皮质醇cortisol作业指导书

1、文件编号：LAB OP- MY020第4页，共4页版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书Elecsys E 170/E 411皮质醇(cortisol)1. 分析原理采用竞争法原理，整个过程 18分钟完成。第1步：20 g l标本与生物素化的抗皮质醇抗体和钉(Ru)标记的皮质醇衍生物混匀，分别形成复合物，数量取决于标本中待测物的浓度。生物素化的抗皮质醇抗体一部分与标本中待测物结合，另一部分与Ru标记的皮质醇衍生物结合。第2步：加入链霉亲和素包被的微粒。形成的复合物通过生物素、链酶亲和素之间的反应结合到微粒上。第3步：反应混和液吸到测量池中，微

2、粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。2. 标本要求血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素、EDT或枸橼酸钠抗凝均可。其中用枸橼酸钠抗凝的血浆，测定结果需+10%标本在2 8度可稳定5天，-20度可稳定3个月。只能冻融一次。含沉淀的标本使用前需离心。不要加热灭活标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。注意：由于皮质醇在血中的含量呈现昼夜的周期性变化，应注明采血时间。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：

3、M链霉亲和素包被的微粒(透明瓶盖)，1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力：470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。R1:生物素化的羊抗皮质醇抗体(灰盖)，1瓶，9ml。浓度90ng/ml，ME缓冲液0.1mol/l ，pH6.0。含防腐剂。R2： Ru(bpy) 32+ 标记的皮质醇-多肽(黑盖)，1瓶，9ml。浓度 25 ng/ml，达那唑(dan azol ) 20mg/ml，ME缓冲液 0.1mol/l ， pH6.0。含防腐剂。校准品：Elecsys 皮质醇定标液(Cortisol CalSet )货号 11875124质控品：Elecsys 通用质控品(Prec

4、iControl Universal) 1 和2货号 11731416其他所需材料：Elecsys2010 、cobas e411 分析仪需要«Elecsys 系统缓冲液(ProCell )货号 11662988«Elecsys 测量池清洗液(CleanCell )货号 11662970 Elecsys 添加剂液(SysWash 货号 11930346« Elecsys 系统清洗液支架(Adapter for SysClean)货号 11933159« Elecsys 2010 反应杯(Assay Cup)货号 11706802« Elecsy

5、s 2010 吸样头(Assay Tip) 货号 11706799MODULAR ANALYTICS E170 分析仪需要«Elecsys 系统缓冲液(ProCell M )货号 04880340« Elecsys 测量池清洗液(CleanCell M )货号 04880293« Elecsys系统缓冲液/测量池清洗液预热杯(PC/CC-Cup货号03023141Elecsys E 170/E 411.Elecsys 反应杯 / 吸样头盒（AssayCups/AssayTips Combimagazine M） 货号 12102137.Elecsys 废物盒（wa

6、steliner） 货号 03023150 Elecsys 系统清洗液支架（SysClean Adapter M） 货号 03027651各种分析仪均适用的材料4 Elecsys标本通用稀释液 货号11732277* Elecsys 系统清洗液（SysClean ） 货号 112985004. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产 Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批皮质醇试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用Elecsys Cortisol CalSet定标液定标。定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册2

7、4小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求：Elecsys2010 、E170和 cobas e 分析仪： 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。5. 操作步骤（以E 170为例）5.1校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在 Application Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时， 只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入Calibration Status菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK建）或两点定标（TWGPOINT键

8、）、跨距定标（SPAN建）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最 后点SAVE将定标物放入在 Calibration Calibrator中定义好的位置，点 Start，再点Start，仪器开始定标。在Calibration Status菜单中看定标结果，点 Calibration Result键看定标结果，点 Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2样本检测程序：单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection ，在Sequenee No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目点 SAVE建，样本号自动累加。批

9、量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequenee No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目点REPEAT输入该批标本的最后一个标本号，点0K即可。进样分析，将标本按在 Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内，按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点 START键，仪器自动开始推架检测标本。6. 质量控制Elecsys通用质控品（PreciControl Universal） 1和2以及其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的

10、具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采 取校正措施。7. 计算方法对每一个标本，仪器会自动计算皮质醇含量，单位是nmol/l，1 g/dl或口 g/l。换算方法n mol/l x 0.03625 =1 g/dl （x 0.3625 =1 g/l）gg/dl x 27.586 = nmol/l （ gg/l x 2.7586）8. 参考范围血清和血浆:Elecsys E 170/E 411上午时间 7-10 am : 171-536 nmol/l (6.2-19.4g/dl) (n=144)下午时间 4-8 p.m. : 64-340 nmol/l (2.3-12.3

11、g/dl) (n=137)尿中游离皮质醇：100-379 n mol/24 h (36-137g/24 h)唾液:上午 8-10 a.m.: < 19.1 n mol/L (< 0.69gg/dL)下午 2:30-3:30 p.m.: < 11.9 n mol/L (< 0.43gg/dL)如有必要，各实验室应自己测定一个正常值范围9. 分析性能1.001750 nmol/l 或 0.036 63 g g/dl高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。建议1:10稀释。稀释后的标本皮质醇含量必须高于50nmol/l或1.8 gg/dl。如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。如果

12、是机器自动稀释，机器会自动计算结果。10. 干扰因素该方法不受黄疸（胆红素60mg/dl ）、溶血（血红蛋白1.9g/dl ）、脂血（脂质2700mg/dl ）和生物素60ng/ml等干扰。 接受高剂量生物素（5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（1100U/ml）。17种常用药物经试验对本测定无干扰。偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体以及其它免疫反应的干扰。怀孕、使用避孕药和雌激素治疗会导致皮质醇测定结果不准确。在使用泼尼松龙、甲基泼尼松龙或泼尼松治疗的患者会出 现假性皮质醇升高。美替拉酮试验可导致11脱氧皮质醇升高，由于交叉反应也可出现假性皮质醇升

13、高。患21羟基酶缺损的病人，体內21脱氧皮质醇升高，因而可出现皮质醇升高。在分析结果时，应考虑采血时间，另外严重的应激反应也导致皮质醇升高。Elecsys皮质醇测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。11. 临床意义皮质醇（氢可的松）是最主要的糖皮质类固醇，对维持人体的多项机能有重要作用。与其它糖皮质类固醇激素一样，皮质 醇由共同前体胆固醇在肾上腺皮质区合成而来。在外周血中，90%勺皮质醇与皮质类固醇结合球蛋白（CBG以及白蛋白结合后进行运输。皮质醇最重要的的生理机能是升高血糖，抗炎和免疫抑制作用。皮质醇的合成和分泌受下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的负反馈机制的调节。当皮质醇水平下降时，下丘脑分泌促肾上腺皮 质激素释放激素（CRH，使垂体分泌促肾上腺皮质激素（ACTH，并由ACT陳0激肾上腺合成并分泌皮质醇。皮质醇本身对垂 体和下丘脑起负反馈作用。另外，机体在应急状态下，皮质醇分泌增加。皮质醇在血中的含量呈现昼夜的周期性变化。在清晨 含量达到最高峰（700nmol/l或25.4mg/dl ），随后在白天含量逐渐下降，到夜间含量降到最低点，大约是峰值的一半。因此， 在分析结果时，了解采血时间是很重要的。检