现代生化技术练习题——汇总(复习提纲)

1、?第一章生命大分子物质的制备?习题1作为现代生化制备的主要对象的蛋白质、核酸等生物大分子有何特点？1成分复杂：生物材料的组成极其复杂，常常包含有数百种乃至几千种化合物。有的生物大分子 在别离过程中还在不断的代谢，所以生物大分子的别离纯化方法差异极大，想找到一种适合各种生物大分 子别离制备的标准方法是不可能的。2含量甚微：许多生物大分子在生物材料中的含量极微，只有万分之一、几十万分之一，甚至几 百万分之一。别离纯化的步骤繁多，流程又长，有的目的产物要经过十几步、几十步的操作才能到达所需 纯度的要求。3 易变性易被破坏：许多生物大分子一旦离开了生物体内的环境时就极易失活，因此别离过程中 如何防止其

2、失活，就是生物大分子提取制备最困难之处。过酸、过碱、高温、剧烈的搅拌、强辐射及本身 的自溶等都会使生物大分子变性而失活，所以别离纯化时一定要选用最适宜的环境和条件。4 具经验性：生物大分子的制备几乎都是在溶液中进行的，温度、pH值、离子强度等各种参数对 溶液中各种组成的综合影响，很难准确估计和判断，因而实验结果常有很大的经验成份，实验的重复性较差，个人的实验技术水平和经验对实验结果会有较大的影响。5 均一性的相对性：生物大分子制备物的均一性即纯度的鉴定，通常只采用一种方法是不够 的，必须同时采用 23种不同的纯度鉴定法才能确定。2、生物物质制备方案的设计根本原那么是什么？生物物质的制备一般包括

3、初始阶段、中间阶段和精制阶段。在制备方法的选择上，初始阶段宜选择粗 放、分辨率低、快速、有利于缩小样品体积和减少后工序的方法，主要考虑样品量和处理速度两个指标； 中间阶段选择的方法应在考虑样品处理量的根底上适当提高分辨率。精制阶段宜选择精确、分辨率高、需 样品少的方法。在安排各种别离纯化方法的使用程序时应注意：1不适宜连续使用同一种别离纯化方法，应该交叉使用，因为每一步别离后，性质相似的物质聚在一块；2使用顺序还要考虑到有利于减少工序、提高效率。3、综合评价生物物质制备步骤方法的好坏应从哪些方面进行？每一个制备步骤方法的好坏，除了从分辨本领和重现性二方面考虑外，还注意方法本身的回收率和纯 化倍

4、数，特别是制备某些含量很少的物质时，回收率的上下十分重要。因此综合评价试验方案的优劣应从 分辨本领、重现性、回收率和纯化倍数等方面进行。一个好的制备方法应该使纯化倍数和收得率都同时有较大提高。但在实际过程中，随纯化倍数的提高,收得率是逐渐降低的。 因此应该根据材料的来源难易 难一一收得率优先考虑，易一一纯化倍数优先考虑 和制备物的目的等方面来综合评定方法的优劣。4、 利用下表中的方案制备长春花Strictosidine合成酶，现已测得各步骤总蛋白和总活力结果，试完成下表。步骤1粗抽提液总蛋白(mg)654总活力(n Kat)5.2比活力(n Kat/mg )产率%2硫酸铵沉淀4665.13 D

5、EAD纤维素柱层析38.73.94羟基磷灰石柱层析5.93.8(5) Sephadex G-75凝胶柱层析0.722.06等点聚焦0.080.55、提取生物活性物质时，活性保护性措施有哪些?提取一些具有生理活性的物质时，除了考虑被提取物溶解度外，还应考虑被提取物活性的保护。对于一些生物大分子如蛋白质、酶和核酸来说，主要措施有如下几点：1采用缓冲系统；2参加保护剂;3抑制水解酶的破坏；4其它一些特殊要求的保护措施。6、蛋白质、DNA和RNA的常用提取方法有哪些？1 蛋白质和酶的提取方法：水溶液提取、有机溶剂提取2DNA的提取方法：浓盐法、阴离子去污剂法、苯酚抽提法、水抽提法3RNA的提取方法：苯

6、酚法、去污剂法和盐酸胍法。7、 提取组织中的胰岛素时，为什么采用68%乙醇溶液用草酸调溶液的pH为2.53.0为溶剂进行提取。胰岛素可溶于稀酸、稀碱和稀醇溶液，但在组织中与其共存的糜蛋白酶对胰岛素有极高的水解活性，采用68%乙醇溶液用草酸调溶液的 pH为2.53.0进行提取，可以从下面三个方面抑制了糜蛋白酶的 水解活性： 68 %的乙醇可以使糜蛋白酶暂时失活； 草酸可以除去激活糜蛋白酶的Ca+ ; 选用pH2.53.0,是糜蛋白酶不宜作用的pH值。?第二章常用生物化学检验技术?习题1蛋白质的化学物理检测方法主要有哪些？各方法的根本原理是什么？紫外吸收法：苯丙氨酸、 酪氨酸、色氨酸等氨基酸在 2

7、80nm波长左右具有紫外吸收，且吸光度与其浓 度成线性，根据此性质可用于蛋白质的定量测定。凯氏定氮法：该法根据一般蛋白质含氮量为16%的特点，将样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。 然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白 质的含量。双缩脲法：双缩脲在碱性溶液中与Cu2+结合生成紫色络合物，这一呈色反响称为双缩脲反响。蛋白质分子中的肽键类似双缩脲结构，故亦能呈双缩脲反响。在一定的浓度范围内，颜色深浅与蛋白质含量呈 线性关系。蛋白质浓度越高，体系的颜色越

8、深。反响产物在540nm处有最大光吸收。福林酚试剂法：Folin-酚试剂由试剂 A和试剂B两局部组成。在 Folin-酚试剂法中，蛋白质中的肽键 首先在碱性条件下与酒石酸钾钠 -铜盐溶液试剂 A 起作用生成紫色络合物类似双缩脲反响。由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸的存在，该络合物在碱性条件下进而与试剂B 磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成形成蓝色复合物，其呈色反响颜色深浅与蛋白质含量成正比。考马斯亮蓝法：考马斯亮蓝 G-250 存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。考马斯亮蓝G-250 在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在 465nm ，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm 。2、糖类的

9、化学检测方法主要有哪些？兰爱农 Lane-Eynon 法、斐林试剂快速法 GB 法、碘量法、铜试剂法、高锰酸钾法3、核酸的化学检测方法主要有哪些？ 定磷法、二苯胺法和地衣酚法4、凯氏定氮法的根本原理是什么？其主要操作步骤包括哪些？该法中参加硫酸钾和硫酸铜的作用是什 么？原理： 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化， 使蛋白质分解， 其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出， 而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以标准盐酸 或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。主要操作步骤：消化、蒸馏、滴定 参加硫酸钾可以提高溶液的沸点而加快有机物的分解，硫酸

10、铜主要作为催化剂，同时可以指示消化终 点的到达。5、放射自显影技术的根本原理是什么？其原理是将放射性同位素如14C和3H标记的化合物导入生物体内，经过一段时间后，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，经一定时间的放射性曝光，组织中的放射性即可使乳胶感光。然后经过 显影、定影处理显示复原的黑色银颗粒，即可得知标本中标记物的准确位置和数量。6. 生物检测内容主要有哪些？平安性检测包括哪些内容？生物检测内容主要包括生物效价测定和平安性试验。 平安性检测主要包括毒性试验、 局部刺激性试验、 溶血实验、热原试验、过敏试验和变异原试验。7. 兰-爱农法测定糖类的根本原理是什么？兰-爱农法是指以次甲基蓝作为

11、指示剂，直接将复原糖滴定到斐林试剂中进行测定的方法。 斐林试剂中的酒石酸钾钠铜氧化复原糖分子中的游离羰基，本身被复原氧化亚铜红色沉淀。由于次甲基蓝氧化能力比 二价铜弱，待二价铜全部复原后，过量 1 滴复原糖使次甲基蓝复原，蓝色消失而达滴定终点。?第三章 电泳技术?习题1、什么是电渗现象？其对电泳过程有何影响 液体在电场中，由于支持介质外表可能会存在一些带电基团，吸附一些带相反电荷的离子，在电场的 作用下向电极方向移动，形成介质外表溶液的流动，这种现象就是电渗。如果电渗方向与电泳方向相同，那么加快电泳速度；如果电渗方向与电泳方向相反，那么降低电泳速度。2、现有电泳技术按照原理及支持介质的不同，分

12、为哪几类？ 按原理不同可分为：移动界面电泳、区带电泳、等电聚焦电泳和等速电泳 按支持介质形状不同可它为：薄层电泳、板电泳和柱电泳。3、蛋白质在不连续 PAGE 中实现别离的根本原理是什么？不连续 PAGE 电泳体系中由于缓冲液离子成分、 pH 、凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电 场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应，还具有浓缩效应，故别离效果比连续系统更好。(1 )样品浓缩效应：凝胶孔径的不连续性：浓缩胶为大孔胶，别离胶为小孔胶。在电场作用下， 样品颗粒在大孔胶中泳动的阻力小，移动速度快；当进入小孔胶时，受到的阻力大，移动速度减慢。因而 在两层凝胶交界处，样品迁移受阻而压缩成很窄的区带

13、。缓冲体系离子成分及pH值的不连续性： HCI在任何 pH 溶液中均易解离出 (Cl-) ，在电场中迁移率快，走在最前面称为快离子。在电极缓冲液中，除有Tris夕卜，还有甘氨酸(glycine)，其pl=6.0 ,在pH8.3的电极缓冲液中，易解离出甘氨酸根 (NH2 CH2COO-)， 而在 pH6.7 的凝胶缓冲体系中，甘氨酸解离度仅有 0.1%-1%，因而在电场中迁移很慢，称为慢离子。当进 入pH8.9的别离胶时，甘氨酸解离度增加。电位梯度的不连续性：电泳开始后，快离子的快速移动会在 其后形成一个离子强度很低的低电导区，使局部电位梯度增高，将蛋白质浓缩成狭窄的区带。( 2)分子筛效应：大

14、小和形状不同的蛋白质通过一定孔径别离胶时，受阻滞的程度不同而表现出不 同的迁移率，这就是分子筛效应。(3)电荷效应：在 pH8.9 的别离胶中，各种带净电荷不同的蛋白质有不同的迁移率。净电荷多，那么 迁移快； 反之，那么慢。因此，各种蛋白质按电荷多少、相对分子质量及形状，以一定顺序排成一个个区 带，因而称为区带电泳。4、SDS-PAGE 测定蛋白分子量的原理是什么？由于 SDS 带有大量负电荷， 当其与蛋白质结合时， 所带的负电荷大大超过了天然蛋白质原有的负电荷， 因而消除或掩盖了不同种类蛋白质间原有电荷的差异，使蛋白质均带有相同密度的负电荷，因而主要利用 蛋白分子量的差异而将各种蛋白质分开，

15、因此根据未知蛋白和标准系列蛋白的移动距离可测定出未知蛋白 的分子量。5、 蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA 琼脂糖凝胶电泳中，凝胶浓度与被别离分子的大小有何关系？聚丙烯酰胺凝胶浓度越大，允许通过的蛋白分子越小；琼脂糖凝胶浓度越大，允许通过的DNA 片段短。6、某同学在进行 SDS-PAGE 时，发现电压很高而电流却很低，试分析其原因，并提出处理措施。这种现象主要是由于电泳槽没有正确装配，电流未形成通路。包括：a.内外槽装反；b.外槽液过少；c.电泳槽底部的绝缘体未去掉(比方倒胶用的橡胶皮)。处理方法：电泳槽正确装配即可。7、琼脂糖凝胶电泳缓冲液中一般需要参加适量的EDTA ，其目的是什么？目的

16、是螯合 Mg2+ 等离子，防止电泳时激活 DNA 酶，此外还可防止 Mg2+ 离子与核酸生成沉淀。8、琼脂糖凝胶电泳的电泳缓冲液常用的有哪些？各有何特点？TAE 是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量 TBE 中电泳 时测出的相对分子质量会大于实际分子质量 ，且双链线状 DNA 在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约 10% ,电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的别离效果，此外，回收DNA片段时也宜用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳如过夜不可选用，除非有循环装置使两极 的缓冲液得到交换。TBE的特点是缓冲能力强， 长时间电

17、泳时可选用 TBE，并且当用于电泳小于 1kb的片段时别离效果更 好。 TBE 用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐 复合物而使 DNA 片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。TPE 的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出，所以也不宜在回收DNA 片段的电泳中使用。9、温度梯度凝胶电泳测定 DNA 点突变的原理是什么？一个特定的 DNA 片段有其特有的序列组成，其序列组成决定了其解链区域和解链行为。一个几百个 碱基对的 DNA 片段一般有几个解链区域，每个解链区域有一段连续的碱基对组成。当温度逐渐升高到达 其最低的解链区域温度

18、时，该区域这一段连续的碱基对发生解链。当温度再升高依次到达各其他解链区域 温度时，这些区域也依次发生解链。直到温度到达最高的解链区域温度后，最高的解链区域也发生解链， 从而双链 DNA 完全解链。不同的双链 DNA 片段因为其序列组成不一样，所以其解链区域及各解链区域 的解链温度也是不一样的。当它们进行 DGGE/TGGE 时，一开始温度或变性剂浓度比拟小，不能使 双链 DNA 片段最低的解链区域解链，此时 DNA 片段的迁移行为和在一般的聚丙烯酰胺凝胶中一样。然 而一旦 DNA 片段迁移到一特定位置，其温度或变性剂浓度刚好能使双链DNA 片段最低的解链区域解链时，双链 DNA 片段最低的解链

19、区域立即发生解链。局部解链的 DNA 片段在胶中的迁移速率会急剧 降低。因此，同样长度但序列不同的 DNA 片段会在胶中不同位置处到达各自最低解链区域的解链温度， 因此它们会在胶中的不同位置处发生局部解链导致迁移速率大大下降，从而在胶中被区分开来。如果不同 DNA 片段的序列差异发生在最高的解链区域时 ，可在 DNA 片段的一端参加一段富含 GC 的 DNA 片段 以防止 DNA 片段在胶中完全解链。当加了 GC 夹子后， DNA 片段中根本上每个碱基处的序列差异都能 被区分开。10、什么是 IEF-PAGE ？以 PAG 为电泳支持物，并在其中参加两性电解质载体 carrier amphol

20、 ytes ，在电场作用下，两性电解 质载体在凝胶中移动，形成 pH 梯度，蛋白质在凝胶中迁移 至其 pI 的 pH 处，即不再泳动而聚焦成带，这 种方法称聚丙烯酰胺等电聚焦电泳 isoelectric focusing-PAGE,简释IEF-PAGE。11、试通过与高效液相色谱、普通电泳方法的比拟，说明毛细管电泳的特点。CE 和高效液相色谱法 HPLC 相比 , 其相同处在于都是高效别离技术 , 仪器操作均可自动化 , 且二者 均有多种不同别离模式。二者之间的差异在于：CE用迁移时间取代 HPLC中的保存时间，CE的分析时间通常不超过 30min, 比 HPLC 速度快；对 CE 而言 ,

21、从理论上推得其理论塔板高度和溶质的扩散系数成正比 , 对扩散系数小的生物大分子而言 ， 其柱效就要比 HPLC 高得多； CE 所需样品为 nl 级， 最低可达 270fl， 流 动相用量也只需几毫升,而HPLC所需样品为 级,流动相那么需几百毫升乃至更多；但 CE仅能实现微量 制备,而HPLC可作常量制备。CE 和普通电泳相比 , 由于其采用高电场 , 因此别离速度要快得多； 检测器那么除了未能和原子吸收及红 外光谱连接以外,其它类型检测器均已和 CE实现了连接检测；一般电泳定量精度差,而CE和HPLC相近； CE 操作自动化程度比普通电泳要高得多。12、综合题：请结合本课程与?生物化学?课

22、程知识，对蛋白质分子量测定方法、含量测定方法、等电点 测定方法、纯度鉴定方法作一小结。略第四章 生物传感器?习题1、什么是生物传感器？生物传感器是由固定化的具有分子识别功能的生物材料、换能器和信号处理放大装置组成的分析工具或系统。2、生物传感器的根本组成如何？其作用是什么？生物传感器主要由三局部构成：1生物识别元件：是酶、抗原 体 、细胞器、组织切片和微生物细胞等生物分子经固定化后形成的一种膜结构，对被测定的物质有选择性的分子识别能力。2换能器：能将识别元件上进行的生化反响中消耗或生成的化学物质，或产生的光或热等转换为电信号的装置，在一定 条件下，产生的电信号强度和反响中物质的变化量或光、热等

23、的强度呈现一定的比例关系。3信号处理放大装置：主要负责信号的分析处理和放大输出。3、微生物传感器分为哪些类型？分为两类：好气性微生物传感器、厌气性微生物传感器4、生物传感器的固定方法有哪些？主要有夹心法、吸附法、包埋法、共价连接法、交联法、微胶囊法等。5、论述题：论述生物传感器在发酵工业、食品、生物工程、医学和环境监测等领域中的应用略6、论述题：谈谈你对生物传感器今后开展趋势的认识。略第五章 生物芯片?习题1、什么是生物芯片？ 生物芯片又称为生物微阵列 Bio- micro array, 是将大量的 DNA 、寡核苷酸探针、多肽或蛋白质密集 排列在固相介质上，实现生物信息的大规模检测。2、何谓

24、基因芯片？ 基因芯片系指将大量核酸探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针 分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。3、基因芯片的工作原理是什么？ 基因芯片的工作原理主要包括三方面： 锚定：将大量基因片段以微阵列方式固定在支持物上，其密度很高 捕获：待测样品用荧光染料标记制成探针，当探针与芯片上的靶基因杂交而被捕获。 识别：经严格洗涤，除去未杂交或局部配对的探针 DNA 分子，用荧光检测仪定量分析杂交信号强度， 由于探针与靶基因完全配对的产生的荧光信号强度比含一个或两个错配碱基的杂合分子高数十倍，因而精 确测定信号即可实现检测的特异性。4、基因芯片的制作方

25、法有哪些？ 主要有原位合成法和合成点样法两种。5、什么是蛋白质芯片？蛋白质芯片 , 又称蛋白质阵列或蛋白质微阵列，是指以蛋白质分子作为配基,将其有序地固定在固相载体的外表形成微阵列；用标记了荧光的蛋白质或其它分子与之作用，洗去未结合的成分，经荧光扫描等检 测方式测定芯片上各点的荧光强度，来分析蛋白之间或蛋白与其它分子之间的相互作用关系。6、蛋白质芯片的制作方法有哪些？ 制备蛋白质芯片的方法主要有 3 种：共价键结合法、凝胶垫结合法和吸附固定法。7、论述题：根据你的理解，谈谈基因芯片或蛋白质芯片在社会领域的应用。略?第六章 DNA 序列测定?习题1、DNA 测序的方法有哪些？经典的方法主要有 S

26、anger 双脱氧链终止法和 Maxam-Gilbert DNA 化学降解法；较新的方法有：杂交 测序法、质谱法、单分子测序法、原子探针显微镜测序法、流式细胞仪测序法、 PCR 法和 DNA 芯片法。2、 Sanger 双脱氧链终止法测定 DNA 序列的原理是什么？DNA的合成总是从5端向3端进行的。DNA的合成需要模板以及相应的引物链。 DNA的合成过程中， 在合成的DNA链的3'末端，依据碱基配对的原那么，通过生成新的 3', 5'磷酸二酯键，使 DNA链合成终 止，产生短的 DNA 链。具体测序工作中，平行进行四组反响，每组反响均使用相同的模板，相同的引物以及四种

27、脱氧核苷酸；并在四组反响中各参加适量的四种之一的双脱氧核苷酸，使其随机地接入DNA链中，因为缺少一个形成 磷酸二酯键 所必需的3'-0H而使DNA链合成终止，产生相应的四组具有特定长度 的、不同长短的DNA链。这四组DNA链再经过聚丙烯酸胺凝胶电泳按链的长短别离开，经过放射自显影显示区带，就可以直接读出被测DNA的核苷酸序列。3、Sanger双脱氧链终止法测定 DNA序列需要哪些构件元素？质粒载体系统、引物、 DNA模板、DNA聚合酶、放射性标记 dNTP、dNTP类似物如ddNTP4、采用Sanger双脱氧链终止法测定某 DNA序列时，电泳谱图如下列图所示，请写出该DNA序列。GAT

28、C121110987654321AGTCCGTAGATT5、化学降解法测定 DNA序列的原理是什么？化学裂解法的原理是用化学试剂在A、G、C、T处特定地裂解DNA片段，产生一簇各种长度的短链，经过PAGE和放射自显影后，可以直接读出 DNA的顺序。常用的化学试剂及其断裂的碱基位置主要有：1硫酸二甲酯使鸟嘌呤 G甲基化，再加哌啶在加热的条件下使 G脱落；2硫酸二甲酯使鸟嘌呤 G甲 基化，加甲酸使 AG完全分开，再加哌啶使 A脱落；3用肼和哌啶使 T和C断裂；4用2mol/L氯化 钠加肼，只断裂Co6、化学降解法测定 DNA序列的根本步骤是什么？1 将DNA的末端之一进行标记通常为放射性同位素32

29、P； 2在多组互相独立的化学反响中分别 进行特定碱基的化学修饰；3在修饰碱基位置化学法断开 DNA链；4采用聚丙烯酰胺凝胶电泳将 DNA 链按长短分开，根据放射自显影显示区带，读出DNA的核苷酸序列。7、 采用化学降解法测定某 DNA序列时，电泳谱图如下列图所示，请写出该DNA序列。CjG+AT+CC1211109S7654321AGTCCGTAGATT?第七章标记?习题1何为标记？常用的标记物有哪些？标记是指以共价键方式将放射性元素或非放射性物质结合到某些生命物质上的过程。常用的标记物主要包括放射性物质和非放射性物质，放射性标记元素如3H、14C、32P、35S、1251等；非放射性物质如地

30、高辛、生物素、酶、荧光素等。2、双链DNA探针标记的方法有哪些? 随机引物引导法 切口平移法3、列举一种核酸标记的新方法，并说明其特点。扫假设仑标记：扫假设仑psoralen是一种天然的三环化合物，其带有胺活性基团衍生物可用来标记多种 核酸如DNA、RNA、PCR产物和寡核苷酸等。用其制成的探针灵敏度高可达fg级别。扫假设仑标记为非酶促反响，是用波长320400nm的紫外光照射，引起光循环反响，使带胺基的扫假设仑以三环平面形式 插入核酸分子，并以共价键结合形成探针，DNA和RNA时，共价键结合的位置分别在dT和U处；探针中扫假设仑衍生物的含量与核酸中胸苷dT 或尿苷U的含量成正比关系。分子灯塔

31、探针：一种新的非核素化合物标记，用于检测特别序列核酸的核酸探针。标记化合物类似灯 塔，由25个核苷酸组成，灯中间环形的15个核苷酸与靶 DNA是互补序列，灯竿一端的 5个核苷酸与另一端的5个核苷酸是互补，在 5'和3'端分别耦合一种荧光素发光剂和非荧光素熄灭剂。分子灯塔探针的熄灭剂可吸收发光剂发射的能量。在室温条件下，分子灯塔的构型可确保发光剂和熄灭剂紧密互补 结合，致使荧光基团处于熄灭状态，无荧光产生；一旦当灯塔探针的15个核苷酸与靶 DNA或RNA序列杂交时，其发光剂和熄灭剂便相互别离，产生荧光。4、说明蛋白质金标记方法的原理、种类和用途。原理：借助金粒的电子密度特征，用其

32、与抗体偶联后，可成功地置显微镜下观察胶体金颗粒。分类：根据金粒子大小，一般分为 5 nm、10 nm和20 nm三种。用途：5nm粒子容易渗透到细胞膜， 使细胞间染色，适用于电子显微镜准确定位抗原。l0nm粒子较大，可使细胞外表染色，适用于光学显微镜观察。20nm粒子可用于免疫印迹和某些细胞和组织化学免疫染色。?第八、九章气液相色谱法?习题1什么是色谱法？是利用混合物不同组分在固定相和流动相中分配系数或吸附系数、渗透性等的差异，使不同组分在作相对运动的两相中进行反复分配，实现别离的分析方法。2、色谱法按流动相物理状态和别离原理可分为哪些类型？按流动相物理状态可分为气相色谱、液相色谱和超临界流体色谱。按别离原理可分为吸附色谱、分配 色谱、离子色谱和凝胶色谱。3、色谱峰的区域宽度通常可用哪些参数表示？标准偏差 厂半峰宽、峰底宽度。4、什么是保存时间？什么是保存体积？色谱分析中，试样从进样到柱后出现峰极大点时所经过的时间，称为保存时间。色谱分析中，试样从 进样到