无论哪种序列，都可以找到

4、无论哪种序列，都可以找到一条中心轴线，中心轴线两一条中心轴线，中心轴线两侧的双链侧的双链DNA上的碱基是上的碱基是反向对称、反复陈列的，即反向对称、反复陈列的，即序列表现为中心对称。序列表现为中心对称。 只能在特定位点切割。只能在特定位点切割。CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAAAATTCCGTAG 练习运用练习运用EcoRI 剪切目的基因剪切目的基因GGCATCTTAAAATTCCGTAG 目的基因目的基因CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT DNA衔接酶衔接酶G A A T T CC T T

5、A A GG A A T T CC T T A A GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C G用同种限制酶切割用同种限制酶切割DNA聚合酶和聚合酶和DNA衔接酶有何衔接酶有何一样和不同点？一样和不同点？DNA衔接酶衔接酶DNA聚合酶聚合酶衔接衔接DNA链链双链单链衔接部位衔接部位在两DNA片段之间构成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3末端的羟基上，构成磷酸二酯键假设目的基因导入受体细胞后不能复制假设目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？将怎样？作为载体没有切割位点将怎样？作为载体没有切割位点将怎样？目的基因能否进入受体细胞，他如何觉目的基因能否进入受体细胞，他如何觉察？察？假设载体对受体细胞有害将怎样？假设载体对受体细胞有害将怎样？基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体作为载体的必要条件作为载体的必要条件 能自我复制能自我复制 有切割位点有切割位点 能与目的基因结合能与目的基因结合 能进入受体