蛋白质化学2wzc组成和结构ppt课件

1、蛋白质化学选修课蛋白质化学选修课 第二章第二章 蛋白质组成和构造蛋白质组成和构造本章主要内容：本章主要内容：蛋白质分类、蛋白质分类、 氨基酸、氨基酸、 蛋白质的构造、蛋白质的构造、 蛋蛋白质结果与功能的关系白质结果与功能的关系第一节第一节蛋白质的分类蛋白质的分类1. 根据蛋白质分子外形根据蛋白质分子外形2. 根据分子组成根据分子组成3. 根据蛋白质溶解度分根据蛋白质溶解度分根据蛋白质分子外形根据蛋白质分子外形可分为可分为 球状蛋白质球状蛋白质 和和 纤维状蛋白质纤维状蛋白质球状蛋白质分子球状蛋白质分子 球状或椭圆状，溶解度较大，能球状或椭圆状，溶解度较大，能结晶，在生物体液和细胞中的蛋白质大多

2、属于这一结晶，在生物体液和细胞中的蛋白质大多属于这一类型。类型。纤维状蛋白质分子纤维状蛋白质分子 类似细棒或纤维，它们又可分类似细棒或纤维，它们又可分为可溶性纤维蛋白和不溶性纤维蛋白，前者如血纤为可溶性纤维蛋白和不溶性纤维蛋白，前者如血纤蛋白、肌肉中的构造蛋白等，后者如胶原、弹性蛋蛋白、肌肉中的构造蛋白等，后者如胶原、弹性蛋白、角蛋白等。白、角蛋白等。 简单蛋白质简单蛋白质 和和 结合蛋白质结合蛋白质 二大类。二大类。简单蛋白是指其分子中只需氨基酸组成的多肽链。简单蛋白是指其分子中只需氨基酸组成的多肽链。结合蛋白是指具有生物活性的蛋白质分子组成中结合蛋白是指具有生物活性的蛋白质分子组成中除了氨

3、基酸多肽链外，还含非氨基酸成分，生物除了氨基酸多肽链外，还含非氨基酸成分，生物体内大部分蛋白质属于此类，体内大部分蛋白质属于此类，核蛋白核蛋白 由蛋白质和核酸组成，如鱼精蛋白、小由蛋白质和核酸组成，如鱼精蛋白、小麦芽中核精蛋白等；麦芽中核精蛋白等；糖蛋白糖蛋白 是蛋白质与糖的结合物，在生物膜上、是蛋白质与糖的结合物，在生物膜上、某些酶类和动物血浆中大多数蛋白质均是糖蛋白；某些酶类和动物血浆中大多数蛋白质均是糖蛋白；2. 2. 根据分子组成可分为：根据分子组成可分为：脂蛋白脂蛋白 由蛋白质和脂类经过非共价键相连而成，由蛋白质和脂类经过非共价键相连而成，广泛存在于生物膜和动物血浆中。广泛存在于生物

4、膜和动物血浆中。色素蛋白色素蛋白 如血红蛋白、叶绿素、细胞色素类等。如血红蛋白、叶绿素、细胞色素类等。磷蛋白磷蛋白 由蛋白质和磷酸组成，磷酸往往与丝氨酸由蛋白质和磷酸组成，磷酸往往与丝氨酸或苏氨酸侧链的羟基结合，如胃蛋白酶、乳中酪蛋或苏氨酸侧链的羟基结合，如胃蛋白酶、乳中酪蛋白。白。黄素蛋白黄素蛋白 那么是蛋白质与黄素腺嘌呤二核苷酸，那么是蛋白质与黄素腺嘌呤二核苷酸，黄素但核苷酸的结合物，如琥珀酸脱氢酶。黄素但核苷酸的结合物，如琥珀酸脱氢酶。分类分类辅基辅基举例举例脂蛋白脂蛋白脂类脂类血浆脂蛋白血浆脂蛋白VLDLVLDL、LDLLDL、HDLHDL等等糖蛋白糖蛋白糖基或糖链糖基或糖链胶原蛋白、

5、纤连蛋白等胶原蛋白、纤连蛋白等核蛋白核蛋白核酸核酸核糖体核糖体磷蛋白磷蛋白磷酸基团磷酸基团酪蛋白酪蛋白caseincasein血红素蛋白血红素蛋白血红素铁卟啉血红素铁卟啉血红蛋白、细胞色素血红蛋白、细胞色素c c黄素蛋白黄素蛋白黄素核苷酸黄素核苷酸FADFAD、FMNFMN琥珀酸脱氢酶琥珀酸脱氢酶金属蛋白金属蛋白铁铁铁蛋白铁蛋白锌锌乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶钙钙钙调蛋白钙调蛋白锰锰丙酮酸羧化酶丙酮酸羧化酶铜铜细胞色素氧化酶细胞色素氧化酶3. 根据蛋白质溶解度分根据蛋白质溶解度分 清蛋白清蛋白 普通指溶于纯水或稀盐溶液中、加热易凝固、不溶普通指溶于纯水或稀盐溶液中、加热易凝固、不溶于饱和中性盐溶液中的

6、蛋白质。于饱和中性盐溶液中的蛋白质。球蛋白球蛋白 指不易溶于水，可溶于稀盐溶液，不溶于饱和或半指不易溶于水，可溶于稀盐溶液，不溶于饱和或半饱和的盐溶液；加热不全部凝固的一类蛋白。饱和的盐溶液；加热不全部凝固的一类蛋白。醇溶蛋白醇溶蛋白 那么不溶于水及盐溶液，但溶于那么不溶于水及盐溶液，但溶于70%-80%的乙醇的乙醇中。中。谷蛋白谷蛋白 指不溶于水和中性盐，只溶于稀酸稀碱溶液的一类指不溶于水和中性盐，只溶于稀酸稀碱溶液的一类蛋白。蛋白。硬蛋白硬蛋白 如角蛋白、胶原蛋白，如动物的毛、发、角、爪、如角蛋白、胶原蛋白，如动物的毛、发、角、爪、筋、骨等，它们只能在强酸、强碱溶液溶解。筋、骨等，它们只能

7、在强酸、强碱溶液溶解。第二节第二节 蛋白质的元素组成蛋白质的元素组成蛋白质分子中主要的元素组成是：蛋白质分子中主要的元素组成是：C：5055、H：6.07.0O：2023N：1516S：0.32.5其中其中N元素的含量相对稳定，约为元素的含量相对稳定，约为16%，故每克氮，故每克氮相当于相当于6.25克蛋白质。克蛋白质。微量凯氏微量凯氏Kjeldahl定氮法定氮法测定蛋白质含量测定蛋白质含量消化：消化：有机物浓有机物浓H2SO4(NH4)2SO4CO2蒸馏：蒸馏： (NH4)2SO4NaOHNa2SO4NH3H2O吸收：吸收：NH3H3BO4 NH4H2BO4滴定：滴定： H2BO4HClH3

8、BO4 Cl凯氏定氮法本卷须知凯氏定氮法本卷须知图：常量凯氏定氮消化及蒸馏安装图：常量凯氏定氮消化及蒸馏安装 a a消化安装消化安装 b b蒸馏吸收安装蒸馏吸收安装1 1、硫酸钾、硫酸钾 及硫酸及硫酸铜的作用铜的作用2 2、火候控制、火候控制3 3、安装的气密性、安装的气密性4 4、何时加碱、何时加碱5 5、难消化的、难消化的 对策对策6 6、停顿蒸馏、停顿蒸馏阐明及本卷须知阐明及本卷须知所用试剂溶液运用无氨蒸馏水配制。所用试剂溶液运用无氨蒸馏水配制。 消化时不要用强火，应坚持和缓沸腾，以免粘附在凯消化时不要用强火，应坚持和缓沸腾，以免粘附在凯氏瓶内壁上的含氮化合物未消化完全而呵斥氮损失氏瓶内

9、壁上的含氮化合物未消化完全而呵斥氮损失. .消化过程中应留意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷凝消化过程中应留意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下并促进其消化完全。酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下并促进其消化完全。样品中假设含脂肪或糖较多时，消化过程中易产生大样品中假设含脂肪或糖较多时，消化过程中易产生大量泡沫。量泡沫。当样品消化液不易廓清透明时，可将凯氏烧瓶冷当样品消化液不易廓清透明时，可将凯氏烧瓶冷却，参与却，参与30%30%过氧化氢过氧化氢2 23mL3mL后再继续加热消化。后再继续加热消化。假设取样量较大，如干试样超越假设取样量较大，如干试样超越5g5g，可按每克试，

10、可按每克试样样5mL5mL的比例添加硫酸用量何时会必要？。的比例添加硫酸用量何时会必要？。普通消化至呈透明后，继续消化普通消化至呈透明后，继续消化30min30min即可，但对即可，但对于含有特别难以氨化的氮化合物的样品，如含赖于含有特别难以氨化的氮化合物的样品，如含赖氨酸、组氨酸、色氨酸、酪氨酸或脯氨酸等时，氨酸、组氨酸、色氨酸、酪氨酸或脯氨酸等时，需适当延伸消化时间。有机物如分解完全，消化需适当延伸消化时间。有机物如分解完全，消化液呈蓝色或浅绿色，但含铁量多时，呈较深绿色。液呈蓝色或浅绿色，但含铁量多时，呈较深绿色。蒸馏安装不能漏气。蒸馏安装不能漏气。蒸馏前假设加碱量缺乏，消化液呈蓝色不生

11、成氢氧蒸馏前假设加碱量缺乏，消化液呈蓝色不生成氢氧化铜沉淀，此时需再添加氢氧化钠用量。化铜沉淀，此时需再添加氢氧化钠用量。硼酸吸收液的温度不应超越硼酸吸收液的温度不应超越4040，否那么对氨的吸，否那么对氨的吸收作用减弱而呵斥损失，此时可置于冷水浴中运用。收作用减弱而呵斥损失，此时可置于冷水浴中运用。 蒸馏终了后，应先将冷凝管下端提离液面清洗管蒸馏终了后，应先将冷凝管下端提离液面清洗管口，再蒸口，再蒸1min1min后关掉热源，否那么能够呵斥吸收液后关掉热源，否那么能够呵斥吸收液倒吸。倒吸。 混合指示剂在碱性溶液中呈绿色，在中性溶液中呈混合指示剂在碱性溶液中呈绿色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶

12、液中呈红色。灰色，在酸性溶液中呈红色。蛋白种类蛋白种类含氮含氮蛋白种类蛋白种类含氮含氮小麦蛋白小麦蛋白大麦蛋白大麦蛋白大米蛋白大米蛋白玉米蛋白玉米蛋白花生蛋白花生蛋白大豆蛋白大豆蛋白18.5818.5817.1517.1516.8116.8116.0016.0018.3218.3217.5117.51乳全蛋白乳全蛋白乳球蛋白乳球蛋白卵蛋白卵蛋白血洁白蛋白血洁白蛋白组蛋白组蛋白明胶明胶15.8715.8716.0016.0015.7615.7615.8015.8017.9017.9018.1418.14凯氏定氮法是我国国标中规定的测定蛋白质含量的凯氏定氮法是我国国标中规定的测定蛋白质含量的方法。

13、方法。假设被测样品中的氮全是蛋白氮，那么计算所得为假设被测样品中的氮全是蛋白氮，那么计算所得为真蛋白的含量，否那么计算值为粗蛋白含量。真蛋白的含量，否那么计算值为粗蛋白含量。不同蛋白质蛋白系数略有差别。不同蛋白质蛋白系数略有差别。思索题：思索题： 假奶粉的特点及其区分假奶粉的特点及其区分第三节第三节 蛋白质的分子组成蛋白质的分子组成-氨基酸氨基酸组成蛋白质的根本单位是氨基酸组成蛋白质的根本单位是氨基酸amino acidamino acid。如将。如将天然的蛋白质完全水解，最后都可得到约天然的蛋白质完全水解，最后都可得到约2020种不同的氨种不同的氨基酸。基酸。这些氨基酸中，大部分属于这些氨基

14、酸中，大部分属于L-L- -氨基酸。其中，脯氨氨基酸。其中，脯氨酸属于酸属于L-L- -亚氨基酸，而甘氨酸那么属于亚氨基酸，而甘氨酸那么属于- -氨基酸。氨基酸。 名名 称称 三字符三字符 单字符单字符 名名 称称 三字符三字符单字符单字符 丙氨酸丙氨酸alaninealanine Ala Ala A 亮氨酸亮氨酸leucineleucine Leu Leu L 精氨酸精氨酸argininearginine Arg Arg R 赖氨酸赖氨酸(lysine) (lysine) Lys Lys K 天冬酰胺天冬酰胺asparagineasparagine Asn Asn N 甲硫氨酸甲硫氨酸met

15、hioninemethionine Met Met M 天冬氨酸天冬氨酸aspartic acidaspartic acid Asp Asp D 苯丙氨酸苯丙氨酸phenylalaninephenylalanine Phe Phe F 半胱氨酸半胱氨酸cysteinecysteine Cys Cys C 脯氨酸脯氨酸prolineproline Pro Pro P 谷氨酰胺谷氨酰胺glutanineglutanine Gln Gln Q 丝氨酸丝氨酸serineserine Ser Ser S 谷氨酸谷氨酸glutamic acidglutamic acid Glu Glu E 苏氨酸苏氨酸t

16、hreoninethreonine Thr Thr T 甘氨酸甘氨酸GlicineGlicine Gly Gly G 色氨酸色氨酸tryptophantryptophan Trp Trp W 组氨酸组氨酸histidinehistidine His His H 酪氨酸酪氨酸tyrosinetyrosine Tyr Tyr Y 异亮氨酸异亮氨酸isoleucineisoleucine Ile Ile I 缬氨酸缬氨酸valinevaline Val Val V HNH2COOHRCOOHCH3HHOCOOHRHH2NL乳酸 L氨基酸COOHCH2SHHH2N氨基酸的分类氨基酸的分类 非极性疏水性

17、氨基酸非极性疏水性氨基酸 极性中性氨基酸极性中性氨基酸 酸性氨基酸酸性氨基酸 碱性氨基酸碱性氨基酸二氨基酸的分类二氨基酸的分类分类根据分类根据 ：R R侧链基团的构造及理侧链基团的构造及理 化性质的不同化性质的不同甘氨酸甘氨酸 glycine Gly G 5.97丙氨酸丙氨酸 alanine Ala A 6.00缬氨酸缬氨酸 valine Val V 5.96亮氨酸亮氨酸 leucine Leu L 5.98 异亮氨酸异亮氨酸 isoleucine Ile I 6.02 苯丙氨酸苯丙氨酸 phenylalanine Phe F 5.48脯氨酸脯氨酸 proline Pro P 6.30非极性疏

18、水性氨基酸非极性疏水性氨基酸色氨酸色氨酸 tryptophan Try W 5.89丝氨酸丝氨酸 serine Ser S 5.68酪氨酸酪氨酸 tyrosine Try Y 5.66 半胱氨酸半胱氨酸 cysteine Cys C 5.07 蛋氨酸蛋氨酸 methionine Met M 5.74天冬酰胺天冬酰胺 asparagine Asn N 5.41 谷氨酰胺谷氨酰胺 glutamine Gln Q 5.65 苏氨酸苏氨酸 threonine Thr T 5.602. 极性中性氨基酸极性中性氨基酸侧链基团在中性溶液中解离后带负电荷。侧链基团在中性溶液中解离后带负电荷。3. 酸性氨基酸酸

19、性氨基酸 Glu，Asp天冬氨酸天冬氨酸 aspartic acid Asp D 2.97谷氨酸谷氨酸 glutamic acid Glu E 3.224. 碱性氨基酸碱性氨基酸 His，Arg，Lys侧链基团在中性溶液中解离后带正电荷。侧链基团在中性溶液中解离后带正电荷。组氨酸组氨酸 His H 7.59赖氨酸赖氨酸LysK 9.74精氨酸精氨酸 Arg R 10.76另外：1 1、蛋白质中的很多氨基酸是经过加工修、蛋白质中的很多氨基酸是经过加工修 饰的饰的修饰氨基酸修饰氨基酸 如：脯氨酸如：脯氨酸 羟基化羟基化 成成 羟脯氨酸羟脯氨酸 赖氨酸赖氨酸 羟基化羟基化 成成 羟赖氨酸羟赖氨酸2

20、2、半胱氨酸、半胱氨酸CysCys常以胱氨酸的方式存在常以胱氨酸的方式存在-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3 半胱氨酸半胱氨酸 +胱氨酸胱氨酸二硫键二硫键-HH-OOC-CH-CH2-SH+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3NH2CH2COOHNH2H3CHCCOOHNH2CH(H3C)2HCCOOHNH2CHC2H5HCCOOHCH3甘氨酸甘氨酸 Gly 5.97NH2CHCOOH(H3C)2HCH2CNH2CH

21、 COOHC6H5H2CNH2CHCOOHHSH2CNH2CHCOOHH3CHCOHOH2NC(CH2)2CHCOOHNH2OH2NCCH2CHCOOHNH2天冬酰胺天冬酰胺 Asn 5.07CH3S(CH2)2CHCOOHNH2HOCH2CHCOOHNH2NHCOOHCH2CHHOCOOHNH2NHCH2CHCOOHNH2HOOCCH2CHCOOHNH2HOOC(CH2)2CH COOHNH2H2N(CH2)4CH COOHNH2CHN(CH2)2CH COOHNH2HNNH3NH2NCH2CHNH2COO 2. 假设根据假设根据 R 的化学构造不同的化学构造不同 可分为：可分为：1脂肪族氨

22、基酸：脂肪族氨基酸： 疏水性：疏水性：Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Met、 Cys； 极性：极性：Arg、Lys、Asp、Glu、Asn、Gln、Ser、Thr2芳香族氨基酸：芳香族氨基酸：Phe、Tyr3杂环氨基酸：杂环氨基酸：Trp、His4杂环亚氨基酸：杂环亚氨基酸：Pro3.假设根据氨基酸的营养特性假设根据氨基酸的营养特性必需氨基酸：必需氨基酸： 赖、蛋、亮、异亮、苯丙、赖、蛋、亮、异亮、苯丙、 色、缬、丝色、缬、丝氨酸氨酸8种；精、组氨酸。种；精、组氨酸。非必需氨基酸非必需氨基酸限制性氨基酸限制性氨基酸非限制性氨基酸非限制性氨基酸二、氨基酸的理化性质：二、氨基酸的理化性质

23、：1. 普通物理性质普通物理性质1熔点很高熔点很高 -氨基酸为无色晶体，熔点超越氨基酸为无色晶体，熔点超越200，个别超越，个别超越300。许多氨。许多氨基酸在到达熔点或接近熔点时，基酸在到达熔点或接近熔点时，或多或少地发生分解，因此熔点或多或少地发生分解，因此熔点不明显。氨基酸的熔点比普通有不明显。氨基酸的熔点比普通有机化合物高的多，主要缘由是氨机化合物高的多，主要缘由是氨基酸在晶体时也以两性离子的方基酸在晶体时也以两性离子的方式存在，类似于无机盐化合物。式存在，类似于无机盐化合物。 (2) 水中溶解度差别较大极性和非水中溶解度差别较大极性和非 极性，不溶于有机溶剂。极性，不溶于有机溶剂。

24、(3) 有不同味道；有不同味道；H3NHC COOR2两性解离及等电点：两性解离及等电点：氨基酸分子是一种两性电解质。氨基酸分子是一种两性电解质。经过改动溶液的经过改动溶液的pH可使氨基酸分子的解离形状可使氨基酸分子的解离形状发生改动。发生改动。 氨基酸分子带有相等正、负电荷时，溶液的氨基酸分子带有相等正、负电荷时，溶液的pH值称为该氨基酸的等电点值称为该氨基酸的等电点Isoelectric point, pI。 溶液溶液pH值与氨基酸等电点的关系值与氨基酸等电点的关系+H+OH-pH=pI兼性离子兼性离子 CHNH2COOHRCHNH2COOHRCHNH3+COO-RCHNH3+COO-R+

25、OH-pHpI阴离子阴离子CHNH2COO-RCHNH2COO-R+H+pHpI阳离子阳离子CHCOOHRNH3+CHCOOHRNH3+氨基酸等电点确实定：氨基酸等电点确实定：1酸碱滴定滴定曲线酸碱滴定滴定曲线2根据根据pK值该基团在此值该基团在此pH一半解离计算：一半解离计算：等电点等于两性离子两侧等电点等于两性离子两侧pK值的算术平均数。值的算术平均数。pI = pK1+pK22Or pI = pK2+pK32阐明：阐明：(1) 等电点为电中性而不是中性即等电点为电中性而不是中性即pH=7，在溶液，在溶液中参与电极时其电荷迁移为零。中参与电极时其电荷迁移为零。(2) 等电点时，偶极离子在水

26、中的溶解度最小，易结晶等电点时，偶极离子在水中的溶解度最小，易结晶析出。析出。由此可知由此可知: 等电点相当于该等电点相当于该aa两性离子形状两性离子形状两侧两侧 基团基团pK值之和的一半。值之和的一半。 A、对侧链R基不解离的中性氨基酸： pI=1/2 pK1+ pK2即：等电点pH值与离子浓度无关，只取决于兼性离子两侧基团的pK值。B、对有三个可解离基团的氨基酸：、对有三个可解离基团的氨基酸： 如：酸性氨基酸、碱性氨基酸的pI计算： a、先写出其解离公式； 原那么：一切羧基先于氨基解离；羧基优先； 氨基先于其它氨基解离。 b、后取兼性离子两侧基团的pK值的平 均值。如：天冬氨酸如：天冬氨酸

27、如赖氨酸：如赖氨酸：3 3紫外吸收性质：紫外吸收性质：天然蛋白质分子的天然蛋白质分子的2020种氨基种氨基酸，在可见光区没有光吸酸，在可见光区没有光吸收，收，在远紫外光区在远紫外光区220nm220nm均均有吸收；有吸收；在近紫外外光区，只需苯丙在近紫外外光区，只需苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸均氨酸、酪氨酸和色氨酸均有吸收光的才干，其吸收有吸收光的才干，其吸收峰在峰在280nm280nm左右，以色氨酸左右，以色氨酸吸收最强。吸收最强。由于它们由于它们的的R R基含有苯环双键共軛系基含有苯环双键共軛系统。统。以色氨酸和酪氨酸对紫外光以色氨酸和酪氨酸对紫外光有较强的光吸收。有较强的光吸收。光吸收性光吸

28、收性三种氨基酸最大吸收波长和摩尔消光系数分别为：三种氨基酸最大吸收波长和摩尔消光系数分别为：酪氨酸酪氨酸 max max275nm, 275275nm, 2751.41.4103103；苯丙氨酸苯丙氨酸 max max257nm, 257257nm, 2572.02.0102102； 色氨酸色氨酸 max max280nm, 280280nm, 2805.65.6103103；蛋白质因含有这些蛋白质因含有这些AaAa，所以也有紫外吸收才干，不同蛋白质，所以也有紫外吸收才干，不同蛋白质中这些中这些AaAa的含量不同，消光系数不完全一样。可利用此性质的含量不同，消光系数不完全一样。可利用此性质采用

29、紫外分光光度法测定蛋白质的含量。采用紫外分光光度法测定蛋白质的含量。 4。氨基酸的化学性质。氨基酸的化学性质1茚三酮反响：茚三酮反响：氨基酸可与茚三酮在微酸性溶液中共热缩合产生蓝紫色氨基酸可与茚三酮在微酸性溶液中共热缩合产生蓝紫色化合物，其最大吸收峰在化合物，其最大吸收峰在570nm。脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反响产生黄色物质。脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反响产生黄色物质。可用于氨基酸的含量测定。可利用此性质测定氨基酸的可用于氨基酸的含量测定。可利用此性质测定氨基酸的含量。几个微克就能显色。含量。几个微克就能显色。2与甲醛的反响：氨基酸的甲醛滴定法与甲醛的反响：氨基酸的甲醛滴定法RCHCOO-NH3

30、+OH-中和滴定RCHCOO-NH2+ H+HCHORCHCOO-NHCH2OHHCHORCHCOO-N(CH2OH)2酱油和啤酒中酱油和啤酒中游离氨基的含游离氨基的含量测定就是用量测定就是用此法。国标此法。国标3与与2,4-二硝基氟苯二硝基氟苯(DNFB)的反响的反响DNP-氨基酸，黄色氨基酸，黄色RNO2FO2N+ HNCHCOOHNO2O2NHNCHCOOHR+ HF弱碱性Sanger反响。反响。可用于蛋白质可用于蛋白质测序测序H2NCHCOOH + RNCH3CH3O=S=OCl5-二甲氨基萘磺酰氯二甲氨基萘磺酰氯DNS-ClpH9.7 40NCH3CH3O=S=OHNCHCOOH R

31、DNS-氨基酸氨基酸用萘磺酰氯取代用萘磺酰氯取代DNFB测定蛋白质测定蛋白质N端氨基酸，灵敏度高端氨基酸，灵敏度高4与异硫氰酸苯酯与异硫氰酸苯酯PITC的反响的反响N=C=S + NCHCOOHHHRPITCNCNCHCOOHHHRSPTC-氨基酸氨基酸NCHRSNCCOPTH-氨基酸氨基酸pH8.3无水HF反复测定多肽反复测定多肽链链N端氨基酸陈端氨基酸陈列顺序，设计列顺序，设计出出“多肽顺序多肽顺序自动分析仪自动分析仪 Edman反响反响(5) 与邻苯二甲醛反响与邻苯二甲醛反响OPA在在-巯基乙醇巯基乙醇(MCE)存在下，邻苯二甲醛存在下，邻苯二甲醛(OPA, o-Phthaldialde

32、hyde)与游离氨基酸迅速反响生成与游离氨基酸迅速反响生成1-硫代硫代-2-烷烷基异吲哚，此加成物具有荧光，从而利用荧光光度法测定游基异吲哚，此加成物具有荧光，从而利用荧光光度法测定游离氨基酸总量。离氨基酸总量。激发波长激发波长EX为为330nm、发射波长、发射波长EM为为470nm OPA最早是被作为柱后衍生试剂而引进的最早是被作为柱后衍生试剂而引进的,后来也逐渐运用后来也逐渐运用于柱前反响中于柱前反响中 CHOCHO+HSCH2OHH2N CHRCOOHCH2+NCRHCOOH SCH2CH2OH三、氨基酸的分别分析和鉴定三、氨基酸的分别分析和鉴定1。纸层析。纸层析纸层析是分别鉴定氨基酸混

33、合物的常用技术，被测样纸层析是分别鉴定氨基酸混合物的常用技术，被测样品点在滤纸的下端，滤纸垂直于底部盛有少量可溶品点在滤纸的下端，滤纸垂直于底部盛有少量可溶解被测物的混合展开溶剂的层析皿中，展开溶剂便解被测物的混合展开溶剂的层析皿中，展开溶剂便沿着滤纸向上展开。沿着滤纸向上展开。滤纸纤维素吸附的水是固定相，展层剂是流动相滤纸纤维素吸附的水是固定相，展层剂是流动相 。2。薄层层析。薄层层析 该方法是把吸附剂或支持剂该方法是把吸附剂或支持剂(如硅胶、氧化铝、硅藻如硅胶、氧化铝、硅藻土等无机物土等无机物)涂布在玻璃板上成为一薄层。涂布在玻璃板上成为一薄层。其优点是灵敏度高其优点是灵敏度高(比纸层折高

34、比纸层折高10100倍倍)、分别快、分别快(普通为几到几非常钟普通为几到几非常钟)、显色方便、显色方便(可用腐蚀性显色可用腐蚀性显色剂剂)、操作方便、设备简单。、操作方便、设备简单。 3。离子交换树脂法。离子交换树脂法广泛用于氨基酸分别分析的柱层析法。广泛用于氨基酸分别分析的柱层析法。离子交换树脂是水不溶性高分子化合物，普通制成球离子交换树脂是水不溶性高分子化合物，普通制成球形颗粒。它由具网状构造的高聚物作基质，再经过形颗粒。它由具网状构造的高聚物作基质，再经过化学反响引入酸性或碱性基团。化学反响引入酸性或碱性基团。被引入的酸性基团如一被引入的酸性基团如一SO3H(强酸型强酸型)或一或一COO

35、H(弱酸弱酸型型)可解离出可解离出H离子，与溶液中其它的阳离子交换，离子，与溶液中其它的阳离子交换，因此该树脂被称为阳离子酸性树脂。因此该树脂被称为阳离子酸性树脂。 假设树脂含有碱性基团如一假设树脂含有碱性基团如一N(CH3)OH(强碱型强碱型)或或NH3OH(弱碱型弱碱型)时，可解离出时，可解离出OH，能和溶液里的，能和溶液里的阴离子交换，该树脂叫阴离子碱性树脂。阴离子交换，该树脂叫阴离子碱性树脂。 氨基酸分析仪任务流程图 蛋白质的氨基酸组成分析蛋白质的氨基酸组成分析1.高效液相色谱法适于分析沸点高、分子量大、热稳定性差的高效液相色谱法适于分析沸点高、分子量大、热稳定性差的物质和生物活性物质

36、。物质和生物活性物质。2. 由于大多数氨基酸无紫外吸收及荧光发射特性，而紫外吸收由于大多数氨基酸无紫外吸收及荧光发射特性，而紫外吸收检测器和荧光检测器是检测器和荧光检测器是HPLC仪的最常的检测器。故人们需仪的最常的检测器。故人们需将氨基酸进展衍生化，使其可以利用紫外吸收或荧光检测器将氨基酸进展衍生化，使其可以利用紫外吸收或荧光检测器进展测定。进展测定。3.氨基酸的衍生可分为柱前衍生和柱后衍生。柱后衍生需额外氨基酸的衍生可分为柱前衍生和柱后衍生。柱后衍生需额外的反响器和泵，常用于氨基酸自动分析仪，如前文所提的茚的反响器和泵，常用于氨基酸自动分析仪，如前文所提的茚三酮反响。三酮反响。4. 在氨基酸的在氨基酸的HPLC测定中，更多的还是采用柱前衍生法，这测定中，更多的还是采用柱前衍生法，这是由于比起柱后衍生法它的优点有：是由于比起柱后衍生法它的优点有：1固定相采用固定相采