第06讲__第二章__第四节__核酸类药物的生产

1、第二章第二章 天然生物材料的提取制药天然生物材料的提取制药 p 生化药物概述生化药物概述 p 氨基酸类药物的生产氨基酸类药物的生产 p 多肽和蛋白质类药物的生产 p 核酸类药物的生产 p 酶类药物的生产 p 糖类药物的生产 p 脂类药物的生产 p 维生素和辅酶类药物的生产 2-4核酸类药物的生产 核酸知识复习核酸知识复习 核酸药物的分类核酸药物的分类 核酸类药物的生产方法核酸类药物的生产方法 核酸类药物的生产实例核酸类药物的生产实例 核酸类药物的检测核酸类药物的检测 思考题思考题 核酸知识复习核酸知识复习 一、核酸药物的分类一、核酸药物的分类 （一）、具有天然结构的核酸类物质（一）、具有天然结

2、构的核酸类物质 如：DNA、RNA、肌苷、ATP、辅酶A、脱氧核 苷酸、肌苷酸等。 获得： 微生物发酵或从生物资源中提取生产。 药理功能： 有助于改善机体的物质代谢和能量代谢平衡，加 速受损组织的修复，促使机体恢复正常生理功能。 著名企业：珍奥集团、GENTA公司 珍奥集团珍奥集团 珍奥集团始创于1996年，是一家以保健品、药品和 生物制品为核心业务，集研发、生产、销售于一体 的健康产业集团，是国家级高新技术企业。 珍奥集团位于大连市双D港，总占地面积近60万平 方米，下辖大连珍奥药业有限公司、大连珍奥生物 技术股份有限公司、上海珍奥生物科技有限公司、 大连双迪生物科技有限公司、福建珍奥核酸有

3、限、 大连珍奥进出口有限公司等六家生产型控股子公司， 现有药品、保健品、化妆品、功能性纺织品、核酸 原料、健康整水系统等7大系列400多个品种，产品 销往日本、美国、瑞士、英国、意大利、加拿大等 近20多个国家和地区。 珍奥集团珍奥集团 珍奥集团是中国最大的核酸产业化基地，是世界上唯一整合 了核苷酸上下游全产品链的核酸企业，核酸原料国内市场占 有率85%以上；珍奥核酸系列保健品经上海复旦大学、同济 大学等多家国家权威部门指定的健康相关产品评价基地人群 试食试验证实，功效确切，安全性高，产品畅销十几年不衰； 珍奥核糖核酸（RNA）是目前世界上唯一通过GMA-SAFE （美国食品生产协会-食品优秀

4、生产供方审核）认证的RNA 产品，企业已受邀参与第一个食品用核糖核酸国际标准制定； 珍奥5核苷酸完全符合FCC（美国食品化学品法典）最新版 标准要求，被多家世界顶级跨国公司用作食品添加剂，该项 目被列为国家发改委振兴东北老工业基地项目。在医药领域， 珍奥自主研发的国家一类新药注射用心肌肽是“九五” 国家重点科技攻关计划项目，“十五”国家重点科技专项 863计划，已通过四期临床，获准新药证书并全面上市。 珍奥集团珍奥集团 珍奥集团与国内外十几家科研院所及上百位科学家建立了长 期稳定的科研合作关系。包括国际免疫联合会前主席青克纳 格尔博士在内的12位诺贝尔奖得主曾走进珍奥生命园，并对 珍奥科研项目

5、和科研实验活动进行了评价和指导。截至目前， 珍奥集团拥有专利近百件，被评为“国家知识产权试点单 位”。 珍奥集团贯彻“宁失一万，不失万一”的质量方针，严 格执行健康食品和药品生产的国际安全准则，先后通过了 ISO9001国际质量管理体系认证、HACCP国际食品安全预 防控制体系认证、ISO22000国际食品安全管理体系认证、 ISO14001国际环境管理体系认证、药品和保健食品GMP等 认证。此外，珍奥还获得了美国FDA企业注册资格和产品通 关检验，以及日本厚生省健康产品准入认证。 一、核酸药物的分类一、核酸药物的分类 （二）、天然碱基、核苷、核苷酸的类似物或聚合物（二）、天然碱基、核苷、核苷

6、酸的类似物或聚合物 如：三氟代胸苷、叠氮胸苷、拉米夫定（嘧啶 类）、阿德福韦（嘌呤类）、恩替卡韦（第三代核苷 类抗乙肝病毒药物）等。 获得： 由自然结构的核酸类物质通过半合成生产。 药理功能： 治疗病毒病如乙肝、肿瘤、爱滋病的重要药物， 也是产生干扰素、免疫抑制剂的临床药物。 二、核酸类药物的生产方法二、核酸类药物的生产方法 二、核酸类药物的生产方法二、核酸类药物的生产方法 。 如需进一步的纯化，常用纯化方法如柱层析、凝胶电泳和 密度梯度超离心。 、人工合成 获取大分子核酸的另一方法是人工合成，即利用化学的方 法按照设定的核苷酸顺序逐一加入形成核酸。现已有核酸合成 仪，但合成长度还有一定限制，

7、并且该仪器价格昂贵。因此这 种方法一般用于研究，不适合生产。 二、核酸类药物的生产方法二、核酸类药物的生产方法 （三）核苷酸、核苷及碱基类似物的生产方法 酶解法、半合成法、发酵法 1、酶解法 生产酵母，从酵母中提取RNA，RNA经青霉菌属 或链霉菌属等微生物产生的酶进行酶解，制成各种核 苷酸。 2、半合成法 微生物发酵与化学合成并用。 3、直接发酵法 采用营养缺陷型菌株或营养缺陷型兼结构类似物 抗性菌株来发酵大量生产目的核苷或核苷酸。 三、核酸类药物的生产实例三、核酸类药物的生产实例 三、核酸类药物的生产实例三、核酸类药物的生产实例 2.工艺路线 抽提 猪脾脏 预处理 冷冻，绞碎 组织浆液 预

8、处理 0.1M NaCl-0.5M 柠檬酸混合液， 离心 沉淀 1.71M NaCl 上清液 （DNP） 沉淀 （DNP） 溶解液 0.14M NaCl 沉淀物 白色纤维状 DNA 10% NaCl 上清液 （DNA） 氯仿-异戊醇95%乙醇 真空干燥 三、核酸类药物的生产实例三、核酸类药物的生产实例 3.工艺过程 取鲜猪脾,去脂、血,称取10g,用预冷的1SSC溶液洗2次，剪碎。 按睥：1SSC=1; 5W/V 加入50ml预冷的1SSC，用高速组织 捣碎机破碎8次,每次5秒,中间间隔30秒。 将匀浆液放在烧杯中， 于冰盐浴中冷却30分钟。4000转/分钟离心10分 钟。充掉上清。沉淀物中再

9、加2倍体积的1SSC搅匀，离心，弃上清， 重复2次。 将所得沉淀悬于5倍体积的PH8.0、0.15MNaCL0.1Na2MEDTA溶液中。 边搅拌边漫漫滴加5%SDS最终浓度达1%为止。然后加入固体氯化钠使 其最终浓度达1mol/L，继续搅60分钟，以确保氯化钠全溶。 所得混合液倒入磨口塞的锥形瓶中，加入同体积氯仿异戊醇（24：1， 体积比），激烈振荡20分钟，4000r离心20分钟，上层水相取出后倒入 烧杯，以同积氯仿异戊醇重复去蛋白2次。 取出水相于烧杯中，逐渐加入2倍体积95%乙醇，玻棒搅动，DNA纤维 绕于璃玻棒上后挤干，用70%乙醇洗DNA纤维2次，用95%乙醇洗一次， 再用乙醚洗一

10、次，取出并挤干。 三、核酸类药物的生产实例三、核酸类药物的生产实例 三、核酸类药物的生产实例三、核酸类药物的生产实例 、RNA的提取等电沉淀法 酵母菌体 提取液抽提清液 RNA粗品RNA精品 稀NaOH，提取中和，分离 洗涤、干燥 pH2.5 三、核酸类药物的生产实例三、核酸类药物的生产实例 腺嘌呤前体 腺苷 AMP ATP 枯草杆菌160 （Smr +Try+Pur） 微生物或化学转化 微生物 三、核酸类药物的生产实例三、核酸类药物的生产实例 （四）辅酶A的生产 1.结构与性质 是ADP的衍生物或类似物，相对分子质量为 767.54. 高纯度为白色无定型粉末，具典型硫醇味， 有吸潮性，易溶于

11、丙酮、乙醚和乙醇。 兼有核苷酸和硫醇的通性，易被过氧化氢、 碘或高锰酸钾等氧化失活成二硫化物，制剂 需加稳定剂，最好充氮保存。 三、核酸类药物的生产实例三、核酸类药物的生产实例 （四）辅酶A的生产 TCA，除蛋白 新鲜猪肝 【绞碎】 肝浆 【水，提取】 提取液 滤液 GAM树脂 GAM-CoACoA浓集液LD-601-CoA CoA粉 HCl-NaCl CoA酸化液 HCl，酸化LD-601，再吸附 酸化 浓缩液 浓缩 上清液沉淀物 丙酮沉淀脱水干燥 2.生产工艺 三、核酸类药物的生产实例三、核酸类药物的生产实例 （四）辅酶A的生产 3.生化功能生化功能 提供机体能量 辅酶A是体内70多种酶反

12、应通路的辅助因子,包括糖类的 分解,脂肪酸的 氧化,氨基酸的分解,丙酮酸的降解,激发三羧酸循环,提供 机体生命所需90%的能量. 提供活性物质 辅酶A参与机体大量必需物质的合成.在脑部合成神经肌 肉信使和神经递质乙酰胆碱以及促进睡眠的褪黑激素（melatonin）等. 神经肌肉信使可在神经和肌肉之间交换资讯,神经递质可在神经和大脑之 间传递情感、外界刺激、记忆、学习等方面的资讯. 传递酰基作用 辅酶A是重要的乙酰基和酰基传递体. 激活免疫作用 辅酶A支持机体免疫系统对有害物质的解毒、激活白细胞、 促进血红蛋白的合成、参与抗体的合成. 促进结缔组织形成和修复 辅酶A能促进结缔组织成分硫酸软骨素和

13、透明 质酸的合成,对软骨的形成、保护和修复起重要作用. 其他作用 辅酶A促进辅酶Q10和辅酶I的利用,减轻抗生素及其他药物引 起的毒副作用. 四、核酸类药物的检测四、核酸类药物的检测 1、DNA含量测定 DNA是磷酸和戊糖通过磷酸二酯键形成的长链，所 以磷酸或戊糖的量正比例于DNA的量，可通过测定磷 酸或戊糖的量来测定DNA的量，前者称为定磷法，后 者称为定糖法。 （1）定磷法 磷酸与钼酸反应生成磷钼酸，再转变为钼蓝，吸收 峰在660nm。 （2）定糖法二苯胺法 酸性条件下，DNA与二苯胺共热，生成蓝色化合物， 吸收峰595nm。 四、核酸类药物的检测四、核酸类药物的检测 思考题思考题 1.核酸类药物的种类和药理功能是什么？ 2.DNA、RNA、ATP及HS-CoA的生产方法。 3.如何检测核酸类药物？ 核苷酸组分 N N N H N NH2 N N H NH2 O NH N N H N O NH2 O H H OH H OH OH H HOCH2 HOCH2 O H H