旋光度法测定蔗糖酶促蔗糖转化反应的米氏常数实验数据处理讲述

1、始态浓度-旋光度曲线25.0020.0015.0010.005.00；二 45.451RA2 = 0ctu. 1 joyg珂八 U. UU0 0 -5.00)C00.1：00 0 2)CO 0.3DO 0.4I0D 0.5)00 0.6100惑牡亲列2纟吏性嗦列2)蔗糖a 0标准浓度曲线Ca0矫正0. 501322. 9522.890.250611.4511. 390.20059. 509. 440.12535. 805. 740.10024.954.890.00000. 05-0.01终态标准浓度-旋光雯曲线、a d1 0.2 0.30.40.50Ji%-to 00：R2 = 0xtO. 1

2、379926a8标准浓度曲线ca oo矫正0.5-5. 46-5.40. 25-2. 46-2.40.2-1.81-1.750. 125T36-1. 30. 1-0 96-0.90-0 010. 05浓度0. 05时间旋光度分钟(min)秒(s)T(s)a矫正a02191392. 152. 100. 8916351851.601.550. 69713342141.401.350. 62643562361.251.200. 57334362761. 151. 100. 53795213211.000. 950. 48496143740. 800. 750. 4142T图StatisticsSta

3、tisticsValueStandardvalueErrorStandard ErrorReduced Chi-Sqr Adj. RSquare578.35485424. 1007924.81417 308. 500341287.378150.80259浓度0. 06时间旋光度分钟(min)秒(s)T(s)a矫正ae1591191.901.850. 70182441641. 551. 500. 59863352151.251.200. 51014412811. 201.050. 46595393391. 000. 750.37746444040.650. 600.33327484680.600

4、. 550.31849145540.600. 550.3184。丁图AABBStatisticsStatisticsStandardStandardValueErrorValueErrorReduced ChiSqr Adj. R-Square-587. 30141283.40519765.6761181.248331801.605540. 921831000 浓度0. 08时间旋光度分钟(min)秒(s)T(s)a矫正a02211414. 254.191. 09303382183. 002. 940. 81624222622. 552. 490. 71665143142. 502. 440.

5、 7055663662. 352. 290. 67237101301.901. 840. 57277594791.651.590. 51738425221.301.240. 43991096091. 151. 090. 406613278070. 630. 570. 291514468860. 250. 190. 207415489480. 200. 140. 1963164710070. 200. 140. 196317471067-0. 05-0 110. 141018491129-0. 35-0 410. 074520561256-0. 10-0 460. 0635 BNev/Funct

6、iom (o.o0.51.0AAABBStatisticsStatisticsAdjValueStandard Error ValueStandard Error Reduced ChiSqrR-Square771.78924116. 94457188. 2675653.426015456.259530.95808浓度0. 10时间旋光度分钟(min)秒(s)T(s)a矫正a0291291. 003. 940. 86903162263. 703. 640. 81594312713. 603. 540. 79816303902. 902. 810. 67417254452. 602. 540.

7、62098285082. 302. 240. 56789135832. 051.990. 523511276871.701. 610. 461413208001. 201. 110. 372814228620. 900. 810. 3197171 110610. 200. 140. 1956185011300. 100. 040. 177924321472-0. 30-0 360. 107027591679-0. 70-0. 760. 0361 BNewFunction!(1500-1000- CD500-0.00.20.40.6AAABBStatisticsStatisticsValueSt

8、andardValueStandardReducedAdj.ErrorErrorChiSqrR-Square854. 3052759. 46159266.4734326. 060651790.008580. 99181浓度0. 15时间旋光度分钟(min)秒(s)T(s)a矫正a02351556. 156. 390. 93364142545. 855. 790. 8627573075. 755. 690. 85088191994. 651. 590. 72089135534. 304. 240. 67941096093. 903. 840. 632112527723. 002. 910. 52

9、5713258052. 752. 690. 496214138532. 602. 540. 478416279872. 302. 240. 4430183611161.501. 440. 3484221313330. 800. 740. 2656231413940. 700. 640. 2538272216120. 150. 090. 188832521972-0. 50-0. 560. 111938592339-1. 05-1. 110. 046940172117-1. 10-1. 160.041044252665-1. 30-1. 360.0173T图 BNewFunctionl (200

10、0-co1000-0.00.5A1.0AABBStatisticsStatisticsStandardStandardAdj.ValueErrorValueErrorReduced ChiSqrR-Square1169. 0381851.86019391. 3152319.467672461. 855330. 99593浓度0. 30时间旋光度分钟(min)秒(s)T(s)a矫正a01238311. 5511. 190. 86525233238. 958. 890.7114925427. 557. 490. 628512117617.056. 990. 599014368766. 055.99

11、0. 5398165410111. 701. 610. 4599225513753.803. 740. 4067AABBValueStandardValueStandardErrorError-2000. 83841882.920132821.95907637. 57974StatisticsReducedChi-Sqr6875.2044StatisticsAdj.R-Square0. 96368soABSO/ROR00. 05578. 3548524.81417603. 169028.28955E-05/)AG一QZ) 1 f 11 70 Q 刁人 ACc /W）彳77U. l/Cz220

12、/ JU丄 ttjliU i Cz JJL i D.i0. 08771.78924188. 26756960.05688. 33284E-050. 10854.30527266. 473431120.77878. 92237E-050. 151169.03818391. 315231560.353419.61321E-05non t inno rUOU厶 UUU11Bi丄.丄厶UuuU. UUUJOUH1Hanes-Woolf 法得截距纵坐标截距KM/rM=167.02KM=0.01774mol/L3rM=1.063*10A(-4)mol/L3【思考题】1、1、有文献指出，蔗糖转化反应的产物果

13、糖可能对蔗糖酶产生竞争抑制作用，而葡萄糖 可能产生非竞争抑制作用。试分别讨论这两种情况下，本实验采用的数据处理方法是否仍然 有效？如有偏差，应如何修正？答：果糖一一竞争性抑制剂通常与正常的底物或配体竞争同一个蛋白质的结合部位。这种抑 制使得Km增大，而Vmax不变。对本实验数据处理有很大影响匍萄糖一一抑制剂在酶的活性部位以外的部位与酶结合，不对底物与酶的活性产生竞争。 抑制剂不仅与游离酶结合，也可以与酶-底物复合物结合的一种酶促反应抑制作用。酶-底物 -抑制剂复合物（ESI）不能进一步释放出产物。这种抑制使得Vmax变小，但Km不变。但 是需抑制剂结合的部位阻碍底物和酶的结合，即产生空间位阻也

14、可以造成竞争性抑制。对本 实验数据处理有较小的影响。2、除本实验所使用的作图法外，酶催化动力学反应数据处理还有Lineweaver-Burk作图法 （双倒数作图法）、Eadie-Hofstec作图法和枷对K.”作图法等，试分別用这三种方法重新计算本实验结果，并分析造成拟合相关性变差的原因。双倒数法Eadie-Hof st ee 法由上图可知用其他方法作图，拟合性变得很差。因为本实验上而直接拟合的参数是A和B. 而由此直接得到S0/R0=A+B,后续的乘除法处理，因不同的参数数量级差异巨大，会导致当 较小的数量级参于拟合时，差值分不开，导致拟合性变差。而R0本身便是较小的数量级， 后面的双倒数法中1/rO就分不开差值，同理Eadie-holfstee法中，R0直接作为横坐标，也无 法进行拟合。【思考及讨论】1、