活血调脂胶囊的制备方法分析及降血脂作用研究

1、活血调脂胶囊的制备方法分析及降血脂作用研究吕卉王燕唐士平（山东省莱芜市中医医院山东莱芜271100）【摘要】目的：探讨分析活血调脂胶囊的制备方法及降血脂作用药理学原理。 方法：按新药研究思路，我们采用正交试验法以浸膏得率和大黄酚、大黄素、总 大黄蔥醍含量为考察指标，对大黄等热回流条件、浓缩干燥方法等进行了全面考 察。结果：大黄干燥方法对大黄酚、大黄素含量影响非常大，采用常压浓缩干燥 大黄酚的损失率可达成70%,喷雾干燥为瞬间干燥，明显优于真空干燥，大黄 酚基木无损失，大黄酚的转移率可达60%以上。结论：中药所含成分十分复杂， 既有有效成分，又有无效成分和有毒成分，所以选用合理的提取工艺是非常重

2、要 的。【关键词】活血调脂胶囊；制备方法；药理学研究【中图分类号】r96【文献标识码】a【文章编号】1007-8231 （2015） 23-0006-02活血调脂胶囊为我院临床应用多年的医院制剂，由大黄、泽泻、山楂、大蒜 粉、绞股蓝、刺五加叶、月见草等组成，大黄为其主要药效成分之一，其化学成 分主要有大黄素、大黄酚、大黄素甲醯、大黄酸等蔥醍类化合物，大黄酚为调脂 有效成分，具有改善血管脆性，缩短凝血时间，促进血小板牛成的作用1,药 理研究证实木制剂预防和治疗给药对金黄地鼠具有显著降血脂和调节脂代谢的 作用2,为充分发挥其药理作用，按新药研究思路，我们采用正交试验法以浸 膏得率和大黄酚、大黄素、

3、总大黄蔥醍含量为考察指标，对大黄等热回流条件、 浓缩干燥方法等进行了全面考察。1.仪器与试药1.1仪器waters 2690型高效液相色谱仪（美国），996型光电二极管阵列检测器，millennium32色谱工作站，自动进样器，th 66025型超声清洗器。wpg5喷雾 干燥机组(陕西)，zk-82b电热真空干燥箱(上海)。1.2试药大黄酚对照品、大黄素对照品，均由中国药品生物制品鉴定所提供，甲醇为 色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为二次蒸憎水。活血调脂胶囊由我院制剂中心 提供。2 .方法与结果2.1色谱条件色谱柱 kromasil c18(200mm×4. 6mm i. d

4、, 5um)；流动相：0.04%mol /l磷酸一甲醇(30 : 70),用10%氨水调节ph至6.0；流速lml/min,检测波 长：254nmo2.2大黄药材中人黄酚及人黄素的测定取大黄细粉约0.匹，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加入甲醇25ml,称 定重量，加热冋流30min,放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀, 滤过。精密量取续滤液5ml,置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol / l的 硫酸溶液10ml,超声处理5min,再加氯仿10ml,加热冋流lh,冷却，移置分 液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取 2次，每次10ml,合并

5、氯仿液。以无水硫酸钠脱水，氮仿液移至100ml锥形瓶 中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10ml,称定重量，置水浴微热溶解残渣，放冷 后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，作为供试品溶液, 作hplc测定，结果大黄中含大黄素(c15h10o5) 0.261% 大黄酚(c15h10o5) 0.615%，其总量为0.876% o以下试验中的大黄均用本批样品。2.3因素水平确定对乙醇热冋流产生影响的因素有：乙醇浓度、乙醇用量、冋流时问、提取次 数，实验以提膏得率、大黃酚含量、大黄素含量为考察指标，因素水平的选择见 表。表因素水平表2.4方法与结果分别称取处方量中药9份，每份50g。分别置1

6、00ml圆底烧瓶中，按正交表 l9(34)的安排进行试验，以不同浓度乙酵、不同用量乙醇、不同冋流时间和提取 次数进行乙醇热冋流提取。收集19份冋流提取液，合并，滤过，分别定容至 1000ml，备用。2.4.1醇浸膏得率测定精密吸取上述提取液50ml,置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于 105&plusmn；rc干燥3h,置干燥器中冷却0.5h,迅速称重，并计算浸膏得率。2.4.2大黄酚和大黄素含量测定对照品溶液的制备：精密称取大黄酚1.58rng,加甲醇制成每lml,精密称 取大黄素对照品，加甲醇定容于50ml容量瓶中，备用。供试品溶液的制备：精密吸取上述19号提取液10ml于蒸发

7、皿中，挥干溶 剂，残渣分别加甲醇溶解并定容至100ml量瓶中，过0.25um的滤膜，取续滤液 即为19号供试品溶液。按上述条件进行液相色谱分析，进样量20ul2.4.3实验结果由浸膏得率极差及方差分析结果表明：各因素作用主次为a>b>c&gt；d, 其中a, b因素有显著性差异(p<005), c、d因素无显著性差异(p>0.05),最 佳工艺为a1b1c1d1；大黄酚方差分析结果表明：各因素作用主次为 a>c>d>b,其中a因素有极其显著性差异(p<0.01), c因素有显

8、著性差 异(p<0.05), b、d因素无显著性差异，最佳工艺为a2b2c3d1；以人黄素方差 显示：各因素作用主次为a>c>b&gt；d,方差分析表明：中a、b、c因素有 显著性差异(p<0.05), d因素无显著性差异(p&gt；0.05),最佳工艺为a2b2c3d1； 以大黄总蔥醍方差显示：各因素作用主次为a&gt；c&gt；b&gt；d,其中a因素有显 著性整异(p<0.01), a、b、c、d因素无显著性差异(p>0.05),最佳工艺为 a2b2c3dlo结合生

9、产实际，考虑到大黄酚转移率，综合比较，大黄的最佳提取 工艺为：a2b2c3d1,即人黄分别以8、6倍量70%乙醇冋流提取2次，每次1.0、l.oho验证实验：按优选工艺，重复3次，大黄酚转移率70%以上。验证结果与 正交结果基本一致，故提取工艺条件基本稳定。2.5浓缩、干燥方法的考察2.5.1常压水浴浓缩、真空干燥以上正交样品常压水浴浓缩612h,至稠膏基本无流动性(60°c相对密度在 1.35以上)，真空干燥24h,干膏粉碎，过80目筛，称取o.lg,精密称定，用甲 醇溶解并定容至100ml量瓶中，按含量测定方法测定大黃酚含量，计算转移率， 结果表明，以上述条件浓缩干燥，大黄中45

10、70%受热破坏。2.5.2浓缩对大黄酚的影响正交a2b3c2d2提取的溶液，分别于75°c以下减压(0.085mpa)浓缩4h,水浴 (100°c)浓缩2h, 4h、8h,测定大黄酚含量，计算转移率，结果减压浓缩明显优 于常压浓缩，随时间延长，大黃酚转移率下降。2.5.3干燥方法对大黄酚的影响正交a2b3c2d2提取的溶液，减压冋收乙醇并浓缩至相对密度为1.151.20 的清膏(60°c),分别喷雾干燥(进口温度：150170°c,出口温度：7585°c)和 60°c真空干燥8h,结果表明，喷雾干燥对大黄酚无破坏，60°c真

11、空干燥8h对大 黄酚有明显破坏。3 .讨论3.1由于大黃总蔥醍以结合态和游离态存在，用水只能提取其游离态类成分, 但两类成分均易溶于乙醇，故本试验采用乙醇提取的方法。同时我们考察了渗漉 提取对大黄酚、大黄素的影响，结果热冋流提取的效率高于渗漉提取法。3.2大黃干燥方法对大黃酚、大黄素含量影响非常大，采用常压浓缩干燥大 黄酚的损失率可达成70%,喷雾干燥为瞬间干燥，明显优于真空干燥，犬黄酚 基本无损失，大黃酚的转移率可达60%以上。3.3中药所含成分十分复杂，既有有效成分，又有无效成分和有毒成分，所 以选用合理的提取工艺是非常重要的。除上述大黄的提取工艺外,绞股蓝皂昔的 提取工艺为：绞股蓝全草&

12、amp;rarr沏碎为粗粉→离子水浸泡&rarr冰浴80°c→ 减压提取3次→超滤器过滤→滤液加naoh调ph至910→d101-a型 树脂柱吸附→0.5mol/lnaoh洗涤→水洗至中性→95%乙醇洗脱→ 洗脱液加入活性炭冋流→趁热抽滤→滤液减压冋收乙醇&rarr汗燥→粉末状绞股蓝总皂fi→薄层层析与rbl的图谱比较。山楂总黄酮的提取工艺 如下：山楂切片，干燥→粉碎→用乙醇作溶剂，微波提取→减压蒸憾 →大孔树脂吸附→蒸馆水清洗→95%的乙醇洗脱→冋收乙醇→ 水浴加热脱水→总黄酮含量测定。【参考文献】1