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文档简介

1、;.1外泌体提取Exosome 分离需知注意：分离 exosome 前的样品不能加入任何 RNA 保护剂（如 Trizol，RNA later）；已经分离好的外泌体样本如果需要进行电镜观察，只能冰上或4保存，存放时间不超过两天，注意不可冷冻保存，否则可能会影响电镜观察效果。1. 血清样品（不能加抗凝剂）（1）干燥管采血后，轻轻将全血滴入洁净的 EP 管或者离心管；（2）4 度下静置 34 小时，可见血块析出（也可放置 4 度冰箱过夜）；（3）5000 rpm，4 度离心 10min，可见淡黄色血清，取出上清后可再 3000rpm 4度离心 10min，以最大程度保证血清质量。（4）将血清分装，

2、送样前可冻存于-80 度。提示：一般高通量测序或者蛋白质组学需要 4mL （全血10ml）以上2. 血浆样品(不能用肝素抗凝)1) 用采血针和抗凝管（含 EDTA）抽取全血，混匀；2) 4 度下静置 34 小时（也可放置 4 度冰箱过夜），5000 rpm，4 度离心 5min，取上清即为血浆；3) 可将血浆分装，送样前可冻存于-80 度。提示：一般高通量测序或者蛋白质组学需要 4mL （全血10ml）以上3. 细胞上清需要提前预备的实验材料：去除 exosome 的血清（自己制备或购买）1) 培养皿的细胞汇合率达到 80%90%2) 把原有培养基吸掉，加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行）进行消

3、化；3) 细胞变圆后加入等体积的含正常血清培养基终止消化；4) 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来；5) 1100rpm，离心 5 分钟；6) 吸掉上清液，用无 exosome 血清的培养基清洗细胞一次；7) 1100rpm，离心 5 分钟；8) 吸掉上清液，加入无 exosome 血清的培养基，悬浮细胞；9) 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中（ 收集上清时细胞汇合率为60%80%），继续培养；10) 培养 48h72h 后，收集细胞上清；11) 2000 rpm，离心 10min，然后 10000 rpm, 30min, 去除细胞或者细胞碎片，取上清即可。提示：送样量最好 20mL 以上;.2外泌体鉴定Nanosight（NTA）电镜电镜测粒径大小测粒径大小测颗粒形态测颗粒形态有风险！有风险！因为标本各异，提取因为标本各异，提取出外泌体进行电镜检出外泌体进行电镜检测可能无法得到典型测可能无法得到典型的图片的图片;.3外泌体组学检测二代测序二代测序蛋白质组蛋白质组Lable free、

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