细胞工程试题

1、2014-2015第二学期细胞工程期中考试试卷与答案一、名词解释i细胞工程：以生物细胞、组织或器官为研究对象，运用工程学原理，按照预定目标，改变生物性状生 产生物产品，为人类生产或生活服务的科学。2. 外植体：指用于离体培养的活的植物组织、器官等材料3. 细胞株：将所得到的纯净细胞群，以一定的密度接种在lmm厚的薄层固体培养基上，进行平板培养，使之形成细胞团，尽可能地使每个细胞团均来自一个单细胞，这种细胞团称为“细胞 株”。4. 愈伤组织：在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在外植体切面上产生。 5离体无性繁殖：简称离体繁殖，是指利用组织培养方法进行植物离体培养，在短期内获得

2、大量遗传性一致个体的方法。6. 继代培养：更换新鲜培养基来繁殖同种类型的材料（愈伤组织芽等）。7. 体细胞杂交：（原生质体融合）指在人工控制条件下不经过有性过程，两种体细胞原 生质体相互融合产生杂种的方法。8. 细胞分化：即由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的改变，或发育方式改变的过程.9. 细胞系：经过再培养后而形成的具有增殖能力、特性专一、类型均匀的培养细胞10. 细胞再分化：即脱分化后的分生细胞在特定的条件下，重新恢复细胞分化能力，并经历器官发生形成单极性的芽或根，或经历胚胎发生形成双极性的胚状体，进一步发育成完整植物体，这 一过程称为细胞再分化。11. 人工种子：指植物离体培养中产生

3、的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的 人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。12.离体受精：（离体授粉）在无菌条件下培养未受精脂肪或胚珠和花粉，使花粉萌发进入胚珠，完成受精作用。13.悬浮培养：是将植物游离细胞或细小的细胞团，在液体培养基中进行培养的方法。14.看护培养：是用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂和增值的方法。15.生质体：指除去细胞壁的细胞或是说一个被质膜所包围的裸露细胞。116.传代：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养7.克隆：一个克隆的细胞群体是从一个单一母细胞繁殖而来。分离单一细胞并使其繁殖为一细胞群体方法18.原代培养：也

4、称初代培养期。从体内取出组织接种在培养瓶中培养到第一次传代前阶段,般持续1-4周。19. 有限细胞系：经继代培养后细胞系即使培养条件均能满足细胞繁殖生长，它们也只能 在有限的时间内生存，经过运动世代后细胞将逐渐死亡。20. 永久细胞系；大多数细胞系在有限的代数内以不变的形式增殖，当超过有限世代后，在体外永久存活 下来发育成永久细胞系或称连续细胞系。二、填空题1. 实验室的物理防护是由隔离的设备、实验室的设计、实验实施等三个方面组成，根据其密封程度的不同，分为P1、P2、P3、P4四个生物安全等级。典型的P4实验室由更衣区、过滤区、缓冲区、消毒区、核心区组成。2. 细胞系是原代培养经初步纯化获得

5、的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一细胞群体。3. 细胞株是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。4.干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。干细胞的增殖特性为缓慢性和自稳性。5.培养细胞的生长特点为贴附、接触抑制和密度抑制。6.植物细胞培养的原理是基于动物细胞的全能性。7.植物细胞悬浮培养的方法为分批培养法、连续培养法和半连续培养。8.植物组织培养中培养材料的消毒过程中，消毒的基本原则是既要杀死附着其上的微生物又不损伤材料。”9.细胞生长测定的一般方法为：细胞计数、测定细胞密实体积、细胞鲜重或干重。10.体外培养的细胞根据其生长方

6、式主要分为贴附型细胞和非贴附型细胞。|11.人工种子的组分包括胚状体、人工胚乳和人工种皮。12.细胞融合主要经过了两原生质体或细胞互相靠近、细胞桥形成、胞质渗透、细胞核融合几个步骤。其中细胞桥形成是最关键的一步。13.花粉单倍体植株的鉴定方法有形态鉴定、细胞学鉴定、杂交鉴定、分子标记鉴定。14.胚胎工程主要是对哺乳类动物的胚胎进行某种人为的工程技术操作，然后让它继续发育，获得人们所需要的成体动物。15. 培养条件下动物贴壁细胞可分为成纤维细胞；上皮细胞；游走细胞；多形细胞四种 类型。16. 原生质体酶解液中有高浓度的甘露醇，以保持一定的渗透压；同时含质膜稳定剂，以利质膜稳定。19.根据融合时细

7、胞的完整程度，原生质体融合可分为对称融合和非对称融合两大类型。20.根据包被的程度，可将人工种子分为三大类：裸露的或休眠的繁殖体；人工种皮包被的繁殖体；水凝胶包埋再包被人工种皮的繁殖体。三、选择题1. 不适合用胰蛋白酶消化的组织是（D）A.肝 B.肾C.上皮组织 D.乳腺2. 下列有关动物细胞培养的叙述不正确的是（C）A. 通过动物细胞培养可获得大量的细胞分泌蛋白B 动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理，以使细胞分散C 细胞癌变都发生于原代培养过程中D 目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内的，以保持其正常核型3. 尽管各种合成培养基给动物细胞培养带来极大方便，但许多实验表明，单纯使用合成培

8、养基细胞的贴壁增殖效果常常不理想。因此，在使用时通常仍然需要加入一定量的（C）A.平衡盐溶液B. 琼脂糖C.动物血清D.甘露醇4. 制备人工种子的关键是控制（A）A.胚状体的同步发育B.人工种皮的同步发育C.胚状体的单独发育D.人工种皮的单独发育5. 细胞融合中使用（C）方法可以在显微镜下直接定向诱导细胞融合。A.仙台病毒法 B.PEG诱导C.电融合诱导法D.高Ca+和pH诱导法6. 中胚层来源的细胞在体外培养时一般表现为哪种形态（A）A.成纤维细胞型细胞B.多形型细胞C上皮型细胞D.游走型细胞7. 在每一代贴附生长细胞的生长过程中，哪一个时期的细胞数随时间变化成倍增长,活力最佳,最适合进行实

9、验研究（D）A.稳定期B.衰亡期C.潜伏期 D.对数生长期8. 以下哪种方法或技术适合进行动物细胞的大规模培养？ （D）A.悬滴培养法 B.培养瓶培养法C.旋转管培养法D.多孔载体培养技术9. 单克隆抗体制备选择亲本时应选择（A）A. 骨髓瘤细胞系和免疫动物属于同一品系B. 骨髓瘤细胞系和免疫动物属于不同品系C. B淋巴细胞和骨髓瘤属细胞属于不同品系D. B淋巴细胞与骨髓瘤细胞无亲缘关系10. 下列关于哺乳动物胚胎发育和胚胎工程的叙述，正确的是（D）A .卵裂期胚胎中细胞数目和有机物总量在不断增加B .胚胎分割时需将原肠胚的内细胞团均等分割C .胚胎干细胞具有细胞核大、核仁小和蛋白质合成旺盛等

10、特点D 胚胎干细胞是一类未分化细胞，可从早期胚胎中分离获取11.（C）的建立是动物细胞规模化培养的前体。A.原代细胞系B.继代细胞系C.永久细胞系D.有限细胞系12.细胞平板培养的效果一般用（D）来衡量。A.生长率B.分裂率 C.再生率D.植板率13.影响体细胞胚发生的激素因素中，应用最为广泛的是（D）。A.IBABAAC.BAD.2,4-D14.动物细胞培养渗透压的维持一般采用（A）。A.平衡盐溶液B.蔗糖溶液C.无机盐溶液D.有机物溶液15.尽管各种合成培养基给动物细胞培养带来极大方便，但许多实验表明，单纯使用合成培养基细胞的贴壁增殖效果常常不理想。因此，在使用时通常仍然需要加入一定量的（

11、C）。A.平衡盐溶液B.琼脂糖C.动物血清D.甘露醇16.冋压灭菌引起培养基 pH变化，般灭菌后培养基pH将（A）。A.下降0.5左右B.上升0.5左右C.下降1.5左右D.上升1.5左右17.细胞株的特点是（B）。A 遗传物质没有改变，可以无限传代B 遗传物质发生改变，且有癌变特点，可以无限传代C 遗传物质没有改变，不可无限传代D .遗传物质发生改变，不可无限传代18.不属于干细胞特征的是（D）A.多呈圆形或椭圆形B.核/质比大C.具有多能性D.增殖速度极快19.不能诱导细胞融合的是（D）A.PEG B. 电激C.仙台病毒D.慢病毒20.不能用于分离外周血中血细胞的方法（CA.自然沉降法B.

12、差异沉降法C.低速离心法D.氯化铵分离法 四判断题1、接种器械一般采用照射灭菌。（X）2、IAA通常采用湿热灭菌。（X）3、紫外照射灭菌的时间为 5ho（x）4、细胞松弛素B能引起植物原生质体排核，因此可以获得胞质体。（5、控制细胞内外水的冻结状态是细胞冰冻保存技术的关键。（V）6、能被酚臧红花染成红色的细胞为活细胞。（X）7、选择性抗生素浓度越高，假转化体比例越低，选择效果越好。（X）8、胚培养可用于克服杂种不活性。（V）9、分离原生质体的原始细胞状态影响其脱分化的进行。（V）10、一般认为原生质体出芽与培养基成分有密切关系。（V）11、植物快速繁殖中，繁殖系数越高越好。（X）12、褐变是植

13、物离体组织中的多酚氧化酶被激活造成的。（V）13、 继代培养次数越多，变异率越高（V）14、油污严重的器皿应采用酸洗法。（X）15、不同来源的原生质体融合需要诱导才能实现。（V）16、 种质超低温保存成功的关键是降温冰冻过程中避免细胞内脱水。（X）17、细胞密度是影响细胞培养的重要因素。（V）18、 原生质体受体系统是最好和应用最广的遗传转化受体系统。（X）19、 玻璃化法保存的材料宜采用慢速化冻，以减少次生结冰对细胞的伤害。（X）20、原生质体培养是体细胞杂交的基础。（V）五简答题1. 简述DNSO在细胞冻存时的应用。DMSOI细胞冻存保护剂，是一种渗透保护剂，对细胞无明显的毒性，可迅速透入

14、细胞， 降低冰点，提高细胞膜对水的通透性，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结牵透出细胞外， 在细胞外形成冰晶， 提高细胞内电解质的浓度， 减少细胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损 伤。2. MTT比色法的主要原理是什么？MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒 体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。 二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在 490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。|3. 影响细胞生长的因素有哪些？为什么？温度：在低温下，细胞的代谢活力及核分裂降低；过高，对细

15、胞生长不利渗透压： 细胞在高渗或低渗溶液中，都会立即发生皱缩或肿胀气体环境和PH :氧气和二氧化碳制细胞生存必需的条件之一；PH过高或过低都会影响细胞生长无毒和无菌：在例题环境中，一旦有害物质或细菌污染，可导致细胞死亡辐射线和超声波：都会导致某些细胞死亡细胞接种浓度：适宜的接种浓度可以促使细胞增殖容器转动速度和悬浮搅动速度：营养流动和充分的氧化作用。4. 胚状体同步发育方法及原理（1）抑制剂法：在细胞培养初期加入细胞分裂抑制剂，去除抑制剂后细胞可同步发育。（2）低温法：低温处理抑制细胞分裂，再恢复正常温度使细胞分裂同步化。（3）渗透压法：不同发育时期的胚状体对渗透压的要求不同，用一定的渗透压使

16、胚状 体停止在某一阶段，然后再使其同步发育。（4）通气法：细胞分裂旺盛时有大量气体（如乙烯）生成。可以通过在培养基中通入 乙烯或氮气控制细胞同步分裂。（5）分离筛选法：用不同孔径的筛网将不同发育时期的胚状体分离开来，也可以采用 密度梯度离心法来选择不同发育时期的胚状体。5. 试分析论述利用细胞培养生产植物次生产物时，提高细胞次生产物产量的途径。（1）选择适宜的起始材料：首先选择能够高效合成目的产物的植物种类。选取自然状 态下能够积累次生产物部位的细胞，这样的细胞经过培养以后常常具有合成目的产物的能力， 或较容易诱导合成目的产物。（2） 培养基成分的影响： 培养基的营养成分一方面要满足植物细胞的生物量增长，另一 方面要使细胞能合成和积累次生产物。一般来说，增加培养基的 N、P和K的浓度能促进细胞 生长，而适当增加糖浓度则有利于次生产