分解纤维素的微生物的分离公开课PPT学习教案

1、会计学1分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离 公开课公开课一、基础知识一、基础知识 第1页/共31页第2页/共31页 纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，植物每年产生的纤维素超过质，植物每年产生的纤维素超过7070亿吨，其中亿吨，其中40%-60%40%-60%能被土壤中能产生纤维素酶的微生物能被土壤中能产生纤维素酶的微生物所利用，不会大量积累。所利用，不会大量积累。 在草食性动物等的消化道内，也在草食性动物等的消化道内，也共生有共生有分解纤维素的微生物分解纤维素的微生物，其原理也是产生纤维，其原理也是产生纤维素酶而分解纤维素，而人没有分解纤维素

2、的素酶而分解纤维素，而人没有分解纤维素的能力。能力。第3页/共31页纤维二糖纤维二糖C C1 1酶、酶、CxCx酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶葡萄糖葡萄糖纤维素纤维素第4页/共31页CX酶：酶：内切酶，使纤维素断裂成片断。内切酶，使纤维素断裂成片断。C1酶：酶：外切酶，从糖链末端开始切掉两个葡萄糖外切酶，从糖链末端开始切掉两个葡萄糖 分子，产生纤维二糖分子，产生纤维二糖葡萄糖苷酶：葡萄糖苷酶：将纤维二糖分解成葡萄糖。将纤维二糖分解成葡萄糖。第5页/共31页取二支取二支20mL20mL的试管的试管实验：纤维素酶分解纤维素的实验实验：纤维素酶分解纤维素的实验 滤纸崩溃法滤纸崩溃法各加入一张滤纸条各加入一

3、张滤纸条各加入各加入pH4.8pH4.8，物质量为，物质量为0.1mol/L0.1mol/L的醋酸醋酸钠缓冲液的醋酸醋酸钠缓冲液1111mlml和和1010mlml甲甲 乙乙在乙试管中加入在乙试管中加入1 1mLmL纤维素酶纤维素酶两支试管固定在锥形瓶中，放在两支试管固定在锥形瓶中，放在140r/min140r/min的摇床上振荡的摇床上振荡1h1h结果：乙试管的滤纸条消失结果：乙试管的滤纸条消失 讨论讨论：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是：乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？什么？第6页/共31页实验分析：实验分析：P P2727的小实验是如何构成对的小实验是如何构成对

4、照的？照的？第7页/共31页 刚果红刚果红能与能与纤维素形成红色复合物纤维素形成红色复合物，而不与，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。 （二）纤维素分解菌的筛选（二）纤维素分解菌的筛选 当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合红色复合物物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红- -纤维纤维素的复合物就无法形成，培养基中就会出现素的复合物就无法形成，培养基中就会出现以以纤维素分解菌为中心的透明圈纤维素分解菌为

5、中心的透明圈，这样我们就可，这样我们就可以通过以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。第8页/共31页第9页/共31页 请你根据实验流程图和提供的三个资料以及请你根据实验流程图和提供的三个资料以及“操作操作提示提示”，在思考有关问题的基础上，设计出一个详细的，在思考有关问题的基础上，设计出一个详细的实验方案。实验方案。土壤取样土壤取样选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释 将样品涂布在鉴别纤将样品涂布在鉴别纤 维素分解菌的培养基上维素分解菌的培养基上 筛选产生透筛选产生透 明圈的菌落明圈的菌落第10页/共31页 生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素生物与环境的互相依

6、存关系，在富含纤维素的环境中的环境中纤维素分解菌的含量相对提高纤维素分解菌的含量相对提高，因此从，因此从这种土壤中这种土壤中获得获得目的微生物的目的微生物的几率要高几率要高于普通环于普通环境。境。第11页/共31页将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境适宜环境。一般应将滤纸埋于深约。一般应将滤纸埋于深约10cm10cm左右的左右的土壤中。土壤中。第12页/共31页 第13页/共31页培养基成分分析培养基成分分析 培养基组成培养基组成 提供主要的营养物质提供主要的营养物质纤维

7、素粉纤维素粉 5g 碳源（能源）碳源（能源）NaNO3 1g 氮源、无机盐氮源、无机盐KCl 0.5g Na2HPO47H2O 1.2gKH2PO4 0.9g MgSO4 7H2O 0.5g 无机盐无机盐酵母膏酵母膏 0.5g生长因子、碳源、氮源生长因子、碳源、氮源水解酵素水解酵素 0.5g氮素、生长因子氮素、生长因子溶解后，蒸馏水定容至溶解后，蒸馏水定容至1000mL水水第14页/共31页提示：自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择提示：自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤或者将纤维素改为葡萄糖。维素

8、改为葡萄糖。有选择作用，本配方中纤维素作为主要碳源，只有能有选择作用，本配方中纤维素作为主要碳源，只有能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。分解纤维素的微生物可以大量繁殖。第15页/共31页第16页/共31页第17页/共31页比较项目比较项目分解尿素的细菌分解尿素的细菌纤维素分解菌纤维素分解菌选选择择培培养养基基原理原理培养基培养基类型类型目的目的鉴鉴定定培培养养基基原理原理现象现象方法方法将细菌涂布在只有将细菌涂布在只有尿素尿素做氮源的选择做氮源的选择培养基上培养基上将细菌涂布在只有将细菌涂布在只有纤维素粉纤维素粉做碳源的做碳源的选择培养基上选择培养基上固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基筛

9、选菌株筛选菌株选择培养选择培养第18页/共31页思考：本实验的流程与课题思考：本实验的流程与课题2 2中的实验流程有哪中的实验流程有哪些异同？些异同？ 本实验流程与课题本实验流程与课题2 2的流程的区别如下。课的流程的区别如下。课题题2 2是将土样制成的菌悬液直接涂布在是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素以尿素为唯一氮源的选择性培养基上，直接分离为唯一氮源的选择性培养基上，直接分离得到得到菌落。本课题通过菌落。本课题通过选择培养，使纤维素分解菌选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，得到增殖后，再将菌液涂布在选择培养基上。再将菌液涂布在选择培养基上。其他步骤基本一致。其他步骤基本一致。 第19页/

10、共31页101102103104105106第20页/共31页第21页/共31页培养基组成培养基组成提供的主要营养物质提供的主要营养物质CMC-Na 510g碳源碳源酵母膏酵母膏 1g碳源、氮源、生长因子碳源、氮源、生长因子KH2PO4 0.25g无机盐无机盐土豆汁土豆汁 100mL碳源、生长因子碳源、生长因子琼脂琼脂 15g凝固剂凝固剂上述物质溶解后，加蒸上述物质溶解后，加蒸馏水定容至馏水定容至1000mL氢元素、氧元素氢元素、氧元素鉴别纤维素分解菌的培养基鉴别纤维素分解菌的培养基(水溶性羧甲基纤维素钠水溶性羧甲基纤维素钠)第22页/共31页第23页/共31页第24页/共31页比较比较项目项

11、目分解尿素的细菌分解尿素的细菌纤维素分解菌纤维素分解菌选选择择培培养养原理原理培养基类培养基类型型目的目的鉴鉴定定培培养养基基原原理理现现象象方方法法在细菌分解尿素的化学反应在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，的碱性增强，pHpH升高。在培升高。在培养基中加入养基中加入酚红指示剂酚红指示剂，如，如果果pHpH升高指示剂会升高指示剂会变红变红刚果红刚果红可以与纤维素形成可以与纤维素形成红色复合物红色复合物，当纤维素被，当纤维素被纤维素酶催化分解后红色纤维素酶催化分解后红色复合物无法形成，培养基复合物无

12、法形成，培养基上就会出现以纤维素分解上就会出现以纤维素分解菌为中心的菌为中心的透明圈透明圈观察菌落周围是否有观察菌落周围是否有着色的着色的环带环带出现来鉴定尿素分解菌出现来鉴定尿素分解菌观察菌落周围是否出现观察菌落周围是否出现透明圈透明圈来筛选纤维素分解菌来筛选纤维素分解菌脲酶检测法脲酶检测法刚果红染色法刚果红染色法第25页/共31页方法一中方法一中NaCl溶液的作用？溶液的作用？思考：思考： 漂洗作用漂洗作用，洗去与纤维素结合不牢的刚果红，洗去与纤维素结合不牢的刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。用这方法可以判断酶以免出现的透明圈不够清晰。用这方法可以判断酶活力的大小，实际上刚果红是结合到培养

13、基的多糖活力的大小，实际上刚果红是结合到培养基的多糖底物，但分解纤维素的细菌可以产生纤维素酶，能底物，但分解纤维素的细菌可以产生纤维素酶，能分解这个多糖底物成为单糖，这样刚果红就不能结分解这个多糖底物成为单糖，这样刚果红就不能结合上去了，氯化钠溶液就可以使结合不牢的刚果红合上去了，氯化钠溶液就可以使结合不牢的刚果红洗去，这样就留下大大小小的透明圈，大的透明圈洗去，这样就留下大大小小的透明圈，大的透明圈当然分解纤维素的能就强！当然分解纤维素的能就强！ 第26页/共31页第27页/共31页 1.1.培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落出菌落 对

14、照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。明培养基制作合格。 如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。了分解纤维素的微生物。 2.2.分离的结果是否一致分离的结果是否一致 由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌的数量，因此最容易分离得到的是细菌。但由于所取的数量，因此最容易分离得到的是细菌。但由于所取土样的环境不同，不同同学也可能得到真菌和放线菌土样的环境不同，不同同学也可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。等不同的分离结果。第28页/共31页所产生的所产生的_ _ 含量进行定量含量进行定量测定。测定。发酵产纤维素酶发酵产纤维素酶 液体液