药物分析第二章药物的鉴别试验

1、药物的鉴别试验药物的鉴别试验Identification test of drugIdentification test of drug第二章第二章p 药物的鉴别试验p 药物的杂质检查p 药物定量分析与分析方法验证药品检验工作的基本规律药品检验工作的基本规律Basic regularity of drug inspectionIdentification test of drugp 鉴别试验的内涵p 鉴别试验的项目p 鉴别试验的方法p 鉴别试验的条件药物的鉴别试验药物的鉴别试验p 根据药物的分子结构，采用化学、物理化学或根据药物的分子结构，采用化学、物理化学或生物学方法来判断其真伪。生物学方法

2、来判断其真伪。 p 鉴别试验用方法仅用于证实贮藏在有标签容器鉴别试验用方法仅用于证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，而非对未知物中的药物是否为其所标示的药物，而非对未知物的鉴别。的鉴别。 p 鉴别试验方法应专属，每个品种一般鉴别试验方法应专属，每个品种一般2 23 3条。条。鉴别试验的内涵鉴别试验的内涵Test meaning ChP(2010)凡例中对药物的鉴别凡例中对药物的鉴别的定义为：鉴别项下规定的实验的定义为：鉴别项下规定的实验方法，仅反应该药品某些物理、方法，仅反应该药品某些物理、化学或生物学等性质特征，不完化学或生物学等性质特征，不完全代表对该药品化学结构的确证。全代

3、表对该药品化学结构的确证。性状项和物理常数确认性状项和物理常数确认 鉴别项下规定的试验鉴别项下规定的试验 原原料料药药鉴鉴别别制制剂剂鉴鉴别别鉴别试验的项目鉴别试验的项目 Test items 性性 状状 （Description）定义：定义： 反映药物特有的物理性质，如外观、溶解反映药物特有的物理性质，如外观、溶解度和物理常数等。度和物理常数等。外 观溶解度物理常数外观：指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。 如二巯基丁二钠的描述为如二巯基丁二钠的描述为“本品为白色至微黄色的本品为白色至微黄色的粉末；有类似蒜的特臭粉末；有类似蒜的特臭”。

4、 溶解度：溶解度：一定程度上反映了药品的纯度一定程度上反映了药品的纯度。药品在不同溶剂。药品在不同溶剂中的溶解性能用中的溶解性能用“极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述。来描述。物理常数物理常数：用于药品鉴别，反映其纯杂程度用于药品鉴别，反映其纯杂程度。药典收载的。药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。 性性 状状 （Descriptio

5、n）熔熔 点点性 状-固体熔化成液体的温度 熔融同时分解的温度 自初熔至全熔的一段温度 物理常数物理常数 ChP(2010)收载三种熔点的测定收载三种熔点的测定方法：方法： 第一法第一法 测定易碎固体药品测定易碎固体药品 第二法第二法 测定不易粉碎固体药品测定不易粉碎固体药品 （脂肪酸、石蜡）（脂肪酸、石蜡） 第三法第三法 测定凡士林或其他易碎物测定凡士林或其他易碎物要求报告初熔和终熔的温度要求报告初熔和终熔的温度比旋度比旋度：在一定波长：在一定波长(589.3nm)(589.3nm)与与温度温度(20(20)下，偏振光透过长下，偏振光透过长1dm1dm且且每每1ml1ml中含有旋光性物质中含

6、有旋光性物质1g1g的溶液的溶液时测得的旋光度。用时测得的旋光度。用 表示。表示。性 状-物理常数物理常数 CLD20 dLD20 例如：维生素例如：维生素C的比旋度测定：的比旋度测定： 取本品，精密称定，加水溶解，并定取本品，精密称定，加水溶解，并定量稀释成量稀释成C为为0.10g/ml的溶液，依法的溶液，依法测定旋光度为测定旋光度为+2.05至至2.15，求，求 =？ 吸收系数吸收系数：在给定的波长、溶剂和温在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。中国药典收载是数。中国药典收载

7、是 。 这两种物理常数可用以区别药品、检这两种物理常数可用以区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。查纯度或测定制剂的含量。 %1cm1E吸收系数吸收系数 吸光物质在单位浓度、单位液吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度层厚度时的吸收度 摩尔吸收系数摩尔吸收系数 溶液浓度溶液浓度 液层厚度液层厚度 百分吸收系数百分吸收系数 溶液浓度溶液浓度 液层厚度液层厚度L/mol1cm1cm1 ml/g%1%11 cmE A=ECL E=A/CL C=1%或或1mol/L例如例如 盐酸甲氧明盐酸甲氧明 “取本品，精密称定，加水溶解并定量取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释成每稀释成每1ml含含30ug的溶

8、液，照分光的溶液，照分光光度法，在光度法，在290nm波长处测定吸收度，波长处测定吸收度，吸收系数（为吸收系数（为 133-141）%11cmE依依 据据： 某一类药物组成中的阴离子和阳离子的特殊某一类药物组成中的阴离子和阳离子的特殊反应或典型的有机官能团反应。反应或典型的有机官能团反应。中国药典附录收载一般鉴别试验中国药典附录收载一般鉴别试验：无机金属盐类、无机酸盐、有机酸盐、无机金属盐类、无机酸盐、有机酸盐、 丙二酰丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化物类等物类等General identification test一般鉴别试验一般鉴别

9、试验无机物无机物有机物有机物阴阳离子的特殊反应阴阳离子的特殊反应酸根酸根名称名称 检验试剂检验试剂 现现 象象 反应方程式反应方程式 SO42- BaCl2溶液溶液 白色白色加酸不溶加酸不溶 SO42-+Ba2+BaSOBaSO4 4 CO32- 稀酸，稀酸，Ca(OH)2 气体使石灰水变混气体使石灰水变混 CO32-+2H+COCO2 2+H+H2 2O OCaCa2+2+CO+CO3 32-2-CaCOCaCO3 3 HCO3- 稀酸，稀酸，Ca(OH)2气体使石灰水变混气体使石灰水变混 Cl- AgNO3试试液液 白白溶于氨水不溶溶于氨水不溶稀硝酸稀硝酸 Cl-+ Ag+AgClAgCl

10、 Br- AgNO3试试液液 黄黄微溶氨水不溶微溶氨水不溶稀硝酸稀硝酸 Br-+ Ag+AgBrAgBr 阴阳离子的特殊反应阴阳离子的特殊反应离子离子鉴别方法鉴别方法鉴别原理鉴别原理现现 象象Na+焰色反应焰色反应光谱主要谱线光谱主要谱线589nm可见可见光区光区鲜黄色（实例见鲜黄色（实例见）K+焰色反应焰色反应光谱主要谱线光谱主要谱线766nm，769nm紫色（实例见紫色（实例见）Ca2+焰色反应焰色反应光谱主要谱线光谱主要谱线622nm可见可见光区光区砖红色砖红色Ba2+焰色反应焰色反应光谱主要谱线光谱主要谱线553nm，500nm黄绿色黄绿色Li+焰色反应焰色反应光谱主要谱线光谱主要谱线

11、670nm胭脂红色胭脂红色NH4+NaOH 石石蕊试液蕊试液NH4+OH-NHNH3 3+H+H2 2O O有刺鼻气味，湿石蕊试有刺鼻气味，湿石蕊试纸变兰纸变兰有机氟化物有机氟化物 样品经氧瓶燃烧法进行有机破坏后，样品经氧瓶燃烧法进行有机破坏后，用水和碱氢氧化钠溶液吸收为无机氟用水和碱氢氧化钠溶液吸收为无机氟化物，与化物，与茜素氟蓝和硝酸亚铈茜素氟蓝和硝酸亚铈在在PH=4.3溶液中形成蓝紫色络合物。溶液中形成蓝紫色络合物。反应原理反应原理F+OOOHOHCH2NCH2COOHCH2COOHCe3+PHOOOHCH2NOCH2COOCH2COOCeFOHFeCl3 反应反应加稀HCl，沉淀分解，

12、生成游离COOH白色COONa73FeCl32OH-中性溶液COO6Fe3(OH)2OOC7NaCl2Cl-碱式苯甲酸铁盐（碱式苯甲酸铁盐（赭色沉淀赭色沉淀）酒石酸盐酒石酸盐 取供试品的中性溶液于试管中，加氨制硝取供试品的中性溶液于试管中，加氨制硝酸银溶液几滴，于水浴中加热，有银镜生酸银溶液几滴，于水浴中加热，有银镜生成。成。OHOHCOOHCOOHAg(NH3)OH+2OHOHCOONH4COONH4NH3+22Ag+2H2O综上所述，一般鉴别试验只能证实是哪综上所述，一般鉴别试验只能证实是哪一类药物，而不能证实是哪一种药物一类药物，而不能证实是哪一种药物依依 据据：每种药物的化学结构的差异

13、及引起的每种药物的化学结构的差异及引起的 物物理化学特性的不同，选用某些特有的灵敏理化学特性的不同，选用某些特有的灵敏的定性反应鉴别药物的真伪。的定性反应鉴别药物的真伪。是证实是证实某一种某一种药物的依据。药物的依据。 Specific identification test专属鉴别试验专属鉴别试验例子例子 巴比妥类药物：苯巴比妥含有苯环，司可巴比巴比妥类药物：苯巴比妥含有苯环，司可巴比妥含有双键，硫喷妥钠含有硫原子。根据取代妥含有双键，硫喷妥钠含有硫原子。根据取代基的不同，采用各自专属的反应进行鉴别。基的不同，采用各自专属的反应进行鉴别。CHCHCH2+CH3NaBr2CBrOCNCNHCH

14、3OCCHCHCH2CH3NaCOCNCNHCH3OCBr例子例子 甾体激素类药物含有环戊烷并多氢菲甾体激素类药物含有环戊烷并多氢菲母核，主要差别在母核，主要差别在A A环和环和D D环的取代基环的取代基不同，可利用这些结构特征确证。不同，可利用这些结构特征确证。生物学法生物学法 HPLC、GC鉴别法鉴别法 薄层色谱鉴别法薄层色谱鉴别法 纸色谱鉴别法纸色谱鉴别法 呈色反应鉴别法呈色反应鉴别法 紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法 红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法 沉淀生成反应鉴别法沉淀生成反应鉴别法 色谱鉴别法色谱鉴别法 气体生成反应鉴别法气体生成反应鉴别法 测定生成物的熔点测定生成物的熔点荧光反应鉴别法

15、荧光反应鉴别法 1.1.呈色反应鉴别法呈色反应鉴别法 指供试品溶液中加入适当的试指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。有色产物。（1 1）三氯化铁呈色反应：）三氯化铁呈色反应： 用于酚羟基或水解后产生酚羟基用于酚羟基或水解后产生酚羟基（2 2）异羟肟酸铁反应：）异羟肟酸铁反应： 多用于芳酸及其酯类、酰胺类多用于芳酸及其酯类、酰胺类（3 3）茚三酮呈色反应：）茚三酮呈色反应： 用于结构中含有脂肪氨基药物用于结构中含有脂肪氨基药物（4 4）重氮化）重氮化- -偶合显色反应：偶合显色反应： 用于芳伯氨基或潜在芳伯氨

16、基用于芳伯氨基或潜在芳伯氨基（5 5）氧化还原显色反应及其它颜色反应）氧化还原显色反应及其它颜色反应2.2.沉淀生成反应鉴别法沉淀生成反应鉴别法 （1 1）与重金属离子的沉淀反应）与重金属离子的沉淀反应（2 2）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应（3 3）其它沉淀反应。）其它沉淀反应。 多用于生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐。常用的荧光发射形式：常用的荧光发射形式：（1 1）药物本身可在可见光下发射荧光；）药物本身可在可见光下发射荧光；（2 2）药物溶液加硫酸后，在可见光下发射荧光；）药物溶液加硫酸后，在可见光下发射荧光；（3 3）药物和溴反应后，于可见光

17、下发射出荧光；）药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；3.3.荧光反应鉴别法荧光反应鉴别法（4 4）药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药）药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其它反应后，发射荧光。物经其它反应后，发射荧光。（1 1）大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以）大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气。产生氨（胺）气。（2 2）化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，）化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体。加热，发生硫化氢气体。（3 3）含碘有机药物，经直火加热，可生成紫色

18、）含碘有机药物，经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。4.4.气体生成反应鉴别法气体生成反应鉴别法 紫外法紫外法在指定溶剂中测定在指定溶剂中测定2-3个特定波长处的吸收度个特定波长处的吸收度比值（峰值与峰值比，峰谷与峰谷比），以比值（峰值与峰值比，峰谷与峰谷比），以提高专属性。提高专属性。例例 地蒽酚的鉴别地蒽酚的鉴别取含量测定下的溶液，照分光光度法测定，于取含量测定下的溶液，照分光光度法测定，于240-400nm的波长范围测定吸收度的波长范围测定吸收度,在在25

19、7,289,356处有最大吸收处有最大吸收.规定规定A257/= A289为为1.06-1.10 A356/= A289为为0.90-0.94.紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法 (1) 最大吸收波长和最小吸收波长最大吸收波长和最小吸收波长 (2) - A (3) -吸收系数吸收系数 (4) - A1/A2 (5) 化学处理后测定产物的吸光度值化学处理后测定产物的吸光度值不同国家测定方法略有不同不同国家测定方法略有不同 USP(32)USP(32) 采用对照品法采用对照品法, ,把样品与对照品按把样品与对照品按同法处理同法处理, ,在在200-400nm200-400nm波长范围扫描，要求波长范围扫

20、描，要求相同波长处有最大吸收，最小吸收，相同的相同波长处有最大吸收，最小吸收，相同的吸收系数，或吸收比在规定的限度内。吸收系数，或吸收比在规定的限度内。 JP(15)JP(15)与与ChP(2010)ChP(2010)的的UVUV测定方法相似。测定方法相似。 BP(2009)BP(2009)规定在一定波长范围内扫描，寻找规定在一定波长范围内扫描，寻找最大吸收，测定吸收系数。最大吸收，测定吸收系数。 红外光谱法是一种专属性很强，应用红外光谱法是一种专属性很强，应用较广（固、液、气）的鉴别方法，主较广（固、液、气）的鉴别方法，主要应用于要应用于组分单一，结构明确的原料组分单一，结构明确的原料药药，特别适合于其他方法不易区分的，特别适合于其他方法不易区分的同类药物，如磺胺类、甾体激素类、同类药物，如磺胺类、甾体激素类、半合成抗胜素。半合成抗胜素。 ChP和和BP均采用标准图谱法均采用标准图谱法例中国药典对某药物的鉴别：本品的红外例中国药典对某药物的鉴别：本品的红外吸收图谱应与对照的图谱（光谱集吸收图谱应与对照的图谱（光谱集XX图）图）一致。一致。USP采用对照品法采用对照品法例阿莫西林的鉴别试验：取本品，经干燥例阿莫西林的鉴别试验：