豆粕中尿酶活性测定

1、豆粕中酶活性测定尿酶(Urease):生大豆中含不等量尿酶，尿酶本身无营养意义，但是它与抗胰蛋白酶 含量接近，而且遇热失活的程度与抗胰蛋白酶相似，因此以尿酶活性用作豆粕加工适宜度的简 单估测指标。但是加工适宜度不仅取决于畜种、年龄和畜禽阶段，也取决于大豆品种及储存状 况。严寒损伤的大豆储存6个月以上，则抗胰蛋白酶含量会增加，但是未受损伤的大豆就没有 这种现象。附 录A大豆制品中尿素酶活性测立方法GB/T 8622-1988适用范围本标准适用于由大豆制得的产品和副产品中尿酶活性的测左。本法可确认大豆的湿热 处理程度。泄义本标准所指尿素酶活性泄义如下：在(30土。C和pH7的条件下，每分钟每克大豆

2、制品分解尿素所释放的氨态氮的亳克数。原理将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30C保持30min,尿素酶催化尿素水 解产生氨的反应。用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴仪器设备A. 4. 1样品筛：孔径200mm;A. 4.2酸度计：精度，附有磁力搅拌器和滴左装置;A. 4. 4 试管：直径18mm,长150mm,有磨1塞子；A.4.5精密计时器；A.4.6粉碎机：粉碎时应不生强热（例如球磨机）A. 4. 7分析天平：感量；A.4.8 移液管：10mLo试剂和溶液A. 5.1尿素：分析纯；A. 5.2磷酸氢二钠：分析纯；A. 5.3磷酸二氢钾：分析纯；A. 5. 4尿素缓冲

3、溶液至：磷酸氢二钠和磷酸二氢钾溶于水并稀释至1000mL,再将30g 尿素溶在此缓冲溶液中，可保存1个月A. 5.5盐酸：分析纯，c（HCL）二L溶液;A. 5.6氢氧化钠：分析纯，c（NaOH）二L标准溶液。试样的制备用粉碎机将10g试样粉碎，使之全部通过样品筛。对特殊试样（水分或挥发物含量较高 而无法粉碎的产品）应先在实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失 重计算在内。测定步骤称取约已粉碎的试样，称准至，转入试管中（如活性很高只称试样），移入10mL尿素缓冲溶液，立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于(30土。C恒温水浴中，准确计时保持30mino即刻 移入10mL盐酸溶液，

4、迅速冷却到20Co将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次, 立即用氢氧化钠标准溶液滴泄至。另取试管作空白试验，移入10mL尿素缓冲液，10mL盐酸溶液。称取与上述试样量相 当的试样，也称准至，迅速加入此试管中。立即盖好试管并剧烈摇动。将试管豊于(30C的 恒温水浴，同样准确保持30min,冷却至20C,将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试 管两次，并用氢氧化钠标准溶液滴左至。测定结果的计算A. 8.1计算方法以每分钟每克大豆制品释放氮的亳克量表示的尿素酶活性U,按下式计算：14Xc(V0-V)30XmU=式中：c 氢氧化钠标准溶液浓度，mol/L;V0 空白试脸消耗氢氧化钠溶液

5、体积，mL;V 测左试样消耗氢氧化钠溶液体积，mL;m试样质量，g。注：若试样经粉碎前的预干燥处理时，则14Xc(V0-V)30XmU= X (1-S)式中：s预干燥时试样失重的百分率。A. 8. 2重复性同一分析人员用相同方法，同时或连续两次测左结果之差不超过平均值的10%,以其算术平均值报告结果。附录B大豆制品中尿素酶活性快速检验将1份尿素、5份水，10份豆粉或豆粕置于小塑料袋中，封口 30秒，如豆粕中有尿酶存在，它会将尿素转化为氨，打开袋口可闻到氨气，正常豆粕无气味。附录C大豆制品中尿素酶活性酚红法检测取约粉碎好的试样，放入试管中，加5mL水、尿素和2滴的酚红乙醇(20%)溶液，振摇10秒。观察溶，液颜色并记录时间。lmin内变粉红色，酶活很强;15min变色