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文档简介

1、1926年，美国生化学家sumner从刀豆中得到脲酶结晶，并证明了脲酶的本质是蛋白质。1946年获得诺贝尔化学奖。酶 是由活细胞合成的，对其特异底物起高效催化作用的蛋白质，是机体内催化各种代谢反应最主要的催化剂。酶的特征常数 km值等于酶促反应速度为最大速度一半时的底物浓度 酶促反应的特征常数只与酶的结构、底物和反应环境（如温度、ph、离子强度）有关，与酶的浓度无关。实 验 目 的1. 阐述酶促反应中特征常数的特点和意义； 2. 说出利用比色法进行km值测定的整个操作步骤；3. 思考km值的测定对临床工作中的意义。 一一 、原理、原理v=vmax skm + s米米- -曼氏方程解释：曼氏方程

2、解释：当当sskmkm时，时，v v vmaxvmax ss /km/km， 即即v v正比于正比于ss当当sskmkm时，时，v vmaxv vmax, , 即即ss 而而v v不变不变 km值：值：当酶反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度，单位是moll。 km值最小的底物称为该酶的最适底物也就是天然底物。km + svmax sv2vmax=km=s= 底物（脲液） 酶（脲酶液） 酶促反应所需的缓冲液（pbs，蒸馏水等） 酶促反应发生的环境（碱性条件，加入naoh；温度，37） 1. 操作中每种试剂务必摇匀 2. 煮沸脲液时注意试管口不能对人，变性脲酶液要煮沸变性彻底3. 试管一定要

3、清洗干净，防止其他残留液体对实验的影响4. 各组试管加样注意一致性，防止人为加样造成的误差。重复测值，取平均数值 实验操作管号1234对照脲液加入体积(ml)0.20.1340.10.080.081/15pb（ml）0.60.6660.70.7200.720脲酶液（ml）0.20.20.20.2-煮沸脲酶液（ml）-0.2 摇匀 ，37度水浴15min100g/l znso40.50.50.50.50.5蒸馏水333330.5mol/l naoh0.50.50.50.50.5滤液/ml11111蒸馏水/ml22222显色液/ml0.750.750.750.750.75充分摇匀，静置5min，过滤，分别在滤液中加入以下试剂 迅速摇匀，用迅速摇匀，用721型分光光度计，型分光光度计，420nm，以对照调零，测定各管以对照调零，测定各管a值值。 酶促反应有什么特点？ 测定酶促反应特征常数km值有意义？思考

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