甾体激素类药物的分析(2)课件

1、甾体激素类药物的分析(2)1药物分析Xiangnan University第十五章第十五章: : 甾体激素类药物甾体激素类药物的分析的分析甾体激素类药物的分析(2)2基基 本本 要要 求求1掌握本类药物的化学结构、特征官能团与分析方法的关系。2掌握高效液相色谱法、紫外分光光度法、四氮唑比色法、异烟肼比色法、Kober反应比色法等含量测定方法。3熟悉本类药物常用的鉴别试验和特殊杂质的检查方法。甾体激素类药物的分析(2)3甾体激素类药物的分析甾体激素类药物的分析甾体激素类药物甾体激素类药物环戊烷并多氢菲母环戊烷并多氢菲母核的激素类药物核的激素类药物Steriod Hormones甾体激素类药物的分

2、析(2)4甾体激素类药物的分析甾体激素类药物的分析1.甾体激素是在研究甾体激素是在研究哺哺乳动物乳动物内分泌系统内分泌系统时发时发现的内源性物质现的内源性物质发现发现史史2.1932年年至至1939年年间，从间，从腺体腺体中获得中获得雌酮雌酮(1932)、雌二醇雌二醇(1932)、睾酮睾酮(1935年年)及及皮质皮质酮酮(1939)等的纯品等的纯品结晶结晶。 3.随后，发明用随后，发明用薯蓣皂甙薯蓣皂甙(Diosgenin)为原料进行为原料进行半合成半合成生产甾体药物，使生产规模扩生产甾体药物，使生产规模扩大，成本降低大，成本降低 4.发现发现肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素治疗治疗风风湿性关节炎

3、湿性关节炎及其在及其在免疫调节免疫调节上上的重要价值，使甾体药物成为的重要价值，使甾体药物成为医院中不可缺少的药物医院中不可缺少的药物 5.甾体口服甾体口服避孕药避孕药的研究成功，的研究成功，使人类生育控制达到了新水平使人类生育控制达到了新水平 甾体激素类药物的分析(2)51234甾体激素类药物的分析(2)61234567891011121314151617ABCD母体母体结构结构甾体激素类药物的分析(2)718181918192120母体衍母体衍生结构生结构甾体激素类药物的分析(2)8甾体激素甾体激素肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素性激素性激素雄性激素及蛋雄性激素及蛋白同化激素白同化激素孕激素孕

4、激素雌激素雌激素分类分类药理作用药理作用甾体激素类药物的分析(2)9一、肾上腺皮质激素OHOOHOCH2OHHHH311172021氢化可的松(hydrocortisone)OHOOHOHFHOCH3OHCH3醋酸地塞米松(dexamethasone acetate)16-甲基21-酯化17-羟基9-氟3-酮1,2-双键11-羟基20-酮甾体激素类药物的分析(2)10OCH3OHHCH3HFHHOOOH3CCH3CH3OO本类药物结构特征本类药物结构特征A环环4-3-酮基酮基,为为共轭体系共轭体系,在波长在波长240nm附近有紫附近有紫外吸收外吸收,部分药物部分药物在在C1-C2之间有双之间有

5、双键键,也有紫外吸收也有紫外吸收甾体激素类药物的分析(2)11OCH3OHHCH3HFHHOOOH3CCH3CH3OO本类药物结构特征本类药物结构特征C17位上为位上为-醇酮醇酮基基,具有还原性具有还原性.多数多数药物有药物有C17-羟基羟基,部分药物部分药物-醇羟基醇羟基与酸成酯与酸成酯.甾体激素类药物的分析(2)12OCH3OHHCH3HFHHOOOH3CCH3CH3OO本类药物结构特征本类药物结构特征部分药物的部分药物的C6或或C9位由卤素取代位由卤素取代,呈相呈相应的卤化物反应应的卤化物反应甾体激素类药物的分析(2)13OCH3OHHCH3HFHHOOOH3CCH3CH3OO本类药物结

6、构特征本类药物结构特征部分药物部分药物C11位上有位上有羟基或酮基取代羟基或酮基取代甾体激素类药物的分析(2)14二、雄性激素及蛋白同化激素CH3HHCH3HOHCH3O甲睾酮(methyltestosterone)OOHHHHOCH3丙酸睾酮(testosterone propionate)OOHHHHO苯丙酸诺龙(nandrolone phenylpropionate)17-17-羟基羟基作用更强作用更强吸收减缓吸收减缓甾体激素类药物的分析(2)15CH3HHCH3HOHCH3O甲睾酮(methyltestosterone)A环环4-3-酮基酮基C17位上为羟基位上为羟基,部部分药物的羟基

7、被酯化分药物的羟基被酯化雄性激素上的母核为雄性激素上的母核为19个个碳原子碳原子,蛋白同化激素在蛋白同化激素在C10位上一般无角甲基位上一般无角甲基,母母核只有核只有18个碳原子个碳原子二、雄性激素及蛋白同化激素本类药物结构特征本类药物结构特征甾体激素类药物的分析(2)16三、孕激素三、孕激素COHHHCH3O黄体酮(progesterone)CH3OCH3OCH3OHHHO醋酸甲地孕酮(megestrol acetate )乙酰氧基，乙酰氧基，具口服活性具口服活性C17C17位位-羟孕酮类羟孕酮类甾体激素类药物的分析(2)17OHCH3HOHHH炔诺酮(norethisterone)H3C左

8、炔诺孕酮左炔诺孕酮三、孕激素三、孕激素C19C19位去甲睾丸酮类位去甲睾丸酮类甾体激素类药物的分析(2)18三、孕激素COHHHCH3O黄体酮(progesterone)A环环4-3-酮基酮基C17位上有甲酮基位上有甲酮基或乙炔基或乙炔基.多数在多数在C17位上有位上有羟基羟基,部分药物的部分药物的羟基被酯化羟基被酯化甾体激素类药物的分析(2)19四、雌性激素HOHHHOHCH3HstradiolHOHHCH3HthyinylestradiolCOHCH甾体激素类药物的分析(2)20四、雌性激素HOHHHOHCH3Hstradiol有些药物在有些药物在C17位位上有乙炔基上有乙炔基,构成构成1

9、9-去甲孕甾烷母核去甲孕甾烷母核A环为苯环环为苯环,C3位位上有酚羟基上有酚羟基,有的有的药物药物C3位上的酚位上的酚羟基成酯羟基成酯C17位上有羟基有位上有羟基有些药物些药物C17位羟基位羟基成酯成酯.甾体激素类药物的分析(2)21种类主要活性基团4-3-酮C17-醇酮基4-3-酮C17-羟基4-3-酮C17-甲酮基C17-乙炔基A环为3-OH苯环 UV、与重氮苯磺酸盐反应C17-乙炔基C17-羟基与硝酸银反应可成酯可成酯UV、与羰基试剂反应与亚硝基铁氰化钠反应与硝酸银反应UV、与羰基试剂反应性质还原性UV、与羰基试剂反应肾上腺皮质激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素总结如下总结如下甾体激

10、素类药物的分析(2)22u 物理常数的测定物理常数的测定u 化学鉴别法化学鉴别法u 制备衍生物测定熔点制备衍生物测定熔点u UVu IRu TLCu HPLC理化性质与鉴别试验理化性质与鉴别试验甾体激素类药物的分析(2)23一、物理常数的测定1.1.熔点熔点HO+COClKOHCOO+KCl+H2O炔雌醇炔雌醇m.p.201OCCH3O+2HONH2NCHOCH3NOH+2H2O黄体酮黄体酮双肟m.p.238甾体激素类药物的分析(2)24苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙缩氨基脲缩氨基脲m.p.178185分解分解OCOCH2CH2OC6H5+NH2CNHNH2OHClNCH2NOH+H2O+HAcOCOC

11、H2CH2N+H2OOHO+CH3CH2COOHOCOCH2CH3OKOH丙酸睾丸素丙酸睾丸素m.p.150156甾体激素类药物的分析(2)25甾体激素类药物的分析(2)26二、化学鉴别法2.比旋度比旋度3.吸收系数吸收系数与强酸的呈色反应与强酸的呈色反应官能团的反应官能团的反应1.与强酸的呈色反应与强酸的呈色反应甾体激素类药物硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸呈色甾体激素类药物的分析(2)27与硫酸显色反应与硫酸显色反应 显显 色色 荧光荧光 加水稀释加水稀释泼尼松龙泼尼松龙 深红深红 絮状絮状灰灰泼尼松泼尼松 橙橙 黄黄蓝绿蓝绿炔雌醚炔雌醚 橙红橙红 黄绿黄绿 红色红色 炔雌

12、醇炔雌醇 橙红橙红 黄绿黄绿 絮状絮状玫红玫红醋酸可的松醋酸可的松 黄或微黄或微 褪色并澄褪色并澄 带橙带橙 清清甾体激素类药物的分析(2)282.官能团的反应官能团的反应 C C1717-醇酮基醇酮基还原性还原性A. 呈色反应呈色反应C17-醇酮基四氮唑盐OH-呈色B. 沉淀反应沉淀反应C17-醇酮基氨制硝酸银银镜反应C17-醇酮基碱性酒石酸铜Cu2OOHOOHOCH2OHHHH甾体激素类药物的分析(2)29 C C3 3酮基和酮基和C C2020酮基酮基甾酮类甾酮类2,4-2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼呈色呈色异烟肼、硫酸苯肼异烟肼、硫酸苯肼OOHNCONHNH2HClCONHNOHN异烟腙

13、（黄色）异烟腙（黄色）睾酮睾酮C ON H NCC H3N H N OCNN异烟双腙（黄色）异烟双腙（黄色）OCCH3O2NCONHNH2HCl黄体酮黄体酮甾体激素类药物的分析(2)30 甲酮基或活泼亚甲基甲酮基或活泼亚甲基亚硝基铁氰化钠间二硝基酚/芳香醛呈色COCH3O NOCNFe OHH2O2+-4Fe5CNNOCHCOO蓝紫色蓝紫色黄体酮黄体酮专属鉴别反应专属鉴别反应甾体激素类药物的分析(2)31黄体酮黄体酮蓝紫色蓝紫色亚硝基铁亚硝基铁 氰化钠氰化钠其他甾体其他甾体淡橙色或淡橙色或不显色不显色甾体激素类药物的分析(2)32有机氟有机氟F有机破坏有机破坏有机氯有机氯Cl有机有机卤素卤素茜

14、素氟蓝茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸亚铈硝酸硝酸硝酸银硝酸银AgCl 呈蓝紫色呈蓝紫色 甾体激素类药物的分析(2)33 乙炔基乙炔基RCCHAgNO3RCCAgOHCCHHO炔雌醇炔雌醇3AgNOOHCCAgHO白白 酯基酯基 酚羟基酚羟基雌激素类重氮苯磺酸红色偶氮染料甾体激素类药物的分析(2)34-3-3-酮、酮、苯环苯环、其他共轭结构、其他共轭结构结构依据结构依据240nm240nm左右左右280nm左右左右三、UV甾体激素类药物的分析(2)35结构特征：酚羟基、结构特征：酚羟基、C C17 17 OHOH C C17 17 乙炔基乙炔基炔雌醇炔雌醇OHCCHHO四、IR甾体激素类药物的分析(2)

15、361505cm-1OH 3505cm-13300cm-1CH CC 1590cm-13610cm-1OH 酚羟基酚羟基醇羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨苯环的骨架振动架振动甾体激素类药物的分析(2)37黄体酮黄体酮COHHHCH3O结构特征：结构特征：-3-3-酮、酮、C C1717- -酮基酮基四、IR甾体激素类药物的分析(2)381700cm-1 C=O20位酮基位酮基1665cm-13位酮基位酮基1615cm-1870cm-1 C-H双键双键甾体激素类药物的分析(2)39五、五、TLCTLC法法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与

16、对照品溶液的主斑点相同。甾体激素类药物的分析(2)40 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏） 方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。六、六、HPLCHPLC法法甾体激素类药物的分析(2)41一、有关物质的检查检查方法（具有一定分离能力） TLC法（高低浓度对比法） HPLC法（类似高低浓度对比法）甾体激素类药物的分析(2)42氢化可的松氢化可的松中中其他甾体其他甾体检查检查对照品对照品60g/ml供试品供试品3.0mg/mlvCHCl3-MeOH(9:1) 溶剂溶剂v硅胶GF254v二氯甲烷-乙醚-甲醇-水v

17、385 :60 : 15 : 2385 :60 : 15 : 2v展开后晾干v105干燥10minv碱性四氮唑蓝显色（一）TLC判定方法：v 规定杂质斑点数目v 规定杂质斑点颜色甾体激素类药物的分析(2)43对照溶液0.02mg/ml供试液1 mg/ml（二）HPLC黄体酮中有关物质检查供试品溶液的杂质峰数不得超过1个，其面积不得大于对照液的主峰面积的3/4甾体激素类药物的分析(2)44二、硒的检查来源 合成中用合成中用二氧化硒二氧化硒(SeO(SeO2 2) )脱氢脱氢46SeSe盐酸羟胺氧瓶燃烧有机药物苯苯并并苯苯硒硒二二唑唑二二氨氨基基萘萘5 , 43,24 Se .pHnmA环环己己烷

18、烷三、溶剂残留甲醇和丙酮()0.3%0.5%甾体激素类药物的分析(2)45四、游离磷酸盐检查四、游离磷酸盐检查 OnHMoOPHPOHPOMoOH24103433424还原还原钼蓝钼蓝钼酸铵钼酸铵磷钼酸磷钼酸740nm，UV-Vis甾体激素类药物的分析(2)46u HPLCu UVu 比色法u 非水溶液滴定法四氮唑比色法异烟肼比色法柯柏反应比色法甾体激素类药物的分析(2)47一、HPLC对照液供试液己烯雌酚黄体酮甾体激素类药物的分析(2)48二、UV-Vis化合物结构max(nm)肾上腺皮质激素雄性激素孕激素雌激素2804-3-酮240醋酸地塞米松苯环苯环甾体激素类药物的分析(2)49三、比色

19、法 肾上腺皮质激素类有有色色甲甲瓒瓒四四氮氮唑唑盐盐醇醇酮酮基基 17COH -还原还原CC6H5NNNNC6H5C6H5+Cl2e(H)CC6H5NNNNC6H5C6H5H2,3,5-Triphenyltatrazolium chloride TTC(Red tatrazoline RT)氯化三苯四氮唑三苯甲(Formazan)深红色 max 480490nm（一）四氮唑比色法（一）四氮唑比色法 甾体激素类药物的分析(2)50N+ClOCH3N+ClOCH3NCNC6H5NC6H5NCNC6H5NC6H5NCNC6H5NHC6H5NCNC6H5NC6H5OCH3NN+ClOCH3NCNC6H

20、5NHC6H5NCNC6H5C6H5OCH3NNOCH3NH2e(H)2e(H)蓝四氮唑蓝四氮唑Blue tetrazoline BTBT-单甲BT-双甲蓝色蓝色 max 525nm甾体激素类药物的分析(2)51氢化可的松软膏的含量测定氢化可的松软膏的含量测定 精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液1ml，摇匀，各再精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在25的暗处放置40min45min，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得 影响因素基团基团溶剂与水分溶剂与水分碱碱空气中氧与光线空气中氧与光线温度与时间温度与时间甾体

21、激素类药物的分析(2)52（1）基团对反应速度的影响C11= O C17OHC21OH C21-酯酯（2） 溶剂、水分的影响含水量含水量5%含水含水10%A10%含水含水30%几无反应几无反应 无水乙醇(无醛)（一）四氮唑比色法（一）四氮唑比色法甾体激素类药物的分析(2)53（3） O2与光线的影响 反应及其产物对光敏感，避光，隔绝空气（4）碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行）条件下进行以以氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵的结果最佳的结果最佳碱碱试试液液四四氮氮唑唑盐盐皮皮质质激激素素溶溶液液（5） 温度与时间t甲甲分解分解%（一）四氮唑比色法（一）四氮唑

22、比色法室温（室温（2525）反应）反应404045 min45 min甾体激素类药物的分析(2)54( (二二) )异烟肼法异烟肼法(Isonicotinic acid hydrazide)+ONCONHNH2NCONNHINH4-3-酮Isonicotinic acid HydrazideAh160异烟肼甲醇溶解对照液供试液肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同化激素、孕激素甾体激素类药物的分析(2)55讨论讨论（1 1）反应速度）反应速度C3= O C17= O 、 C20= O ； C11= O 不反应不反应专属性强（2 2）溶剂的选择）溶剂的选择异烟肼盐酸盐异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇甲醇、乙醇

23、无水（3 3）水分、）水分、O O2 2与光线的影响与光线的影响含水量含水量腙水解腙水解A%具塞容器，不挥发溶剂、不吸收水分时具塞容器，不挥发溶剂、不吸收水分时 O2与光线与光线无影响无影响4-3-酮甲醇对试剂的稳定性好、甲醇对试剂的稳定性好、呈色强度较无水乙醇中呈色强度较无水乙醇中高、但对植物油的溶解高、但对植物油的溶解度小度小甾体激素类药物的分析(2)56(4)酸、异烟肼的量盐酸 : 异烟肼 = 2 : 1酸度 异烟肼酸度 A(5)温度t 甾体激素类药物的分析(2)57( (三三) ) Kober反应比色法反应比色法第一步呈黄色max465nm共热雌激素H2SO4 乙醇H2O or 稀H2

24、SO4稀释再加热第二步桃红色max515nmOHCH3O SOHCH3CH3O SOHCH3CH3O甾体激素类药物的分析(2)58第二步反应515465450 500 550 nmAKober 反应吸收光谱第一步反应采用本法测定炔雌醇片及复方炔诺酮片、复方炔诺孕酮采用本法测定炔雌醇片及复方炔诺酮片、复方炔诺孕酮滴丸、复方左炔诺孕酮片中的炔雌醇的含量滴丸、复方左炔诺孕酮片中的炔雌醇的含量甾体激素类药物的分析(2)59加入铁酚试剂加入铁酚试剂(NH4)2Fe(SO4)2 + H2SO4 + H2O2 + 苯酚苯酚* 铁盐的作用 加快黄色产物的形成、转化 加强红色产物的稳定性* 酚的作用 加快红色产物的形成 消除反应产生的荧光Iron-phenol Reagent甾体激素类药物的分析(2)60第五节第五节 生物样本中甾体激素的分析生物样本中甾体激素的分析GC-MS:尿样尿样SPE萃取萃取衍生化衍生化GC/MS分析分析HPLC-MS:血清血清 HPLC/MS分析分析甾体激素类药物的分析(2)61练习与思考练习与思考AA型题型题 1. 1. 黄体酮的专属反