尿样中氧氟沙星的含量测定ppt课件

1、尿样中氧氟沙星的含量测定尿样中氧氟沙星的含量测定 组员：胡帆、周凡漪实验目的：实验目的：1.1.分析临床上广泛用于治疗泌尿系统，呼吸分析临床上广泛用于治疗泌尿系统，呼吸系统感染的药物氧氟沙星。系统感染的药物氧氟沙星。2.2.比较比较LC-UVLC-UV与与LC-LC-荧光分析氧氟沙星的区别。荧光分析氧氟沙星的区别。背景资料：背景资料： 氧氟沙星是第三代喹诺酮类新型广谱抗菌氧氟沙星是第三代喹诺酮类新型广谱抗菌药药,并具分布广并具分布广,吸收好吸收好,半衰期长等特点半衰期长等特点,临临床广泛应器具有广谱抗菌作用。床广泛应器具有广谱抗菌作用。尿样采集：尿样采集： 受试者空腹饮水受试者空腹饮水200m

2、l200ml排尿排尿, , 留取留取1h1h后后尿样作空白尿样作空白, ,一次口服一次口服OFLXOFLX片片600 mg, 600 mg, 搜搜集集1 1，2 2，3 3，4 4，5 5小时后的尿样，做好标小时后的尿样，做好标志。志。LC-UVLC-UV法分析尿样中氧氟沙星的含量法分析尿样中氧氟沙星的含量一、实验条件：一、实验条件：1.1 实验仪器实验仪器 Agilent高效液相色谱仪，高效液相色谱仪，G1314B-VWD紫紫外检测器，色谱柱，量瓶外检测器，色谱柱，量瓶1.2 实验试剂实验试剂 氧氟沙星片剂，甲醇氧氟沙星片剂，甲醇(色谱纯色谱纯)，尿样，空白，尿样，空白尿样，尿样，HAc溶液

3、溶液 1.3色谱条件 色谱柱:C18 5m (250 mm 416 mm) 流动相: 甲醇/0.05 %HAC=80：20 流速:1ml/min 进样量：20l 柱温：室温 检测波长：在250400nm处扫描，选取有最大吸收度处作为检测波长。实践过程中选用294nm作为检测波长。二、实验方法二、实验方法2.1 尿液的预处置 取空白尿样和尿样，13000r/min离心10min，取上清液经0.45m的水相滤膜过滤，保管滤液。 2.2 氧氟沙星规范液的配制 精细称取氧氟沙星片剂200 mg ,置50ml容量瓶中,以流动相稀释至刻度,配成4.0 mg/ml的贮藏液，用流动相稀释400倍，汲取20l作

4、为进样品。 2.3 规范曲线的制造 测定时，取规范液0.5，1，1.5，2，2.5ml,用流动相稀释于10ml量瓶，汲取20l作为进样品，记录色谱图，以氧氟沙星规范浓度对峰面积进展回归，得到回归方程。2.4 空白尿样的配制 取空白尿液滤液1ml,用流动相稀释20倍，汲取20l作为进样品。2.5 尿样的配制 取尿液滤液1ml,用流动相稀释20倍，汲取20l作为进样品。2.6 进样 先进1针规范品察看流动相配置能否适宜,适宜后,进1针空白尿样察看有无杂质在测定波优点影响左氧氟沙星的吸收,然后进样规范品与待测样品,规范品进样5针来检验仪器精细度。2.7回收率实验 取浓度为0.5，1，1.5 g/ml

5、的氧氟沙星尿样，称取氧氟沙星规范品，配置为一样浓度，经过峰面积比值，测定回收率。2.8精细度实验 取浓度为0.52.5g/ml的氧氟沙星规范品，1d内反复测定5次,测得日内RSD，隔日测定5 次, 测得日间RSD。紫外检测测定尿液中左氧氟沙星的含量 紫外检测测定尿液中左氧氟沙星的含量，实验操作方法除检测器设定与荧光检测器不同外检测波长：294nm，其他设置和操作均与荧光检测时一样。三、实验结果三、实验结果 荧光法测定尿样中左氧氧氟沙星浓度规范曲线图紫外法测定尿样中左氧氟沙星浓度规范曲线图精细度日内、 日间RSD 丈量荧光法 日内RSD=2.6% 日间RSD=3.3%紫外法 日内RSD=0.8%

6、 日间RSD=2.9%回收率实验 回收率 荧光 98.7%、101.4%、101.2%； 紫外 99.6%、98.4%、99.1%。荧光法测定尿样中排出左氧氟沙星量g-时间曲线 紫外检测测定尿样中排出左氧氟沙星量g-时间曲线 荧光法测定尿样中排出左氧氟沙星的累计量g-时间曲线 紫外检测测定尿样中排出左氧氟沙星的累计量g-时间曲线 讨论 1、采用LC-UV法与LC-荧光法分别测定尿样中氧氟沙星的含量，并且比较两种方法丈量结果的不同，因此要求丈量过程具有对照性：待测样品，规范品，空白样品的浓度两者均一样，流动相也一样，都采用外标法，但由于分析方法的不同，检测波长不同。 2、实验中所采用的尿液由于新

7、颖尿液，假设无法做到这点，因在尿液中参与二甲苯等防腐剂，防止尿液因细菌繁衍呵斥混浊，影响实验效果。而且尿样中的药物会分解，影响实验结果，因此最好是现取，实验过程中不运用时放入冰箱保管 3、由于没有规范品对照，在测定时以左氧氟沙星片作为规范品运用。而事前没有对其中左氧氟沙星的实践含量进展过标定，也不能排除片剂中的其他成分如辅料中的抗氧化剂等对实验结果的影响。 4、实验本来应该统计每次的尿液量，计算出每次排尿中含有的左氧氟沙星的含量，然后制的排出药物量-时间曲线，由于本次实验中没有精细的容器量尿液体积，只能大约估计尿液量，测算出尿液中药物的量。 5、实验中思索到出峰时间和分别度以及实践操作的便利程

8、度，最终选择的流动相甲醇：0.05%冰醋酸溶液=80：20，但是还是有脱尾景象，在荧光检测中特别明显。 6、从实验数据，我们可以以为荧光检测器作为检测安装，灵敏度、专属性好没有杂质峰，较紫外检测器优。 规范品中左氧氟沙星出峰图紫外检测器检测min00.511.522.5mAU 050100150200250300 VWD1 A, 波长=294 nm (20080524DOX000028.D) 1.045尿样中左氧氟沙星出峰图紫外检测器检测min00.511.522.533.544.5mAU 05101520253035 VWD1 A, 波长=294 nm (20080524DOX000033.D) 1.116 2.363规范品中左氧氟沙星出峰图荧光检测法min00.511.522.533.5LU 0510152025 FLD1 A, Ex=295, Em=505 (STU20080523DOX