影响酶活性的因素

1、生物化学实验基本操作生物化学实验基本操作 一一. 玻璃仪器的洗涤玻璃仪器的洗涤在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的重要环节。洁净的玻璃仪器内壁应十分明亮光洁，无重要环节。洁净的玻璃仪器内壁应十分明亮光洁，无水珠附着在玻壁上。水珠附着在玻壁上。 常用的洗涤方法：常用的洗涤方法：1.一般仪器，如烧杯、试管等可用毛刷蘸肥皂液、合一般仪器，如烧杯、试管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗涤剂仔细刷洗。然后用自来水反复冲洗，最后用成洗涤剂仔细刷洗。然后用自来水反复冲洗，最后用少量蒸馏水冲洗少量蒸馏水冲洗23次，倒置在器皿架上晾干或置于次，倒置在器皿架上晾

2、干或置于烘箱烤干备用。烘箱烤干备用。 2.容量分析仪器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能容量分析仪器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。用后应及时用自来水多次冲洗，细心检用毛刷刷洗。用后应及时用自来水多次冲洗，细心检查洁净程度，根据挂不挂水珠采取不同处理方法。查洁净程度，根据挂不挂水珠采取不同处理方法。（1）如不挂水珠，用蒸馏水冲洗、干燥，方法同上；）如不挂水珠，用蒸馏水冲洗、干燥，方法同上； （2）如挂水珠，则应沥干后用重铬酸钾洗液浸泡）如挂水珠，则应沥干后用重铬酸钾洗液浸泡46小时，然后按上法顺序操作，即先用自来水冲洗，小时，然后按上法顺序操作，即先用自来水冲洗，再用蒸馏水冲洗，最后

3、干燥。再用蒸馏水冲洗，最后干燥。 二二.刻度吸量管刻度吸量管刻度吸量管刻度吸量管的种类：的种类： 按容量规格来分，有按容量规格来分，有0.1、0.2、0.25、0.5、1、2、5、10ml等数种。其精密度按不同的容积可达移等数种。其精密度按不同的容积可达移取量的取量的0.11%。通常将管身标明的总容量分刻为。通常将管身标明的总容量分刻为100等分。等分。因此，因此，10ml的吸量管一格代表的吸量管一格代表0.1ml；1ml的吸量管一格代表的吸量管一格代表0.01ml,其余类推。其余类推。 刻度吸量管的正确使用方法：刻度吸量管的正确使用方法：用右手拇指和中指夹住管身，将吸量管的尖端伸入试用右手拇

4、指和中指夹住管身，将吸量管的尖端伸入试液深处，左手持洗耳球把试液吸入管内至高过刻度以液深处，左手持洗耳球把试液吸入管内至高过刻度以上时，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控制试上时，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控制试液的泄放。吸液后应尽量使吸量管保持垂直，使右眼液的泄放。吸液后应尽量使吸量管保持垂直，使右眼与刻度等高，稍微轻抬食指或轻轻转动吸量管，使试与刻度等高，稍微轻抬食指或轻轻转动吸量管，使试液面缓慢降落，至管内试液弯月面的最低点与吸量管液面缓慢降落，至管内试液弯月面的最低点与吸量管的刻度线相齐为止。然后将吸量管插到需加试剂的容的刻度线相齐为止。然后将吸量管插到需加试剂的容器中，让尖

5、端与容器内壁靠紧，松开食指让液体流出。器中，让尖端与容器内壁靠紧，松开食指让液体流出。液体流完后再等液体流完后再等15秒钟，捻动一下吸量管后移去秒钟，捻动一下吸量管后移去（如需吹的吸量管，则吹出尖端的液体后再捻转一下（如需吹的吸量管，则吹出尖端的液体后再捻转一下吸量管移去）。吸量管移去）。 三三. 溶液的混匀溶液的混匀 混匀的目的：混匀的目的：使反应体系内的各种物质分子很好地互相接触，充分进行使反应体系内的各种物质分子很好地互相接触，充分进行反应；反应； 使欲稀释的溶液成为浓度均一的溶液。使欲稀释的溶液成为浓度均一的溶液。 混匀的方法通常有以下几种：混匀的方法通常有以下几种：使盛器作离心运动。

6、使盛器作离心运动。左手持试管上端，用右手指轻击试管下半部，使管内溶液左手持试管上端，用右手指轻击试管下半部，使管内溶液作旋转运动。作旋转运动。 混匀的注意事项：混匀的注意事项：防止盛器内的液体溅出或被污染。防止盛器内的液体溅出或被污染。严禁用手指堵塞管口或瓶口震荡混匀。严禁用手指堵塞管口或瓶口震荡混匀。实验报告的书写1.实验目的2.实验原理3.实验步骤4.实验结果5.实验分析影响酶作用的因素一、实验目的 通过对唾液淀粉酶活性的观察，验证通过对唾液淀粉酶活性的观察，验证温度、温度、pH、激活剂、抑制剂等对酶活性、激活剂、抑制剂等对酶活性的影响。的影响。二、实验原理 唾液淀粉酶存在于唾液中，其作用

7、唾液淀粉酶存在于唾液中，其作用的底物是淀粉。的底物是淀粉。 淀粉 I2：蓝色淀粉酶糊精（大分子，小分子） 紫红色、暗褐色或红色淀粉酶麦芽糖+少量葡萄糖 棕黄色，碘本身颜色 淀粉水解过程中与碘反应，其颜色的变化，可以指淀粉水解过程中与碘反应，其颜色的变化，可以指示淀粉的水解程度，也可以由此判断淀粉酶活力强弱。示淀粉的水解程度，也可以由此判断淀粉酶活力强弱。三、实验试剂及器材1.试剂试剂 1%淀粉淀粉溶液溶液 碘碘液液 pH5.0、pH6.8、pH8.0磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液 1% CuSO4溶液溶液 1% NaCl溶液溶液 Na2SO4溶液溶液2. 器材器材 恒温水浴锅恒温水浴锅 电炉电炉 比

8、色板比色板四、实验操作 1.唾液淀粉酶的制备唾液淀粉酶的制备 取干净的纸杯，盛上蒸馏水。取干净的纸杯，盛上蒸馏水。 用蒸馏水漱口。用蒸馏水漱口。 口含约口含约20ml蒸馏水，蒸馏水，2-3分钟后，吐入一干净试分钟后，吐入一干净试管中，棉花过滤。管中，棉花过滤。管别管别淀粉管淀粉管稀释唾液稀释唾液蒸馏水蒸馏水同时放同时放于于30-40oC水水浴中浴中2分钟后分钟后对照组3ml2ml实验组3ml2ml 2分钟后做碘液检查：在比色板上滴上碘液，于二管各取一滴加入，看是否开始水解，以后每隔2分钟再取一滴加以检查，约6-10分钟后实验管水解过程由蓝紫 红棕 无色，此时水解完成。但对照管仍蓝色。观察两管淀

9、粉在水解后的乳样光泽分别取两管溶液5滴，加入班氏试剂0.5ml，加热煮沸，观察有何现象发生。2.pH对唾液淀粉酶活性的影响对唾液淀粉酶活性的影响一、实验目的 了解pH对酶活性的影响及最适pH的定义。二、原理 酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各种酶只在一定pH范围内才具有活性，酶活性最高时的pH，称为酶的最适pH，高于或低于此pH时酶的活性都逐渐降低。不同酶的最适pH不同。酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。操作操作管号管号 1 2 3pH5.0磷酸缓冲液磷酸缓冲液(ml) 1 0 0pH6.8磷酸缓冲液磷酸缓冲液(ml) 0 1

10、0pH8.0磷酸缓冲液磷酸缓冲液(ml) 0 0 11%淀粉溶液淀粉溶液(ml) 1 1 1唾液淀粉酶溶液唾液淀粉酶溶液(ml) 1 1 1 摇匀，置于常温下，立即自摇匀，置于常温下，立即自PH6.8的一管中取出一滴置的一管中取出一滴置于比色盘中，以后每隔于比色盘中，以后每隔2分钟左右检查一次，观察与碘液的分钟左右检查一次，观察与碘液的显色反应，当出现淡红褐色时，向每管滴加碘液显色反应，当出现淡红褐色时，向每管滴加碘液1滴，比较滴，比较各管颜色。各管颜色。取试管取试管3支，按下表操作支，按下表操作3. 温度对唾液淀粉酶活力的影响一、实验目的 了解温度对酶活性的影响并了解最适温度的定义。二、原理

11、 对温度敏感是酶的一个重要特性，酶作为生物催化剂，和一般催化剂一样呈现出温度效应，提高温度可以提高酶促反应速度，但另一方面又会加速酶蛋白的变性速度，所以在较低的温度范围内，酶反应速度随温度升高而增大，但是超过一定温度后，反应速度反而下降。酶反应速度达到最大时的温度称为酶的最适温度。酶的最适温度不是一个常数，它与作用时间的长短有关系。 取取3支试管，按下表操作支试管，按下表操作：操作项目操作项目管号管号 1 2 31%淀粉溶液淀粉溶液(ml) 2 2 2唾液淀粉酶溶液唾液淀粉酶溶液(ml) 1 1 1温度处理（温度处理（） 37 沸水 0-4 1.在上述温度情况下，保温10分钟2.从上3管各取水解液少许用碘液试之。有何变化？3.将2、3管从水中取出，放入37水浴中保温10 分钟，再以碘液试之，有何变化？4.激活剂和抑制剂对唾液淀粉激活剂和抑制剂对唾液淀粉 酶活性的影响酶活性的影响一、实验目的 了解激活剂和抑制剂对酶活力的影响。二、原理 酶的活性受某些物质的影响，能使酶活性增加的称为激活剂，能使酶活性降低的称为抑制剂。很少量的激活剂和抑制剂就会影响酶的活性，而且常具有特异性，但激活剂和抑制剂不是绝对的，浓度的改变可能使激活剂变成抑制剂。 置于常温下，同时向各管中加入等量唾液置于常温下，同时向各管中加入等量唾液1ml，立即混匀，并，立即混匀，并立即从第二管中用滴管