微生物大小与数量测定

1、微生物数量的测定微生物数量的测定 1明确血细胞计数板计数的原理2掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 微生物个体生长的时间较短，很快进入分裂繁殖阶段，个体生长难以测定。它们的生长一般以繁殖即群体生长作为微生物生长的指标。群体生长表现为细胞数目的增加或细胞物质的增加。测定数目的方法有显微镜直接计数法、平板计数法、光电比浊法等。 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。 酵母菌液酵母菌液 显微镜、血球计数器显微镜、血球计数器 3. 盖玻片、毛细管等盖玻片、毛细管等4-2血球计数板是一块特制的载玻片，有

2、四条竖槽和一条横槽。横槽两边的平台上各有一个有九个大方格的方格网，中间大方格为计数室：边长为mm，深为0.1mm，容积为0.1mm3(10-4ml)。计数室有两种规格：一是分为16个中方格，每中方格中有25个小方格；另一种是分为25个中方格，每中方格有16个小方格。两种都共有400个小方格。4-2血 球 计 数 板 正 面 结 构 图计 数 室 放 大 图16小格 25大格计数室 25小格 16大格计数室 计数室的两种刻度形式一.酵母菌数量的检测（显微镜直接计数法）l 注意事项: 取样时先要摇匀菌液;加样时计数室不可有气泡产生。B. 调节显微镜光线的强弱适当。 1. 取清洁无油的血球计数板，在

3、计数室上面加盖玻片。取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。 2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。自行渗入，计数室内不得有气泡。 3. 静止静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。 4. 在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，然后求得每在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上个中格的平均值。乘上16（或（或25）就得出一大格中的总菌数，）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每最后再换算到每mL菌液中

4、的含菌数。菌液中的含菌数。 5. 计算方法：计算方法： 6. 注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和右侧线上注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时，若芽体和母体同的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时，若芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。等大，就按单个酵母计数。 7. 计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。 （X1+X2+X3+X4+X5）5X 25（或（或16）X 10 X 1000 x 稀释倍数稀释倍数 酵母

5、菌细胞数酵母菌细胞数/mL=1 1、结果记录：、结果记录： 将计数结果记录下表。A表示五个中方格中的总菌数。B稀释倍数为102。注注:1 mL菌液总数菌液总数=A/525104B=5107A细菌大小的测定细菌大小的测定 l学习测微尺的使用和计算方法l利用测微尺测量微生物的大小 微生物个体生长的时间较短，很快进入分裂繁殖阶段，个体生长难以测定。它们的生长一般以繁殖即群体生长作为微生物生长的指标。群体生长表现为细胞数目的增加或细胞物质的增加。测定数目的方法有显微镜直接计数法、平板计数法、光电比浊法等。 微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要在显微镜下

6、，借助于特殊的测量工具即测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。 酵母菌液酵母菌液 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺 3. 载玻片、盖玻片、接种环、胶头吸管等载玻片、盖玻片、接种环、胶头吸管等注意事项：注意事项：观察时光线不宜过强,否则难以找到镜台测微尺的刻度;换高倍镜和油镜校正时,务必十分小心,防止接物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。1.测微尺的校正（标定）：测微尺的校正（标定）： 两重合线间镜台测微尺格数10目镜测微尺每格长度(m)= 两重合线间目镜测微尺格数2酵母菌大小的测定：酵母菌大小的测定： 利用制好的血球器浸片，用高倍镜测出宽和长各占目镜测微尺的格数，再将测到的格数乘以目镜测微尺（用高倍镜时标定的）每格所代表的长度，即为酵母菌的实际大小。（1）将目镜测微尺校正结果填入下表）将目镜测微尺校正结果填入下表: 接目镜放大倍数：接目镜放大倍数：-10-(2)(2)将酵母菌大小测定结果填入下表：将酵母菌大小测定结果填入下表：2.2.思考题