肺炎链球菌的分离和鉴定

1、2021/3/111 2021/3/112 肺炎链球菌肺炎链球菌（S.pneumoniae），俗称 肺炎球菌（pneumococcus）。经常寄居于 正常人的鼻咽腔中，一般不致病，只形成 带菌状态。当机体免疫力下降时才致病。 尤其在呼吸道病毒感染后或婴幼儿、老年 体弱者易发生肺炎链球菌性肺部感染。 2021/3/113 肺炎链球菌不产生外毒素，主要靠 荚膜侵袭力致病。肺炎链球菌主要引起 人类大叶性肺炎，肺炎后可继发胸膜炎、 脓胸，也可引起中耳炎、乳突炎、副鼻 窦炎、支气管炎、心内膜炎、腹膜炎、 关节炎、脑膜炎和败血症等。 2021/3/114 细菌学检验不仅对疾病的病原学诊断有 重要价值，同时

2、对临床治疗的药物选择 也具有十分重要意义。 2021/3/115 一、生物学性状一、生物学性状 2021/3/116 l肺炎链球菌革兰染色呈阳性。球形或矛 头状，成双排列，少呈链状。在组织中 可形成荚膜（人工培养荚膜逐渐消失）， 无鞭毛及芽孢。 2021/3/117 2021/3/118 2021/3/119 2021/3/1110 l（1） 培养基培养基 l肺炎链球菌对营养要求较高，需采 用质量好的哥伦比亚血液平板（ 5 马血或羊血） 。 2021/3/1111 1）标本处理）标本处理 及时将采集标本接种到适当的培养基 上是提高分离率的前提。因为，肺炎链球菌 对干燥、对寒冷的抵抗力均较弱，在

3、标本离 开机体暴露于外界复杂的环境中，其存活率 十分低，不及时接种适当培养基是导致分离 率低的主要原因。 2021/3/1112 l培养基中添加5g/ml庆大霉素有利于肺炎链球 菌的分离。 2021/3/1113 510CO2、35培养2448h。 2021/3/1114 l在营养丰富的培养基上，肺炎链球菌形 成扁平、中间有凹陷的典型菌落，少数 菌可呈粘液型菌落。 2021/3/1115 2021/3/1116 2021/3/1117 2021/3/1118 2021/3/1119 2021/3/1120 2021/3/1121 2021/3/1122 （1）种属特异性抗原：）种属特异性抗原：

4、为菌体多糖抗原，存在 于肺炎链球菌的细胞壁。 （2）型特异性抗原：）型特异性抗原：是存在于肺炎链球菌荚膜 中的一种多糖多聚体，可溶于水，据此抗原可 将肺炎链球菌分为、等个型，其 中、型致病性最强。 （3）菌体核蛋白抗原：）菌体核蛋白抗原：存在于菌体深部，为蛋 白质，无特异性。 2021/3/1123 l肺炎链球菌的鉴定，主要应与甲型溶血 性链球菌鉴别。其中以胆汁溶菌试验、 菊糖发酵和optochin试验最为常用。必要 时可作荚膜肿胀试验或小鼠毒力试验加 以鉴别。在上述试验中，肺炎链球菌均 应阳性，而甲型溶血性链球菌为阴性。 也可用特异性单克隆乳胶或自动化仪器 等相应鉴定卡作鉴定。 2021/3

5、/1124 l 革 兰 阳 性 双 球 菌， 矛 头 状， 不 呈 链； l 血 平 皿 菌 落 呈 草 绿 溶 血， 湿 润， 菌 落 表 面 无 小 白 点； l 培 养 时 间 长 出 现 脐 窝 状； l胆汁溶解试验阳性； l荚膜肿胀试验阳性； l 乳 胶 单 克 隆 抗 体 凝 集 阳 性。 2021/3/1125 l肺炎链球菌在厌氧或二氧化碳环境中溶血能力 大大加强，草绿色溶血环很大，可与其他草绿 色链球菌相区别。 2021/3/1126 该药对肺炎链球菌的作用机制是干扰 其叶酸的合成。 optochin敏感试验方法是药敏试验。 挑取被检菌，密涂于血平板上，贴上含 5g/片的opt

6、ochin纸片，置510%CO2的大 气中（或烛缸），35孵育过夜。抑菌环 直径=14mm为敏感，推断为肺炎链球菌。 抑菌环直径=14mm。 应注意鉴别。 l但大多数肺炎链球菌对苯唑西林（Oxacillin,OX） 是敏感的(除外PRP)，而缓症链球菌和口腔链球 菌对OX耐药。这可作为辅助鉴别点。 2021/3/1128 2021/3/1129 2021/3/1130 2021/3/1131 2021/3/1132 2021/3/1133 自溶酶自溶酶是一种L-丙氨酸-N-乙酰胞壁酰胺酶， 能切断肽聚糖上L-丙氨酸与N-乙酰胞壁酸间的 连接键，从而破坏细胞壁，使菌溶解。 自溶酶在菌生长的稳定期

7、被激活，也可被 胆汁或胆盐等活性物质激活，从而促进培养物 中的菌体溶解。肺炎链球菌胆汁溶菌试验为阳 性，甲型溶血性链球菌的胆汁溶菌试验为阴性。 2021/3/1134 （1）试管法: 取新鲜培养物分装于两支试管内（每支 1ml），其中一支加入10%的去氧胆酸钠溶液 0.1ml或纯牛胆汁0.2ml，另一支加入无菌盐水 两滴（对照），15min后，阳性者细菌被溶解， 试管内液体呈透明状，阴性者无变化。 2021/3/1135 2021/3/1136 （2）平皿法）平皿法: 加一滴10%的去氧胆酸钠溶液或纯牛胆汁 于被检菌菌苔上，15min后，阳性者细菌菌苔 被溶解，阴性者无变化。试验应有已知肺炎链

8、 球菌作阳性对照。 2021/3/1137 2021/3/1138 2021/3/1139 2021/3/1140 结果准确、快速、特异性高。 2021/3/1141 2021/3/1142 2021/3/1143 l 取一滴抗血清与一滴菌悬液混匀，加少量 美蓝液混合后加盖片，室温1020min后，用油 镜检查，如查到菌体呈兰色，周围绕有界限明 显未染色的膨大空白圈为阳性。可用于肺炎链 球菌的分型。 2021/3/1144 l 包括血清凝集试验、SPA（葡萄球菌蛋白 A）协同凝集试验、反向乳胶凝集试验等方法。 2021/3/1145 l l菌 种 Optochin 胆汁 胆 汁 6.5%NaC

9、l 吡咯烷 卫星现象 CAMP 血清群 l 敏 感 溶菌 七叶苷 肉汤 酮 酶 l l肺炎链球菌 + + l牛链球菌 + D l无乳链球菌 d + B l草绿色链球菌 l营养变异链球菌 + + l l*d.不同菌株 2021/3/1146 lK-B法：法：采用Mueller-Hinton琼脂5羊血 培养基。直接菌落悬液法(0.5麦氏单位菌液， 在15分钟内接种完)作为接种液。 l稀释法：稀释法：包括琼脂稀释法、肉汤稀释法和 Etest法。 l培养条件：培养条件：为35 、5CO2培养2024小 时。质控菌株ATCC 49619。 2021/3/1147 l青霉素G敏感均可直接用青霉素G进行治疗; l青霉素G中度耐药株可用大剂量青霉素G进 行治疗； l如重度耐药可选用三代头孢菌素加万古霉 素或利福平进行治疗。 2021/3/1148 l1. 肺炎链球菌寄居