实验室样本处理及方法

1、实验室样本处理 定义 实验室样本处理 标准化地收集、保存用于各种研究的正常或病理标本，包括人体器官组织、 全血、血浆、血清、生物体液或经处理过的生物样本（DNA、RNA、蛋白等） 以及与这些生物样本相关的临床、病理、治疗、随访、知情同意等资料及其 质量控制、信息管理与应用系统。 生物样本库生物样本库 政策法规政策法规 技术标准技术标准 伦理规范伦理规范 ISO标准标准 实验室安全实验室安全 临床实验室临床实验室 伦理伦理 运输运输 标准操作规范标准操作规范 （SOPs） 质量控制标准质量控制标准 样本采集样本采集 样本处理样本处理 样本质量检验样本质量检验 样本储存样本储存 样本运输样本运输

2、DNA质量鉴定、质量鉴定、RNA质量质量 鉴定、蛋白质质量鉴定鉴定、蛋白质质量鉴定 知情同意书知情同意书 质量审查质量审查样本运输样本运输样本转移协议样本转移协议 伦理委员会伦理委员会 伦理审查伦理审查 ISO15189:2003 医学实验室质量和能力的专用要求医学实验室质量和能力的专用要求 CNAS-CL02 医学实验室医学实验室-质量和能力的认可准则质量和能力的认可准则 ISO/IEC17025:2005 检测和校准实验室能力的通用要求检测和校准实验室能力的通用要求 CNAS-CL01 检测和校准实验室认可准则检测和校准实验室认可准则 ISO9001:2008/GBT19001-2008

3、质量管理系统质量管理系统 要求要求 GB/T1.1-2009 标准化工作导则：标准的结构和编写规则标准化工作导则：标准的结构和编写规则 ISO标准标准 实验室安全实验室安全 GB 19489-2008 实验室生物安全通用要求实验室生物安全通用要求 CNAL/AC30-2005 实验室生物安全认可准则实验室生物安全认可准则 WS/T233-2002 微生物和生物医学实验室生物安全通用准则微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 GB 50346-2004 生物安全实验室建筑技术规范生物安全实验室建筑技术规范 已建立实验室生物安全管理体系 临床实验室临床实验室 GB/T 20468-2006 临床实

4、验室定量测定室内质量控制指南临床实验室定量测定室内质量控制指南 GB/T 20469-2006 临床实验室设计总则临床实验室设计总则 GB/T 20470-2006 临床实验室室间质量评价要求临床实验室室间质量评价要求 WS/T102-1998 临床检验项目分类与代码临床检验项目分类与代码 WS/T224-2002 真空采血管及其添加剂真空采血管及其添加剂 WS/T225-2002 临床化学检验血液标本的收集与处理临床化学检验血液标本的收集与处理 WS/T227-2002 临床检验操作规程编写要求临床检验操作规程编写要求 WS/T228-2002 定量临床检验方法的初步评价定量临床检验方法的初

5、步评价 WS/T230-2002 临床诊断中聚合酶链反应（临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术应用）技术应用 WS/T249-2005 临床实验室废物处理原则临床实验室废物处理原则 WS/T250-2005 临床实验室质量保证的要求临床实验室质量保证的要求 WS/T251-2005 临床实验室安全准则临床实验室安全准则 WS/T255-2005 临床检验医学参考测量实验室临床检验医学参考测量实验室 赫尔辛基宣言赫尔辛基宣言 涉及人类为研究对象的生物医学研究了国际伦理方针指南涉及人类为研究对象的生物医学研究了国际伦理方针指南 关于关于DNA序列申请专利的声明：专利序列申请专利的声明：专利 关于早

6、期发布原始序列数据有关专利申请问题的声明关于早期发布原始序列数据有关专利申请问题的声明 关于关于DNA取样的声明：控制与获取取样的声明：控制与获取 世界人类基因组与人权宣言世界人类基因组与人权宣言 涉及人体的生物医学研究伦理审查办法（试行）涉及人体的生物医学研究伦理审查办法（试行） 人类基因治疗申报临床试验指导原则人类基因治疗申报临床试验指导原则 关于利益共享的声明关于利益共享的声明 关于基因治疗的声明关于基因治疗的声明 关于人类基因组数据库的声明关于人类基因组数据库的声明 国际涉及人类的生物医学研究伦理准则国际涉及人类的生物医学研究伦理准则 人类遗传数据国际宣言纲要人类遗传数据国际宣言纲要

7、人体生物医学研究国际伦理指南人体生物医学研究国际伦理指南 伦理伦理 物流术语 液氮生物容器 中国民用航空危险品运输管理规定 危险物品航空安全运输技术细则 运输运输 组织机构 样本库管理委员 会 专家委员会 伦理委员会 样本库职能部门 样本库负责人 业务主管 质量主管 专职技术人员 所有从业人员应 取得岗前培训 考核合格证 生物样本库工作流程 标本采集标本处理入库登记标本储存质控 Yes No 销毁 废弃物处置操作程序 抽检 No Yes 标 本 使 用 使用申请 标本发放 剩余标本回收 数据库 标本采集 生物标本采集和储存 研究成功的关键 要求 根据所采样本的类型和所分析的物质而定 在采集和储

8、存过程中不能受到“污染” 储存的生物标本在任何时候进行检测都可以获得一致的结果 所有的生物标本都应有详细的背景材料和鉴别标识 标本采集 举例 尿液标本 晨尿浓缩尿，适用于尿常规检查 随机尿仅适用于门诊、急诊尿常规过筛检验 空腹尿糖尿病患者餐前尿糖测定 餐后尿 餐后两小时采集，适用于糖尿病患者病理性蛋白尿、糖 尿检查 12h尿 晚上8点排空尿液后12小时内采集的所有尿液。用于尿沉 渣计数、尿微量白蛋白排泄率测定等 12h禁水尿 晚8时开始禁饮，次日早8时排空膀胱后再次留取的尿液， 适用于尿渗透压检测 24h尿 上午8时排尽后，收集接下来24小时内排出的所有尿液， 记录总尿量，用于体内代谢产物的定

9、量检测，如尿蛋白、 尿糖、尿肌酐、尿钙、尿儿茶酚胺、检查等 培养用尿 留尿前先清洗外阴，消毒尿道口后，以无菌容器只接留 中段尿10ml，用于微生物检查 标本采集 尿液标本的保存-最好不超过2h 尿液化学物质和有形成份不稳定，排出后即开始发生物理和化学变化，如胆红素、尿胆原被氧 化，细菌生长，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破坏，葡萄糖被细菌利用而降低。 尿液保存常用方法有两种： 1.冷藏法：4条件下不超过8h 可抑制微生物生长，维持尿液pH恒定，使尿中有形成份的形态基本不变，但是可导致磷酸盐和 尿酸盐析出形成沉淀，影响尿沉渣检查。 标本采集 尿液标本的保存-最好不超过2h 尿液化学物质

10、和有形成份不稳定，排出后即开始发生物理和化学变化，如胆红素、尿胆原被氧 化，细菌生长，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破坏，葡萄糖被细菌利用而降低。 尿液保存常用方法有两种： 2.化学防腐法： 甲苯：（一般用量为1.02.0ml甲苯/100ml尿液），防止细菌污染，通常用于尿酮体、尿糖，尿 蛋白质等测定 甲醛：每100ml尿液加40%甲醛0.5ml，可抑制细菌生长并固定尿中有形成份，适用于尿液中细胞 与管型的测定； 麝香草酚：用10%的麝香草酚异丙醇溶液，达到抑菌及保护代谢物的作用，适用于尿钾、钠、钙 等测定 浓盐酸：每100ml尿标本中加入浓盐酸1ml即可，使尿液维持在pH 2.0左

11、右。主要可用于17-羟皮质 类因醇、17-酮类固醇、儿茶酚胺、VMA等定量测定等。 标本采集 样本采样本采 集操作集操作 规程规程 血液 粪便 尿液 口腔 拭子 唾液 阴道 拭子 皮肤 拭子 标本采集 标本运送 血液标本采集后应尽快从采血现场运送至实验室，注意是否存 在干扰血凝块。 标本运送过程中要注意样本的包装、温度要求及处理方法等， 要确保分析成分的稳定性，标本管在运送过程中要保持管口封 闭，向上垂直放置，避免剧烈振动 尿液标本从流取到检验应在2小时内完成，如不能及时送检分析， 必须加防腐剂或冷藏不超过8小时 细菌检查标本应采用消毒容器，防止细菌污染，室温条件不超 过2小时或4冷藏保存。

12、标本运送 标本处理和保存 标本采集后应及时处理、分装后保存 血液标本处理操作规程 DNA提取和纯化操作规程：血液、粪便、棉拭子、唾液 RNA提取和纯化操作规程：血液、棉拭子 蛋白质提取和保存操作规程 标本处理和保存 血液标本处理操作规程 全血、血清、血浆、干血片、血凝块、白细胞 血清：指全血不经抗凝处理，在凝固过程中，血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或 指纤维蛋白原已被除去的血浆 血浆：离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不含细胞成分的液体，其中含 有纤维蛋白原。 全血：由液态血浆和血细胞组成 标本处理和保存 血液标本处理操作规程 全全血标本的保存血标本的保存 生化检验

13、：尽可能在2小时内检验或分离血清/血浆，不能及时分离或检验时，应4低温冷藏， 不能超过24小时。操作时动作应轻柔，避免剧烈振荡，避免温度变化过大或冻融，易导致溶血。 DNA检测： 4保存不超过7天，-20保存不超过一年，-80长期保存 RNA检测：采集后应尽快分离血细胞、血清/血浆，或加入RNA抑制剂（如trizol）， -20保存 不超过2个月，-80保存不超过半年。 标本处理和保存 血液标本处理操作规程 血清的分离血清的分离 采血时应采用无抗凝剂的采血管； 采血后，室温（2225）放置3060min，加促凝剂时凝集加快（515min)，10001200g离 心10min，吸取上层淡黄色上清

14、液。有凝胶屏障的分离管可保存在4 ，24小时内吸取上层血清； 无凝胶屏障的必须立即吸取上层血清。 保存条件保存条件 常温下不超过8小时；4 不超过48小时；48小时以上的应置于-20保存；提取RNA的应立即置 于-80 保存。避免反复冻融。 标本处理和保存 血液标本处理操作规程 血浆的分离血浆的分离 采血时应采用有抗凝剂的采血管； 采血后，10001200g离心10min，吸取上层淡黄色上清液。有凝胶屏障的分离管可保存在4 ， 24小时内吸取上层血清；无凝胶屏障的必须立即吸取上层血清。 保存条件保存条件 常温下不超过8小时；4 不超过48小时；48小时以上的应置于-20保存；提取RNA的应立即

15、置 于-80 保存。避免反复冻融。 质量控制 标本入库前应经过质量控制，符合质量标准的标本才能入库 符合标本采集、处理的要求，检查采集和处理记录 标本信息采集表填写完整 标本运送符合要求，交接运送记录完整 标本管无空管、无破损、良好密封，标签清晰完整、无脱落 检查标本是否受到污染，核酸质量 标本入库 编号原则 总原则：唯一性、共享性 辅原则：在满足总原则基础上，尽量精简，编号长度尽量保持统一 生物样本库信息表生物样本库信息表 标本入库 标本编号原则 总原则：唯一性、共享性 辅原则：在满足总原则基础上，尽量精简，编号长度尽量保持统一 举例： 2017年收到的第102份标本，类型是粪便，目的用于结肠道菌群分析 1700102D15W21 2017年收到的第256份标本，类型是血清，目的用于心梗的研究 1700256G01BS1 标本